一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法及其应用技术

一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法及其应用，涉及一种融合蛋白。根据ＰｒｏＴα的基因序列，设计上下游引物Ｐ１和Ｐ２，Ｐ１引入ＢａｍＨⅠ酶切位点，Ｐ２引入ＥｃｏＲⅠ酶切位点。用ＲＴ－ＰＣＲ方法得前胸腺素α原全长基因ｃＤＮＡ，ＰＣＲ产物纯化后与ｐＭＤ１８－Ｔ　　Ｖｅｃｔｏｒ连接，转化ＤＨ５α感受态细胞，对７个单克隆基因序列和参考的ｐｒｏＴα的基因序列比对。用ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ双酶切ＰｒｏＴα　　ＰＣＲ产物，将ＰｒｏＴα基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体ｐＧＥＸ　　６Ｐ－１中，转化大肠杆菌ＢＬ２１，加入ＩＰＴＧ，诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，离心取上清电泳，得ＧＳＴ－Ｐｒｏα融合蛋白。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法，其特征在于其包括以下步骤：　　　　１）根据ＰｒｏＴα的基因序列，设计上游引物Ｐ１和下游引物Ｐ２，上游引物Ｐ１和下游引物Ｐ２分别为：　　　　上游引物Ｐ１：５’－ＧＣＧＧＡＴＣＣＡＴＧＴＣＡＧＡＣＧＣＡＧＣＣＧＴＡ－３’，　　　　下游引物Ｐ２：５’－ＧＣＧＡＡＴＣＣＣＴＡＧＴＣＡＴＣＣＴＣＧＴＣＧＧＴＣ－３’，　　　　将上游引物Ｐ１引入ＢａｍＨⅠ酶切位点，将下游引物Ｐ２引入ＥｃｏＲ　　Ⅰ酶切位点；　　　　２）采用ＲＴ－ＰＣＲ方法获得前胸腺素α原全长基因ｃＤＮＡ，将ＰＣＲ产物纯化后与ｐＭＤ１８－Ｔ　　Ｖｅｃｔｏｒ连接，重组载体命名为ＴＰ，转化ＤＨ５α感受态细胞，将鉴定的阳性菌液测序；　　　　３）采用生物学软件ＤＮＡｍａｎ对７个单克隆基因序列和参考的ｐｒｏＴα的基因序列进行比对；　　　　４）用ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ双酶切ＰｒｏＴαＰＣＲ产物，将ＰｒｏＴα基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体ｐＧＥＸ　　６Ｐ－１中，命名为ＰＰ，转化大肠杆菌ＢＬ２１，ＬＢ培养基，３７℃培养，加入ＩＰＴＧ，３７℃诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，沸水浴后离心取上清，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，获得ＧＳＴ－Ｐｒｏα融合蛋白；　　　　５）将４经过转化的转基因ＢＬ２１菌株超声破碎后，离心所获得的上清中含有可溶性的融合蛋白ＧＳＴ－Ｐｒｏα；　　　　６）将上清经过ＧＳＴ亲和层析柱分离纯化获得高纯度的ＧＳＴ－Ｐｒｏα融合蛋白。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周克夫，李俊燕，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]