一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法技术

本发明专利技术涉及一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法，步骤如下：１）培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：（１）基本培养基：ＷＰＭ，其中白糖３０ｇ／Ｌ，琼脂７～８ｇ／Ｌ，ｐＨ５．３；（２）诱导培养基：ＷＰＭ＋ＴＤＺ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．３～０．５ｍｇ／Ｌ；（３）叶片诱导培养基：ＷＰＭ＋ＴＤＺ２．０～３．０ｍｇ／Ｌ；（４）增殖培养基：ＷＰＭ＋ＴＤＺ０．２～０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１～０．２ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ０．１ｍｇ／Ｌ。２）、外植体的选取与灭菌；３）诱导培养：直接从外植体诱导出初代幼芽；４）在叶片诱导培养基上进行培养，形成胚性愈伤组织或直接形成具备完整植株的再生不定芽；５）增殖培养。本发明专利技术的有益效果是：１）培养基针对性强、适用性好，芽的诱导率高；２）增殖系数高，节约了组培成本。３）遗传性状一致，克服了常规繁殖系数低的缺点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养
，主要是一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及 其方法。
技术介绍
蓝莓(blueberry)是新兴功能型水果，它以优异的品质、优良的加工性能、独特的保健功能、 而迅速成为世界第三大浆果，并被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。蓝莓果实低能量且含有多种抗氧化成份，因此它不仅具有防癌抗癌的奇特功效、并可以显著降低心血管疾病、糖尿病、帕金斯病等的发病率，还是重要的抗衰老、减肥美容水果。蓝莓适宜加工成果汁、果酱、果酒及天然色素、保健食品等加工产品，是集鲜食、加工、保健于一身的优良树种。但是，当前蓝莓生产用苗极度紧张是我省乃至全国发展蓝莓发展的技术瓶颈。而采用植物组织培养方法可以在短期内快速繁殖多种植物，不仅繁殖率高，且因为其是无性繁殖，可以保持原繁殖母株的优良性状，近年来在生产上应用越来越广。但是现有的文献报道大都使用价格昂贵的玉米素来进行增殖，使得组培成本成倍上升，使其无法实现大规模工厂化生产。
技术实现思路
本专利技术要解决上述现有技术的缺陷，提供一种组培成本相对较低且适宜蓝莓试管苗增殖 的培养基组合物及其方法。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案。这种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基WPM，其中白糖30g/L，琼脂7 8 g/L， pH5. 3;(2) 诱导培养基WPM +TDZ1.0 2. 0mg/L+IBA0.3 0. 5mg/L;(3) 叶片诱导培养基WPM +TDZ2. 0 3. Omg/L;(4) 增殖培养基WPM +TDZ0. 2 0. 5mg/L+I訓.1 0. 2mg/L+GA0. lmg/L。 这种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，按如下步骤进行1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基WPM，其中白糖30g/L，琼脂7 8 g/L， pH5. 3;(2) 诱导培养基WPM +TDZ1.0 2. Omg/L+IBA0. 3 0. 5mg/L;(3) 叶片诱导培养基腦+TDZ2. 0 3. Omg/L;(4) 增殖培养基WPM +TDZO. 2 0. 5mg/L+IBA0. 1 0. 2mg/L+GA0. lmg/L;2) 、外植体的选取与灭菌取蓝莓健康无病饱满芽，经灭菌处理后备用；3) 、诱导培养将步骤2)灭菌处理后的芽在无菌条件下，用滤纸吸干后，接种在诱导培养基上，经30 40天后，直接从外植体诱导出初代幼芽；4) 、取无菌苗叶片在叶片诱导培养基上进行培养，经30-40天形成胚性愈伤组织或直接 形成具备完整植株的再生不定芽；5) 、增殖培养将步骤3)诱导出的初代幼芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培 养30 45天分化出腋芽；每隔30 45天，将步骤5)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培 养基上，再分化出腋芽；将步骤4)诱导出的胚性愈伤组织或再生不定芽在无菌条件下，接 种在增殖培养基上，培养50 60天分化出腋芽；每隔30 45天，将步骤5)分化的腋芽切 成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽。所述的灭菌处理是蓝莓健康无病饱满芽用软毛刷洗干净，再在流水下冲洗lh，先经体积 比为75%酒精浸泡0.5分钟，再用体积比为0.P/。升汞溶液灭菌6 8分钟，最后用无菌水冲 洗3 5次。