一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法技术

本发明专利技术涉及一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，属植物病毒检测技术领域，包括如下步骤：培养基的配制、茎尖脱毒培养、指示植物番茄的无菌苗培养、微嫁接培养和脱病毒组培苗的增殖培养。本发明专利技术的优点是：所用的培养基、组培条件和微嫁接器适于人参果脱毒苗的微嫁接培养，利于嫁接口的愈合，平均嫁接成功率超过９０％，可完全满足病毒检测的要求。与传统的田间指示植物检测相比，大大缩短了检测所需的时间。该种方法不受时间限制、环境因素的影响，可常年在实验室条件下进行，非常实用，可用于人参果脱毒苗的病毒快速检测和脱毒苗的规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物脱毒组培快繁
，尤其涉及一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检 测方法。
技术介绍
人参果(&tow朋mwn'o^ff^")又名香艳果，为茄科直立多年生草本或亚灌木，原产南 美洲的秘鲁、厄瓜多尔地区。其性喜温暧、凉爽、千燥气候，生长适温18 2(TC。人参果以 浆果供食，低糖、低脂，可炒、烧、炸、做汤、鲜食等。据分析，其果实富含人体所需的维 生素及各种微量元素铜、钾、镁、硒等。食用人参果，对各种癌症、高血压、糖尿病、冠 心病等有较好的防治效果，被誉为抗癌之王、绿色保健珍品。近年来国内引进推广种植，且 适应性广、抗逆性强，生产效益高，市场前景好。人参果常规栽培以茎段扦插繁殖为主，但 幼苗和成株极易感染烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯M病毒等多种病毒，体内病毒感 染严重，并逐代积累，严重影响其生长发育，表现为叶片皱縮、变小，死亡率较高，坐果率 低，产量大幅度下降。通过植物茎尖脱毒培养进行种苗脱毒和快速繁殖是生产无病毒种苗的 有效途径。无毒苗生产需要快速、灵敏、特异的检测方法。指示植物检测是一种准确、可靠的检测 方法，至今人参果病毒病的检测仍主要依靠于指示植物检测，按照常规做法，首先必须将试 管苗进行生根培养，移栽成活后才能用指示植物进行检测，并以指示植物检测的结果作为判 断待检植物是否带毒的最终依据。但这种方法费时较长，需要l年的时间才能完成，并且病 毒病的症状表现易受环境因素的影响。因此需要寻找更好的人参果脱毒组培苗的病毒快速检 测方法。
技术实现思路
本专利技术要解决上述现有技术的缺陷，提供。本专利技术目的通过以下技术方案来实现这种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，按 如下步骤进行1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为-(1) 基本培养基选用MS培养基或1/2MS培养基，蔗糖或白糖20 30g/L，琼脂7 9 g/L， pH5.6 5.8;(2) 诱导培养基MS+BA0,5 2.0mg/L+IAA0.05 0.5mg/L;(3) 微扦插培养基MS+BA0.1 1.0mg/L+NAA0.05 0.5mg/L;(4) 壮苗培养基MS+BA0.05 0.5mg/L+NAA0.01 0.1mg/L+PP333 0.1 0. 5mg/L;(5) 微嫁接培养基MS+BA0.05 0.5mg/L+IBA0.05 0.5mg/L;(6) 生根培养基l/2MS+NAA0.05 0.5mg/L;(7) 无菌播种培养基1/2MS。2) 、人参果茎尖脱毒培养(1) 外植体的选取与灭菌从盆栽植株或大田植株上剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体， 经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；(2) 茎尖培养将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在40倍的双筒解剖 镜下，摘出0.2 0.3111111大小的带1 2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件 下培养20 30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20 30天，茎不断抽长，培养成约3 5 节、高5 7cm的幼苗；G)微扦插培养将诱导形成的幼苗切成一节一芽、约3 5节转接到微扦插培养基上， 在培养条件下培养30 45天每节又培养成约3 5节、高5 7cm的幼苗；根据对幼苗数量 的需求，每隔30 45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；(4)壮苗培养将微扦插培养成约3 5节、高5 7cm的幼苗切成一节一芽、约3 5 节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30 45天，幼苗约2 3节、高3 5cm、茎变粗；3) 、指示植物番茄的无菌苗培养(1) 外植体的选取与灭菌取番茄的种子，经灭菌处理，作为无菌播种的外植体；(2) 无菌播种培养将灭菌处理后的种子接种在无菌播种培养基上，在培养条件下培养20 30天后，从种子培育成高约5 7cm的幼苗；(3) 微扦插培养将诱导形成的幼苗切成一节一芽、约3 5节转接到微扦插培养基上， 在培养条件下培养30 45天每节又培养成约3 5节、高5 7cm的幼苗；根据对幼苗数量 的需求，每隔30 45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养。