The invention relates to a method for separation and identification of Verticillium dahliae, which is characterized in that the collected disease like paper preservation, fresh disease like flame burning method, drying disease samples by sodium hypochlorite disinfection of pathogenic bacteria, purification to obtain single spore strains, save 70 C. Scraping the shop with the mycelium of PDA glass paper on the extraction of genomic DNA, 2 1/ND and ND pathotypes 2 PCR detected by primer D 1/D. The detected bands were amplified, rDNA ITS section ITS1/ITS4 with universal primer PCR, results of the BLAST sequencing after purification, so as to identify whether Verticillium dahliae. The invention avoids sequencing comparison of all strains, greatly shortens the time of pathogen identification, and has important value for breeding and comprehensive control of Verticillium wilt.
【技术实现步骤摘要】
一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法
：本专利技术涉及一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法。
技术介绍
：大丽轮枝菌(Verticilliumdahliae.Kleb.)是世界性的土传植物病原真菌，属于子囊菌亚门(Ascomycota)、子囊菌纲(Sordariomycetes)、轮枝菌属(Verticillium)，广泛分布在温带和亚热带地区，可危害200多种双子叶植物，导致棉花、茄子、草莓、番茄、马铃薯等多种重要的经济作物和园艺作物发生黄萎病，造成重大经济损失。据统计，在全球范围内每年导致的农业经济损失就达到数十亿美元。在国内，仅从棉花的统计数据来看，由大丽轮枝菌引起的黄萎病数次大规模爆发，造成极大的危害。由于大丽轮枝菌变异频繁，导致致病机理复杂、抗病育种滞后、抗病品种抗性丧失过快，难以有效防止黄萎病的暴发。因此，有效的识别鉴定病原菌，对于抗病育种和病害的综合防治具有重要意义。在大丽轮枝菌的众多寄主作物中，仅仅番茄和莴苣这2种作物表现出对大丽轮枝菌的小种特异性抗性，因此，目前只有危害番茄和莴苣的大丽轮枝菌被划分为2个生理小种，race1和race2。而危害其他作物的大丽轮枝菌...
【技术保护点】
一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法，其特征在于：a、病样的采集：在黄萎病地中，选择症状典型的重病株；剪取植株的一段主干，去除侧枝；装于纸质信封中或者用纸包好；在信封或报纸上写明采集地点，采集品种，采集人和采集时间；对病样进行编号，室温晾干，4℃保存；b、病原菌的分离：新鲜的病样采用火焰灼烧法，在超净台中，将剪刀、镊子分别蘸酒精后，再将酒精烧去，重复两次，进行消毒；然后将病杆在70％的酒精中浸过后，将酒精烧去，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去；然后将维管束剪成小块(1cm×2cm)，用镊子选取小块变色的维管束组织，移至含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4‑5个小块，...
【技术特征摘要】
1.一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法，其特征在于：a、病样的采集：在黄萎病地中，选择症状典型的重病株；剪取植株的一段主干，去除侧枝；装于纸质信封中或者用纸包好；在信封或报纸上写明采集地点，采集品种，采集人和采集时间；对病样进行编号，室温晾干，4℃保存；b、病原菌的分离：新鲜的病样采用火焰灼烧法，在超净台中，将剪刀、镊子分别蘸酒精后，再将酒精烧去，重复两次，进行消毒；然后将病杆在70％的酒精中浸过后，将酒精烧去，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去；然后将维管束剪成小块(1cm×2cm)，用镊子选取小块变色的维管束组织，移至含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4-5个小块，28℃培养5-7d；如果病杆特别干燥，不适合用火焰灼烧法，则采用次氯酸钠消毒法，在超净台中，将剪刀、镊子分别蘸酒精后，再将酒精烧去，重复两次，进行消毒；将病杆用自来水冲洗干净晾干，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去，再将病杆剪成约1cm×2cm大小的小块；然后置于70％的乙醇中2-5min后，用无菌水洗涤1次；再将病杆小块移至4％次氯酸钠中8-10min，然后用无菌水中洗涤4-5次；用镊子选取小块变色的维管束组织，移在含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4-5个小块，28℃培养5-7d；c、病原菌的纯化与保存：在超净台中，根据平板中病杆小块周围长出菌落的形态，选取菌落边缘少量菌丝块接种于PDA平板上，28℃培养3-5d。同时，挑取少量菌丝加入含有1mL无菌水的1.5mL的离心管中，涡旋振荡1min，取10-20μL涂布在PDA平板中，25℃培养至长出单克隆，挑出单克隆至装有液体PDA培养基的三角瓶中，25℃，150r/min摇床培养3-7d。取摇好的菌液...
【专利技术属性】
技术研发人员：林玲，张昕，邓晟，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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