激发-强化疫苗接种的方法技术

作为用于有效预防ＨＩＶ－１ＣＥＦ０１＿ＡＥ感染的新方法，本发明专利技术提供了激发－强化疫苗接种的方法，所述的方法包括使用重组ＢＣＧ的激发步骤和一个或多个使用重组疫苗的强化步骤，其中用于激发步骤的重组ＢＣＧ和用于强化步骤的重组疫苗两者都具有ＨＩＶ－１ＣＲＦＯ１＿ＡＥ株的至少一种基因。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请的专利技术涉及用于由HIV-1 CRF01—AE林引起的AIDS综合征 的。
技术介绍
1型人类免疫缺陷病毒(HIV-I)的暴发性传播已经成为东南亚国 家的严重问题。在泰国，接近1. 3百万人口感染有HIV-I,并且据称 到2002年底存在接近200000名AIDS患者。最近报道已经证明，在 用药人群的大多数发病病例中发现有CCR5-tropic CRF01-AE病毒(Subbarao等，2000 )，并且目前这种重组形式在该国家中占优势地 位。因此迫切需要开发应该整合CRFO 1—AE衍生的抗原或表位的抗 HIV-1 CRF01-AE的预防性疫苗。现有一些处于III期临床阶段的候选 疫苗例如AIDSVAXB/E重组gpl20 (Be函n等,1999， Migasena等， 2000 )和与AIDSVAX B/E组合的重组金丝雀痘病毒(canarypox virus )。然而，迄今为止其它基于载体的疫苗还未用于开发抗CRFO 1-AE的AIDS疫苗。牛分枝杆菌(#yco6a"er/wz7 6ow、)的减毒BCG林(在下文中， 称为"BCG，，)是一种最普及的用于人的活菌苗，其具有非常低的导致 严重并发症的风险。众所周知这种疫苗诱导强且长效的T辅助细胞1 型应答，该应答对于激活和维持细胞毒性T细胞(CTL)是重要的。已 经有许多报道证明了靶向HIV-1和猿免疫缺陷病毒(SIV)的重组BCG(rBCG)疫苗潜在的免疫原性(Honda等，1995， Lagranderie等，1997， Yasutomi等，1995 )。不过，因为用于人的常规剂量引起低的HIV或 SIV特异性CTL应答，所以尚且没有单独使用重组BCG载体的候选AIDS 疫苗。本申请的专利技术的一些专利技术人已经专利技术了一种重组BCG疫苗，该疫 苗用于针对传染性疾病，特别是AIDS综合征的激发疫苗接种，并申请 了名称为"BCG Vaccine and Utilization Thereof"的专利申请(WO 03/097087 Al:在下文中称为"在先申请1")。在该在先申请l中， 还公开了用于强化疫苗接种的重组痘苗病毒林DIs的用途。
技术实现思路
本申请的专利技术的目的在于通过使用和开发在先申请1的专利技术来提 供新的抗HIV-1 CRF01一AE的疫苗接种策略。为了这一目的，本专利技术人 发现当使用重组BCG作为激发抗原并组合使用其它基于病毒载体的疫 苗作为强化抗原时，能够非常有效地诱导针对HIV-1 CRF01—AE的增强 了的细胞免疫应答，基于此，完成了本专利技术。本申请的专利技术是，包括使用重组BCG 疫苗的激发步骤和一个或多个使用重组疫苗的强化步骤，其中用于激 发步骤的重组BCG疫苗和用于强化步骤的重组疫苗两者都具有HIV-1 CRFO l-AE林的至少一种基因。在所述专利技术中，优选实施方案是两种重组疫苗都至少具有HIV-1 CRFO l-AE林的gag基因。在该实施方案中，更优选的是所述gag基 因编码SEQIDNO: 2的氨基酸序列，并且此外该gag基因具有SEQ ID NO: 1的核苷酸序列。在所述专利技术中，另一个优选的实施方案是重组BCG疫苗的基因被 修饰，以使得每个密码子的第三位由G或C取代且不改变氨基酸。在所述专利技术中，用于强化步骤的重组疫苗是重组痘苗病毒林DIs 也是优选的实施方案。在该实施方案中，更优选的是使用重组痘苗病 毒抹DIs的强化步骤包括至少进行两次。在所述专利技术中，疫苗以每个受试者0. 05_0. lmg的剂量施用也是进 一步优选的实施方案。另外的专利技术是HIV-1CRF0 l-AE林的gag基因，以及具有所述gag 基因的重组BCG疫苗，其中所述的gag基因具有SEQ IDNO: 1的核苷酸序列。