本发明专利技术一种抗根癌病樱桃砧木苗的选育方法属于农业中的果树繁殖和选育方法，具体涉及一种采用组培快繁技术快速筛选和繁殖生产抗根癌病樱桃砧木苗的方法，包括无菌抗根癌病樱桃砧木试管苗的选择、试管苗的增殖扩繁培养、试管苗的壮苗培养、试管苗的生根培养和试管苗的移栽培养步骤，由于采用了本发明专利技术所述的技术方案使得本发明专利技术具有可以快速获得大量性状稳定的抗根癌病樱桃砧木、减少了培育成本、改变了以往樱桃砧木根癌病发病率高，造成树势弱，结果品质差，大树易死亡境况的有益效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业中的果树繁殖和选育方法，具体涉及一种采 用组培快繁技术快速筛选和繁殖生产抗根癌病樱桃砧木苗的方 法。背景纟支术目前我国甜樱桃分布主要集中在渤海湾沿岸，以烟台市和大 连市郊区为最多。山东省是我国甜樱桃栽培面积最大、产量最多 的一个省，除烟台市各区县外，青岛、威海、济南、日照、淄博、 潍坊、枣庄、泰安、临圻等地也有分布。辽宁省集中分布在大连 市的金州区和甘井子区。河北省主要分布在秦皇岛市山海关区， 北戴河区及昌黎县。此外，北京、河南、山西、映西、内蒙古、 新疆、湖北、江西、四川等十几个省、自治区、直辖市也都有引 种和栽培。近几年由于人民生活水平的提高、甜樱桃作为观光休 闲农业不断发展。樱桃扦插不易生根，生产上都采用嫁接繁殖樱桃苗木，嫁接 苗包括砧木和*接穗品种两个部分。由于砧木对地上部分的生长、 结果以及本身的抗病性有很大影响，因此选育合适的砧木非常重 要。生产上常用的樱桃砧木根癌病发病率高，造成树势弱，结果 品质差，大树易死亡，给果农造成了很大的经济损失。在一定程度上也限制了樱桃这一产业的发展速度。为此，选择抗根癌病的 櫻桃砧木，对调整农业种植结构、促进观光休闲农业的发展、樱 桃老果园的更新换代和新果园的建立都有重要的意义。花卉、果树和林木的組培快繁技术是北京市海淀区植物组织培养技术实验室20多年来重点研究的一套应用于生产中并产生 较好效果和较大经济效益的生物技术之一。该技术的主要要点是 将在田间生长的植物体的一部分组织或器官，在超净工作台上进 行消毒、接种，通过在培养室中培养诱导其分化、促使其增殖生 长和生根，最后经过移栽过渡形成一个正常的植抹。这一生物技 术应用于花卉、果树和林木的快速繁殖，在国家外专局、市科委、 市财政局、海淀区科委和农林委等10多个项目中得到应用(其 中有两个项目获得北京市科技进步三等奖，两个获得国家专利技术专 利)。我们在组培快繁工作中，所确定的接种材料通常是综合性状 优良，材料本身资源少、用常规方法繁殖慢或繁殖困难的植物。 因此，需要通过组培快繁技术体系的建立获得大量的组培苗用于 研究、生产、应用和推广。
技术实现思路
本专利技术公开了 一种利用植物组织培养技术进行抗根癌病樱 桃砧木快速筛选和繁殖的方法。本专利技术所公开的方法包括樱桃砧木的组培快繁过程和抗根 癌病樱桃砧木的快速筛选过程，以下对樱桃砧木的组培快繁过程 和抗根癌病樱桃砧木的快速筛选过程分别进行详细的说明。一、櫻桃砧木的组培快繁过程包括外植体的选择、扩繁 培养、壮苗培养、生根培养和组培苗移栽方法等在内的樱桃砧木 组培快繁技术，具体的过程步骤如下1、外植体即抗根癌病樱桃砧木试管苗的选择一般来说，多年生的木本植物相对带菌多，在组培快繁过程 中外植体污染率较高。因此，降低外植体污染率，是木本植物组 培快繁技术需要解决的关键问题之一。由于不同时期外植体污染情况存在很大差异，在试验过程 中，选择休眠的枝条、早春休眠枝水培萌发的新梢、生长季新梢 等不同时期的外植体材料进行接种，在消毒方法相同的条件下， 接种两个星期后统计污染率。统计结果如表l。表1 不同时期的外植体材料污染情况比较 取材时期 休眠枝 水培新梢 生长季新梢污染率(％) 100 18. 8 92. 9从表1可以看出，不同时期的外植体材料接种时污染率差 异显著，这是由于不同生长时期的枝条本身带菌量不同和对消毒 剂的敏感性不同所至。休眠期的枝条带菌量大，木质化程度高， 消毒剂不易渗透，因此，外植体的污染率就高；休眠枝水培条件 下萌发的新梢处于旺盛生长时期，枝条本身和外界环境带菌量相 对较少，枝条木质化程度低，消毒剂易于渗透，消毒效果好，所 以外植体污染率低；由于生长季多为雨季，细菌繁殖快，外植体和周围环境中菌类含量会有所增高，这也是处于生长季的新捎外 植体污染率较高的原因。利用樱桃砧木种子、(易发生败育种子的)未成熟胚和枝条作为外植体进行接种，接种时期为种子在沙藏后30天-60天， 其中所述的未成熟胚为受精后胚败育前获得的未成熟胚，所述的 枝条为早春水培新梢或温室苗的新梢，当新梢长到IO公分左右 时，剪取新梢用于组培快繁的外植体材料。