本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种核苷酸分子及其在制备抗糖尿病药物中的应用。糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合征。临床以高血糖为主要标志，久病可引起多个系统损害。本发明专利技术的本发明专利技术的核苷酸分子ＳＲ４Ｂ加入胰岛β细胞中，细胞培养上清中胰岛素的含量增加。因此认为，本发明专利技术的核苷酸分子ＳＲ４Ｂ有促进胰岛素分泌的功能，可以作为新的抗糖尿病药物进行开发，为缓解和治疗糖尿病提供了一种新的途径和手段。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种核苷酸分子及其在制备抗糖尿病药物中 的应用。
技术介绍
糖尿病(diabetes mellitus)是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床 综合征。因胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶组织细胞对胰岛素敏感性降低，引 起糖、蛋白、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱。临床以高血糖为主要标志， 久病可引起多个系统损害。病情严惩或应激时可发生急性代谢紊乱如酮症酸中毒等。糖尿病主要临床类型胰岛素依赖型糖尿病(IDDM, I型)可发生在任何年 龄，但多发生于青幼年。临床特点是起病急，多食、多尿、多饮、体重减轻等症 状较明显，有发生酮症酸中毒的倾向，必须依赖胰岛素治疗维持生命。起病初期 血中胰岛细胞自身抗体阳性率高。口服葡萄糖胰岛释放试验可见基础胰岛素水平 低于正常，葡萄糖刺激后胰岛素分泌曲线低平，显示胰岛素缺乏。非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM， II型)也可发生在任何年龄，但多见于 40岁以后中、老年。大多数病人起病缓慢，临床症状相对较轻或缺如。无酮症酸 中毒倾向，但在一定诱因作用下，也可发生酮症酸中毒或高渗性昏迷。依赖胰岛 素，但在饮食和口服降糖药治疗效果欠佳时，或因并发症和伴发病的存在，有时 亦需要用胰岛素控制髙血糖。然而，到目前为止，尚未有人报道用于抗糖尿病的基因药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于制备抗糖尿病药物的核苷酸分子。 本专利技术的另一个目的是提供上述核苷酸分子的应用。本专利技术提供了一种分离出的核苷酸分子，它的序列包括CAUCCGCAUCGCAGACUUU。称为SR4B。在本专利技术中，术语"核苷酸分子SR4B"指具有抑制BRSK2蛋白活性或者 增加胰岛素分泌量，并且含有与CAUCCGCAUCGCAGACUUU序列高度同源的 核苷酸序列。该术语还包括与CAUCCGCAUCGCAGACUUU的同源性至少70%， 较佳地至少80%，更佳地至少卯。/。的核苷酸序列。该术语还包括CAUCCGCAUCGCAGACUUU的核苷酸序列变异形式。这 些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-15个，较佳地1-10个，更佳地 1-5个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5'和域3'端添加数个(通常为10 个以内，较佳地为5个以内)核苷酸。例如，在CAUCCGCAUCGCAGACUUU 后(3 '端)加入若干dT (脱氧胸苷)后形成的序列。在本专利技术中，可在SR4B后(3 '端)连接dTdT,从而形成 CAUCCGCAUCGCAGACUUUdTdT。在本专利技术还提供了核苷酸分子，其序列包括CAUCCGCAUCGCAGACUUU 和AAAGCUGUUCUUGAUGGAG。在本专利技术还提供了核苷酸分子，其序列包括 CAUCCGCAUCGCAGACUUUdTdT和dTdT AAAGUCUGCGAUGCGGAUG。本专利技术还提供了一种载体，它含有上述的核苷酸分子SR4B。 在本专利技术中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体。比如，选用 市售的载体，然后将含有本专利技术SR4B核苷酸序列的 CAUCCGCAUCGCAGACUUUdTdT可操作地连于表达调控序列，可以形成重组 载体。如本文所用，"可操作地连于"指这样一种状况，即线性DNA序列的某些 部分能够影响同一线性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信号肽DNA作 为前体表达并参与多肽的分泌，那么信号肽(分泌前导序列)DNA就是可操作地连 于多肽DNA;如果启动子控制序列的转录，那么它是可操作地连于编码序列；如 果核糖体结合位点被置于能使其翻译的位置时，那么它是可操作地连于编码序列。 一般，"可操作地连于"意味着相邻近，而对于本专利技术的核酸分子则意味着 相邻且不影响功能。本专利技术还提供了上述载体转化的宿主细胞。在本专利技术中，术语"宿主细胞"包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿 主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞， 昆虫细胞、和哺乳动物细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如CHO细胞、 C0S、 NIT细胞等。另一方面，本专利技术还提供了上述的核苷酸分子SR4B的制备方法，即按 CAUCCGCAUCGCAGACUUU的序列，将各核糖核酸分子依次脱水縮合。本专利技术的核苷酸分子SR4B可以采用各种常规的制备方法制备。本专利技术的 核苷酸分子SR4B序列通常可以用酶解法或人工合成的方法获得。本专利技术还提供了上述的核苷酸分子SR4B在制备抗糖尿病药物中的应用。用siRNA的方法将含有本专利技术SR4B核苷酸序列的 CAUCCGCAUCGCAGACUUUdTdT和dTdT AAAGUCUGCGAUGCGGAUG转 染入小鼠的胰岛P细胞(NIT)中，放射性免疫学方法检测结果显示，细胞培养 上清中胰岛素的含量增加。进一步研究表明，上述siRNA干扰实验中，原理是干扰了小鼠的胰岛P细 胞(NIT)中内源BRSK2的表达，才导致细胞培养上清中胰岛素的含量增加。从Northern的结果可见，BRSK2主要在脑和胰腺中表达，尤其以胰腺中的 表达量为最高。Western的结果与前面Northern的结果一致，BRSK2在小鼠中也 主要在脑和胰腺表达。从免疫组化的结果可见，BRSK2主要在胰腺组织的胰岛 中表达。神经元分化相关基因BRSK2 (NCBI中核苷酸的序列号为AF533880，核苷 酸的序列号为AAP97727)在胰腺中有很高的表达量，甚至超过在脑中的表达量。 进一步的免疫组化结果显示，BRSK2主要在胰腺的胰岛中高表达。将BRSK2在 小鼠的胰岛P细胞(NIT)中过量表达，放射性免疫学方法检测细胞培养上清中 胰岛素的含量，结果显示，胰岛素分泌减少；另一方面用siRNA的方法干扰小 鼠的胰岛P细胞(NIT)中内源BRSK2的表达活性，同样的放射性免疫学方法检 测结果显示，细胞培养上清中胰岛素的含量增加。本专利技术的核苷酸分子SR4B及其类似物，当在治疗上进行施用(给药)时，可 提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的 水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随 被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过 常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)肌内、腹膜内、皮下、皮内、或局 部给药。以本专利技术的核苷酸分子SR4B为例，可以将其与合适的药学上可接受的载 体联用。这类药物组合物含有治疗有效量的化合物和药学上可接受的载体或赋形 剂。这类载体包括(但并不限于)盐7jC、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及 其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本专利技术的核苷酸分子SR4B可以被制成 针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行 制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合 物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有 效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本专利技术的BRSK2还可与其他治疗剂一起使用。当本专利技术的核苷酸分子SR4B被用作药物时，可将治疗有效剂量的该多肽施用于哺乳动物，其中该治疗有效剂量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多 数情况下不超过约8毫克/千克体重本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离出的核苷酸分子，其特征在于，它的序列包括：ＣＵＣＣＡＵＣＡＡＧＡＡＣＡＧＣＵＵＵ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，汤文文，郭泽坤，袁健，唐丽莎，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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