一种昆虫表皮细胞系及其构建方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种昆虫表皮细胞系及其构建方法，成功地克服了表皮细胞组织分化程度高而难以进行体外培养的难题，步骤为：先配制细胞培养液，然后选取进入蜕皮周期的昆虫幼虫，解剖，取虫体体壁背腹表皮，漂洗，剪切为细小组织块，２５～２９℃下培养使其贴壁，约１ｄ后补加１～２ｍＬ细胞培养液，９～１１ｄ后再补加１～２ｍＬ细胞培养液；进行传代培养时，以１∶２～３进行稀释传代，１５～２０ｄ传代一次；至第６代时，血清含量减为１０～２０％，生长因子含量降低为原用量的一半；至第１０代时，血清含量减为８～１２％，撤除生长因子，此时，细胞系建立成功；用本方法构建的表皮细胞系可以连续传代，提供大量的昆虫表皮细胞，可以对其进行各种生物学研究。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种昆虫表皮细胞系的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：（１）配制细胞培养液：配制昆虫细胞培养基，抽滤，分装，保存；用时加入０．１～２ｇ／Ｌ的Ｌ－谷氨酰胺，占总体积１０～３０％的动物血清，５０～２００ＩＵ／ｍＬ的生长因子，或再添加０．１～７ｇ／Ｌ的水解乳蛋白，０．１～７ｇ／Ｌ的酵母提取物，１～４００ＩＵ／ｍＬ的庆大霉素或青霉素或链霉素；（２）原代培养：选取进入蜕皮周期的昆虫幼虫，冰浴至昏迷，７０～７５％酒精消毒体表，无菌解剖，取虫体体壁背腹表皮，用解剖器械分离剔除其上连带的脂肪体和气管，用细胞培养液漂洗后，刮取新鲜表皮层，剪切为细小组织块，将其移至细胞培养瓶或培养板，涂布均匀，２５～２９℃下恒温静置培养使其贴壁，每日观察细胞生长状态，１２～３０小时后补加１～２ｍＬ细胞培养液，９～１１ｄ后再补加１～２ｍＬ细胞培养液，以后根据组织块贴壁及细胞生长状态每隔１４～１６ｄ更换１／４～３／４体积的细胞培养液；（３）传代培养：原代培养细胞开始增殖后，细胞数目增多，细胞生长密度较大时，用吸管轻轻吸打的方法或拍击瓶壁的方法或酶消化传代法悬起细胞以１∶２～３进行稀释传代；以后每次传代视细胞生长状态，１５～２０ｄ传代一次；传至第４代时，传代方法改用橡皮刮轻轻刮下细胞，吸管吹打细胞分散均匀以１∶２～３稀释传代；传至第６代时，细胞培养液中动物血清含量减为总体积的１０～２０％，生长因子含量降低为原用量的一半；至第１０代时，细胞培养液中动物血清含量减为总体积的８～１２％，并撤除生长因子，此时，细胞系建立成功。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邵红莲，赵小凡，王金星，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]