所述的各组织培养阶段的培养条件是，培养温度为25土2'C，光照光强为1500 2500Lx， 光照时间为12h/d。本专利技术的有益效果是1) 、提出的蓝莓组培优化培养基针对性强、适用性好，芽的诱导率达90%以上；芽的增 殖率每个培养周期达5倍以上，年组培苗生产能力可达100万苗以上(一年为8个培养周期)。2) 、该方法由于用价格低廉的TDZ代替价格昂贵的ZT，而增殖系数高，大大节约了组 培成本，使得工厂化育苗成为可能。3) 、提出的组织培养快速繁殖方法得到的蓝莓组培苗，遗传性状一致，克服了常规繁殖 系数低的缺点。具体实施例方式通过以下实施例对本专利技术作进一步的详细说明，但本专利技术的内容并不局限于此。 实施例1:本实施例1中的这种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基醒，其中白糖30g/L，琼脂7 8 g/L， pH5.3;(2) 诱导培养基WPM +TDZ1. Omg/L+IBA0. 3mg/L;(3) 增殖培养基WPM +TDZO. 2mg/L+IBA0. lmg/L+GAO. lmg/L。 这种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，按如下步骤进行1) 、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基翻，其中白糖30g/L，琼脂7 8 g/L， pH5.3;(2) 诱导培养基WPM +TDZ1. Orag/L+IBA0.加g/L;(3) 增殖培养基WPM +TDZO. 2mg/L+IBA0. lmg/L+GAO. lmg/L;2) 、外植体的选取与灭菌蓝莓健康无病饱满芽用软毛刷洗干净，再在流水下冲洗lh， 先经体积比为75%酒精浸泡0.5分钟，再用体积比为0.1%升汞溶液灭菌6 8分钟，最后用 无菌水冲洗3 5次。3) 、诱导培养将步骤2)灭菌处理后的芽在无菌条件下，用滤纸吸干后，接种在诱导 培养基上，经30 40天后，直接从外植体诱导出初代幼芽；4) 、增殖培养将步骤3)诱导出的初代幼芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培 养30 45天分化出腋芽；每隔30 45天，将步骤4)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培 养基上，再分化出腋芽；该实施例中各组培阶段的培养条件是:培养温度为25土2t:，光照光强为1500 2500Lx， 光照时间为12h/d。实施例2:本实施例2中的这种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基WPM，其中白糖30g/L，琼脂7 8 g/L， pH5. 3;(2) 诱导培养基WPM +TDZ2mg/L+IBA0. 5mg/L;(3) 增殖培养基WPM +TDZO. 5mg/L+IBA0. 2mg/L+GA0. lmg/L。 这种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，按如下步骤进行1) 、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1) 基本培养基WPM，其中白糖30g/L，琼脂7 8 g/L， pH5. 3;(2) 诱导培养基WPM +TDZ2mg/L+IBA0. 5mg/L;(3) 增殖培养基WPM +TDZO. 5mg/L+IBA0. 2mg/L+GA0. lmg/L;2) 、外植体的选取与灭菌蓝莓健康无病饱满芽用软毛刷洗干净，再在流水下冲洗lh，先经体积比为75%酒精浸泡0.5分钟，再用体积比为0.1%升汞溶液灭菌6 8分钟，最后用 无菌水冲洗3 5次。3) 、诱导培养将步骤2)灭菌处理后的芽在无菌条件下，用滤纸吸干后，接种在诱导 培养基上，经30 40天后，直接从外植体诱导出初代幼芽；4) 、增殖培养将步骤3)诱导出的初代幼芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培 养30 45天分化出腋芽；每隔30 45天，将步骤4)分化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，其特征在于：培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：　　　　（１）基本培养基：ＷＰＭ，其中白糖３０ｇ／Ｌ，琼脂７～８ｇ／Ｌ，ｐＨ５．３；　　　　（２）诱导培养基：ＷＰＭ＋ＴＤＺ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．３～０．５ｍｇ／Ｌ；　　　　（３）叶片诱导培养基：ＷＰＭ＋ＴＤＺ２．０～３．０ｍｇ／Ｌ；　　　　（４）增殖培养基：ＷＰＭ＋ＴＤＺ０．２～０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１～０．２ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ０．１ｍｇ／Ｌ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧琴，谢鸣，蒋桂华，孙崇波，吴延军，梁英龙，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]