对内源免疫球蛋白表达的抑制制造技术

本发明专利技术提供了抑制非人转基因动物中内源免疫球蛋白的表达的新方法，所述非人转基因动物经工程化，以表达一种或几种人或人源化免疫球蛋白转基因座。通过仅在表达内源免疫球蛋白的Ｂ细胞中但是不在表达人（源化）免疫球蛋白的细胞中选择性表达自杀基因如毒素，抑制转基因非人动物中内源免疫球蛋白的表达。该方法允许在转基因动物的血液、奶或者卵中主要表达编码人源化或者人抗体的转基因座。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抑制非人转基因动物中内源免疫球蛋白的表达的方法，所述方法通过在表达内源免疫球蛋白的B细胞中但不在表达外源免疫球蛋白或者免疫球蛋白链，如人或者人源化免疫球蛋白或者免疫球蛋白链的B细胞中选择性表达自杀基因来实现。该方法允许例如在转基因非人动物的血液、奶或者卵中主要表达人或者人源化抗体。
技术介绍
Pluschke等人，Journal of Immunological Methods 21527-37(1998)已经描述了表达人-小鼠嵌合抗体的小鼠的产生。表达人免疫球蛋白多肽的小鼠的产生已由Neuberger等人，Nature 338350-2(1989)；Lonberg等人，Int.Rev.Immunol.13(1)65-93(1995)；和Bruggemann等人，Curr.Opin.Biotechnol.，8(4)455-8(1997)描述；使用BAC克隆产生转基因小鼠已由Yang等人，Nat.Biotechnol.15859-65(1997)描述。表达人抗体的奶牛的产生已经由Kuroiwa等人，Nature Biotech 20(9)889-894(2002)描述。动物中的基因转移(Transgenesis)已经由Wall RJ，Theriogenology57(1)189-201(2002)描述。转基因兔的产生已经由Fan，J.等人，PatholInt.49583-94(1999)；和Brem等人，Mol.Reprod.Dev.4456-62(1996)描述。对转基因鸡的生产已经由Etches等人，Methods inMolecular Biology 62433-450(1997)；和Pain等人，Cells TissuesOrgans 165(3-4)212-9(1999)；和Sherman等人，Nature Biotech161050-1053(1998)描述。具有受损的免疫球蛋白表达的兔已经由Chen等人，J.Immunol.1502783-2793(1993)；和Lamoyi E，和Mage RG.，J.Exp.Med.1621149-1160(1985)描述。γ-球蛋白血(globulinemic)鸡已经由Frommel等人，J.Immunol.105(1)1-6(1970)；和Benedict等人，Adv.Exp.Med.Biol.88(2)197-205(1977)描述。从细胞克隆动物已经由T.Wakayama等人，Nature 394369-374(1998)；J.B.Cibelli等人，Science 2801256-1258(1998)；J.B.Cibelli等人，Nature Biotechnology 16642-646(1998)；A.E.Schnieke等人，Science 2782130-2133(1997)；和K.H.Campbell等人，Nature 38064-66(1996)描述。兔的核转移克隆已经由Stice等人，Biology ofReproduction39657-664(1988)，Challah-Jacques等人，Cloning andStem Cells 8(4)295-299(2003)描述。在PCT公布号WO 92/03918、WO 02/12437，和美国专利号5,545,807、5,814,318；和5,570,429中已详细描述了对表达人(源化)免疫球蛋白转基因座的非人转基因动物的生产和从此类转基因动物生产抗体。在美国专利号5,416,260中示例了嵌合哺乳动物宿主的同源重组。在美国专利号5,567,607中描述了向胚胎中导入DNA的方法。在美国专利号5,453,357中描述了胚胎干细胞的维持和扩增。在Leong等人，Science，220515-7，(1983)；Maxwell等人，CancerResearch，464660-4664，(1986)；Palmiter等人，Cell，50435-443，(1987)；Maxwell等人，Cell，514299-4304，(1991)；Maxwell等人，Leukemia and Lymphoma，7457-462，(1992)；Aguila等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，9210192-10196(1995)；Grieshammer等人，DevelopmentalBiology，197234-247，(1998)；Bartell等人，Biology of Reproduction，63409-416(2000)；Erlandsson等人，J.Exp.Med.，194557-570(2001)；Lee等人，Human Gene Therapy，13533-542(2002)中已经描述了使用基于毒素的方法的自杀基因。在(Methods in MolecularMedicineSuicide Gene Therapy，Methods and Reviews，Caroline JSpringer编著，Humana Press，2004)中描述了使用非毒素前体药物(prodrug)-酶方法的自杀基因。Palmenberg等人，Virology 190754-762(1992)，Ryan等人，J GenVirol 722727-2732(1991)，Donnelly等人，J Gen Virol 821027-1041(2001)，Donnelly等人，J Gen Virol 821013-1025(2001)，Szymaczak等人，Nature Biotech 22(5)589-594(2004)已经描述了含有2A肽序列的病毒蛋白质的切割活性。Kolb A.F.Cloning Stem Cells 4165-80(2002)描述了重组酶和它们的性质。其识别并催化两条核酸中非常特异的序列之间的同源重组的位点特异性重组酶是已知的。例如，属于位点特异性重组酶的整合酶家族的φC31和R4是已知的，Groth等人，Proc.，Natl.Acad.Sci.，975995-6000(2000)；Olivares等人，Nature Biotechnol.，20(11)1124-8(2002)。假-attP位点在一些基因组(包括人和小鼠基因组)中是天然的，Thyagarajan等人，Mol.and Cell.Biol.，213926-3934(2001)。φC31整合酶介导的、8.9kb的大VII型胶原cDNA在体外向患者皮肤初级祖细胞的基因转移已经由Ortiz-Urda等人，NatureMedicine，81166-1170(2002)报导。Hollis等人，Repro.Biol.andEndocrinol.，179(2003)已经展示了φC31、TP901-1和R4噬菌体整合酶在操作转基因动物中的用途。Erlandsson等人，J Exp Med 194(5)557-570(2001)，Maxwell等人，Cancer Research 514299-4304(1991)和Palmiter等人，Cell 50435-443(1987)已经描述了对细胞(包括B细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种方法，用于在携带外源免疫球蛋白转基因座的非人转基因动物的Ｂ细胞中选择性抑制内源免疫球蛋白的产生，所述方法包括：在所述非人转基因动物的产生内源免疫球蛋白的Ｂ细胞中表达至少一种自杀基因，但是在产生外源免疫球蛋白的Ｂ细胞中不表达所述自杀基因，从而产生内源免疫球蛋白的Ｂ细胞被耗竭，并且所述内源免疫球蛋白的产生受到抑制，而不抑制所述外源免疫球蛋白的产生。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：R比洛，J普拉策尔，
申请(专利权)人：人类多克隆治疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]