一种动态模拟人神经胶质瘤细胞转移的体外模型制造技术

本发明专利技术公开了一种动态模拟人神经胶质瘤细胞转移的体外模型，由人神经胶质瘤细胞系Ｕ２５１细胞以抗细胞附着的模型建立、人神经胶质瘤细胞体外转移模型的建立、对所构建的人神经胶质瘤细胞体外转移模型鉴定的步骤构建而成。本发明专利技术的模型可以进行原位癌和转移过程中的肿瘤的对照研究，并可进一步作为检测转移中的肿瘤细胞生物学行为和判断肿瘤预后的监测系统。该模型对于进行神经胶质瘤转移机制的研究和控制转移药物的筛选有重要价值，并可作为制备抗神经胶质瘤转移基因疫苗及建立抗肿瘤转移药物筛选技术平台。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种动态模拟人神经胶质瘤细胞转移的体外模型，由人神经胶质瘤细胞系Ｕ２５１细胞以抗细胞附着的模型建立、人神经胶质瘤细胞体外转移模型的建立、对所构建的人神经胶质瘤细胞体外转移模型鉴定的步骤构建而成，其特征是：所述抗细胞附着模型的建立方法是：用９５％－１００％的乙醇溶解ｐｏｌｙ－ＨＥＭＡ，配成ｐｏｌｙ－ＨＥＭＡ终浓度为１２０ｍｇ／ｍｌ的溶液，６５℃震荡混匀８－１０小时，得ｐｏｌｙ－ＨＥＭＡ储备液；然后将ｐｏｌｙ－ＨＥＭＡ储备液按体积比１∶１０的比例用９５％－１００％的乙醇稀释，制成终浓度为１２ｍｇ／ｍｌ的ｐｏｌｙ－ＨＥＭＡ工作液，４℃保存，备用；取ｐｏｌｙ－ＨＥＭＡ工作液均匀铺到细胞培养板或细胞培养瓶的底面上，铺板时ｐｏｌｙ－ＨＥＭＡ工作液终密度为１ｍｇ－３ｍｇ／ｃｍ↑［２］，室温下自然晾干ｐｏｌｙ－ＨＥＭＡ工作液，得抗细胞附着模型，４℃保存，备用；所述人神经胶质瘤细胞体外转移模型建立的方法是：选取具有高转移力的、处于对数生长期的人神经胶质瘤细胞系Ｕ２５１细胞，用０．２５％胰酶消化成单细胞悬液后，调整细胞浓度为１－５×１０↑［５］个细胞／ｍｌ，然后将其分成两组，一组接种至上述抗细胞附着模型中，设定为悬浮细胞组，另一组接种至非抗细胞附着模型的细胞培养板或细胞培养瓶中，设定为贴壁细胞组，待细胞铺匀后置３７℃，ＣＯ↓［２］培养箱中培养１２ｈ－３６ｈ，获得的悬浮细胞组细胞即为人神经胶质瘤细胞脱离附着的体外转移模型，获得的贴壁细胞组细胞为人神经胶质瘤细胞贴壁生长的对照模型；所述对所构建的人神经胶质瘤细胞体外转移模型鉴定的指标特征是：在台盼兰染色确定悬浮细胞组和贴壁细胞组细胞存活率不低于９７％的前提下，①悬浮细胞组和贴壁细胞组细胞凋亡率低于５％；②悬浮细胞组与贴壁细胞组细胞形态对比，悬浮组细胞聚集成团，没有突起伸出，细胞仍为圆球型，细胞在悬浮后４ｈ出现聚集，３６ｈ细胞聚集更紧，呈现融合状态，随着时间的推移，贴壁组细胞由伸出突起开始逐渐伸展，铺成单细胞层，而悬浮组的细胞形态呈圆形，并逐渐聚集成团，所聚成的细胞团块随着时间的推移越聚越大；③细胞生长曲线显示，贴壁组细胞呈旺盛增殖曲线，悬浮组细胞处于静止状态，既不增殖，也不凋亡，呈基本持平曲线；④流式细胞仪检测各细胞周期的细胞分布显示，悬浮组细胞为处于Ｇ０／Ｇ１期的静止状态的细胞，而贴壁组细胞大多处于增殖旺盛的Ｇ２／Ｍ期；⑤悬浮组细胞在再次遇到适于贴壁的环境时，能够在没有任何外界刺激的...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩丽辉，孙汶生，张之勇，曹莉莉，梁晓红，曲忠花，杜娟，马恬，侯楠，郭春，刘玉刚，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]