此时的外植体由于带 菌量少、褐化轻，易于获得无菌试管苗；对所得的无菌试管苗进行抗才艮癌病筛选，选取瘿瘤的重量 分级为0级的抗根癌病櫻桃砧木试管苗，其步骤如下将无菌 樱桃砧木试管苗茎中下部接种农杆菌后，置于无激素的MS培养 基中进行培养，40天后统计病发率即把癭瘤从发病部位取下并 称重，其中抗根癌病樱桃砧木试管苗的抗性强弱以结瘤百分率 和癭瘤重量表示如下结瘤百分率(％ )=结瘤的植抹数/接瘤的植株数按瘿瘤的重量分级0级、无瘤产生；1级、瘤体重量^10mg (以不大于植抹直径的癭瘤的重量为标准)；2级、瘤体重量10mg 以上(瘿瘤大于茎的直径，影响植4朱生长的均为2级)。病情指数(％ ) = S (受害级值x每级株数)/ (最高级值 x总林数)xlOO;上述接种的过程如下a、材料 要检测的櫻桃砧木试管苗或组培生根苗(以吉赛拉为对照);b、 病原菌及悬浮液的制备把农杆菌(胭脂碱型农杆菌C58 )在固体培养基YEB上划线 培养，于4。C保存，接种前挑取C58单菌落接种于YEB的液体培 养基中，27。C振荡培养，OD禱值达O. 5,用于活体接瘤实验；c、 接种与培养用无菌注射器蘸取农杆菌菌液，在樱桃砧木试管苗茎中下部 用无菌注射器接种农杆菌，接种后的试管苗培养于无激素的MS 培养基中，组培生根苗栽植于花盆中，每个品种接30抹以上；2、扩繁培养经由步骤(1)对外植体的选择，获得无菌试管苗后，当小 试管苗长到lcm以上时，切下小苗并将其转移到扩繁培养基MS + 6BA 0. 5 - 2. Omg/L (即在基本培养基的组成上加入1. 0 mg/L 激素6BA配成的培养基)上，温度控制在2(TC-24。C左右，光强 1500 Lx - 2500 Lx，光照12小时，促使樱桃砧木试管苗增殖， 采用上述扩繁培养基和培养条件，能使樱桃砧木试管苗的分化率 达到100%,月增殖倍数达到6.6,并且生长良好，可以满足大 规模生产的需求；本专利技术申请人对樱桃砧木试管苗的增殖进行了不同基本培 养基、不同激素、不同培养条件等方面的试验来确定最佳的实施 条件2.1基本培养基对试管苗增殖的影响 为了筛选适宜櫻桃砧木试管苗生长和分化的培养基，首先选择了 MS、 AS、 NTH、 MILLER、 WHITE、 WP等基本培养基进行了试 验。试验结果证明在其它条件相同的情况下，樱桃砧木试管苗 在MS培养基上增殖和生长情况较好，月增殖倍数较高(见表2 ), 且试管苗叶色浓绿、生长健壮。因此，MS培养基是适宜樱桃砧 木试管苗增殖和生长的培养基类型。表2基本培养基对樱桃砧木试管苗增殖的影响培养基MSAS 訓MILLER WHITEWP月增殖倍数3, 22.8 2.41.9 1.62. 12. 2细胞分裂素对试管苗增殖的影响选用6BA和KT两种细胞分裂素，浓度为0.5、 1.0、 2.0、4. 0 mg/L，以不加细胞分裂素的培养基为对照，试验结果见表3 。 表3 不同细胞分裂素对樱桃砧木试管苗增殖的影响细胞分裂素6BAKTCK(mg/L)0. 51.0 2.04. 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗根癌病樱桃砧木苗的选育方法，它包括以下步骤：（１）、无菌抗根癌病樱桃砧木试管苗的选择：将无菌樱桃砧木试管苗茎中下部接种农杆菌后，置于无激素的ＭＳ培养基中进行培养，选取抗根癌病樱桃砧木试管苗；（２）、将步骤（１）获得的抗根癌病樱桃砧木试管苗置于扩繁培养基ＭＳ＋６ＢＡ０．５－２．０ｍｇ／Ｌ上，在２０℃－２４℃温度下，１５００Ｌｘ－２５００Ｌｘ光强的条件下，光照１２小时，使抗根癌病樱桃砧木试管苗增殖；（３）、将步骤（２）中增殖的抗根癌病樱桃砧木试管苗置于壮苗培养基ＭＳ＋ＧＡ５－１０ｍｇ／Ｌ，壮苗２８－３１天；（４）、将经步骤（３）壮苗后的抗根癌病樱桃砧木试管苗转接到生根培养基中，进行生根培养；（５）、将生根后的抗根癌病樱桃砧木试管苗移栽到育苗移栽基质中进行栽培获得抗根癌病樱桃砧木苗。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘兰英，李春玲，邵磊，张军民，
申请(专利权)人：北京市海淀区植物组织培养技术实验室，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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