【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种家蚕滞育品种的低温催青转基因方法,其特征在于依次通过下列步骤实现:(1)将家蚕滞育品种的蚕卵通过人工孵化处理后,置于15℃恒温、相对湿度75%的环境中催青至孵化,孵化的蚁蚕在常规条件下进行饲养;(2)在25℃的种茧保护温度下收集同时化蛾的雌雄蚕蛾,在25℃、弱光的条件下交配4h后拆对,并将雌蛾投放于上浆的蚕连纸上,在黑暗的环境中产卵,每间隔1h收集一次蚕卵,并将收集的蚕卵置于25℃的环境中保护;(3)将蚕卵连同蚕连纸片用自来水冲洗以后,于蒸馏水中浸泡2-3min,而后用镊子将蚕卵转移至用75%酒精消毒的载玻片上,并按照蚕卵腹面向右的标准将其排列整齐,排列好的蚕卵置于35-37%的甲醛蒸气中消毒5min;(5)以收集时间开始记时,于收集后3h-6h用显微注射仪将10-15nl、总浓度400ng/ul的转座载体质粒从蚕卵腹面中央注入已经消毒的蚕卵中,并用无毒的胶水封闭卵壳注射留下的小孔;(6)将注射完成的蚕卵在35-37%的甲醛蒸气中消毒5min后,置于25℃、相对湿度85%以上的湿度条件下,进行催青直到孵化,饲养孵化出来的蚁蚕,将当代(G0)的蚕蛾进行自交或回交,获得G1代蚕卵,扫描 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:赵爱春,马三垣,徐汉福,夏庆友,鲁成,向仲怀,
申请(专利权)人:西南大学,重庆拓桑生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:85[中国|重庆]
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