【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
含ＳＯＤ基因的重组双表达家蚕多角体杆状病毒的构建方法，其特征在于以下步骤：（１）取家蚕５龄第３天幼虫以ＲＮＡ抽提试剂盒提取总ＲＮＡ，设计ＭｎＳＯＤ引物，正反向引物５’端分别引进ＥｃｏＲⅠ和ＫｐｎⅠ酶切位点；（２）以总ＲＮＡ为模板，在通用引物ｏｌｉｇｏ－ｄＴ↓［１８］和反向转录酶（ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔⅡｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）作用下合成单链ｃＤＮＡ；（３）以单链ｃＤＮＡ为模板，在ＳＯＤ正反向引物下ＰＣＲ合成ＭｎＳＯＤ基因，条件为９４℃预变性５分钟，再以９４℃１分钟，５５℃１分钟，７２℃２分钟，共３５个循环，最后７２℃延长１０分钟；（４）合成的ＭｎＳＯＤ基因经乙醇沉淀和ＥｃｏＲⅠ和ＫｐｎⅠ双酶切，电泳并切胶回收；将ＭｎＳＯＤ基因与ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ以连接试剂盒连接并转化ＸＬ－Ｂｌｕｅ细胞，挑斑在含每毫升１００μｇ氨苄青霉素的ＬＢ培养基中培养繁殖，提取重组供体质粒ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ／ＭｎＳＯＤ；（５）以家蚕杆状病毒ＤＮＡ为模板，以多角体启动子５’端和多角体基因３’设计引物，通过ＰＣＲ方法合成家蚕多角体基因，并将其克隆到ｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌｐｌａｓｍｉｄ质粒；（...
【技术特征摘要】
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。