仍然另外专利技术的是HIV-1 CRF01—AE林的Gag蛋白和特异性识别所 述Gag蛋白的抗体，其中所述的Gag蛋白是所述gag基因的表达产物。本专利技术的术语和概念会在本专利技术实施方案和实施例的描述中具体 定义。而且，用于实施本专利技术的多种技术可以由本领域技术人员根据 已知的出版物等容易且可靠地操作，引用了来源的特殊技术除外。例 如,在Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, ed. A. Ge腿ro， Mack Publishing Co., Easton， PA， 1990中描述的疫 苗的制备,以及在Sambrook和Maniatis， in Molecular Cloning - A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989; Ausubel， F. M. 等，Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, N. Y. ， 1995中描述的基 因工程和分子生物学技术，等等。此外，在上文中列出的专利技术是通过开发所述的在先申请1-3的发 明完成的，并且所有在先申请l-3通过引入本专利技术作为参考。因此，根据本专利技术方法，HIV-1抗原特异性免疫应答可在动物模 型中得以有效增强。附图说明图l.是BCG中的HIV-1 CRF 01-AE Gag表达载体的结构图和rBCG 克隆的蛋白免疫印迹分析结果图。hsp60启动子的箭头表示转录方向。 Km、 Ori-分枝杆菌和MCS分别表示卡那霉素耐药性基因、含有源于 pAL500Q质粒的分枝杆菌的复制起点的DNA片段以及多克隆位点。将 rBCG细胞裂解产物中的Gag抗原在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶 电泳上分级，转移至硝酸纤维素滤膜上并用抗HIV-1 Gag p24的单克 隆抗体显影。图2.是表达HIV-1CRF0 1-AE Gag抗原的rDIs病毒的结构图和 rDIs感染的CEF细胞裂解产物的蛋白免疫印迹分析结果图。VV-DIs、 pll和p7. 5分别表示非重组DIs基因组、牛痘苗pll和p7. 5启动子基因。通过在图1的图例中描述的相同方法分析rDIs感染的CEF细胞 裂解产物中的SIV Gag抗原。图3.通过每次用0. lmg rBCG-GagE皮下注射免疫BALB/c小鼠1 个月而诱发的CTL活性。分离脾细胞，以每组5个系列肽再刺激脾细 胞，将其作为效应器细胞，所述系列肽结果产生位于完整的HIV-1 gag 的10个不同区域的10个组，同时将P815细胞用含有HIV-1 gag的重 组痘苗病毒感染并用51Cr标记作为靶细胞。用编号l-10表示针对每组 肽的特异性裂解百分率，同时将注射了 rBCG/pS0246的小鼠的相应细 胞的特异性裂解百分率作为免疫对照。图4.该柱状图表示经rBCG/ HIV-1 gag免疫的脾细胞针对用位于 10个gag肽区域的不同的HIV-lGag肽组进行的再刺激，在效应器 靶标比例为100: 1时的特异性裂解百分率。图5表示在用rBCG-GagE激发和用rDIs-GagE强化的猴子中的干 扰素y的ELISpot活性。在第0天用rBCG-GagE ( 0. lmg)进行皮内激 发，并且在激发后的第IO周和笫15周用rDI本文档来自技高网...

【技术保护点】
激发－强化疫苗接种的方法，包括使用重组ＢＣＧ疫苗的激发步骤和一个或多个使用重组疫苗的强化步骤，其中用于激发步骤的重组ＢＣＧ疫苗和用于强化步骤的重组疫苗两者都具有ＨＩＶ－１ＣＲＦ０１＿ＡＥ株的至少一种基因。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：本多三男，松尾和浩，浜野隆一，泉泰之，D普罗姆卡哈提乔，K巴拉钱德拉，R萨迪泰特，
申请(专利权)人：独立行政法人科学技术振兴机构，国立感染症研究所，泰国卫生部医学科学司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]