4) 、微嫁接培养(1) 微嫁接砧木准备将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一 个个带腋芽的茎段，用解剖刀将腋芽小心的去掉，并在茎段的上部纵切一个长约0.5cm的切 口，作为微嫁接砧木；(2) 微嫁接接穗准备将步骤3)无菌苗培养的指示植物番茄的幼苗切成带单芽的茎段， 芽上面的部分留0.3 0.5cm，芽下面的部分留0.5 1.0cm，并将其下部削成楔形，削面约长 0.3cm，作为微嫁接接穗；(3) 微嫁接器准备将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个长约1.5cm的不带腋芽的茎段，用解剖刀在茎段中间纵切一个长约0.5cm的开口；(4) 微嫁接将微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后将微嫁接接穗插入微嫁接砧 木上端的纵切口中，最后将微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口处， 将微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；(5) 微嫁接苗培养将嫁接苗接种到微嫁接培养基中进行培养，在培养条件下经45 60天的培养，指示植物苗生长正常、无病毒病的症状(叶片相对平展、翠绿、单叶面积较大) 的为脱病毒苗；指示植物表现出病毒病的症状(叶片稍皱缩、叶缘上巻、暗绿、单叶面积较 小)的为未脱除病毒苗。5)、脱病毒组培苗的增殖培养(1) 微扦插培养将步骤4)检测出脱病毒的同一编号的组培苗切成一节一芽、约3 5 节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30 45天每节又培养成约3 5节、高5 7cm 的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30 45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；(2) 壮苗培养将微扦插培养成约3 5节、高5 7cm的幼苗切成一节一芽、约3 5 节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30 45天，幼苗约2 3节、高3 5cm、茎变粗；(3) 生根培养将培养的壮苗接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养 20 30天后，幼苗长高成约5 7cm、苗基部长出5 10根细根；(4) 移栽将生根组培苗移栽于基质中，培育1 2个月至成苗。(5) 定植将移栽苗定植在大田中，培育6 10个月至植株。所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于所述的培养基，包括基本 培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为(1 )基本培养基选用MS培养基或1/2MS培养基，琼脂8 g/L， pH5.8;(2) 诱导培养基MS+BAlmg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L;(3) 微扦插培养基MS+BA0.5mg/L+NAA0.1 mg/L+白糖30g/L;(4) 壮苗培养基MS+ BA O.lmg /L+ NAA0.05mg/L +PP333 0.2mg /L+白糖30g/L;(5) 微嫁接培养基MS+BA0.1mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖40g/L;(6) 生根培养基1/2MS+NAA0.1mg/L+白糖20g/L;(7) 无菌播种培养基1/2MS+白糖20g/L。 所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的人参果茎尖脱毒培养时外植体的灭菌处理是经75%酒精浸泡0.5 1.0min，再用0.1%升汞溶液灭菌10 15本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：１）、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：（１）基本培养基：选用ＭＳ培养基或１／２ＭＳ培养基，蔗糖或白糖２０～４０ｇ／Ｌ，琼脂７～９ｇ／Ｌ，ｐＨ５．６～５．８；（２）诱导培养基：ＭＳ＋ＢＡ０．５～２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．０５～０．５ｍｇ／Ｌ；（３）微扦插培养基：ＭＳ＋ＢＡ０．１～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５～０．５ｍｇ／Ｌ；（４）壮苗培养基：ＭＳ＋ＢＡ０．０５～０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０１～０．１ｍｇ／Ｌ＋ＰＰ↓［３３３］０．１～０．５ｍｇ／Ｌ；（５）微嫁接培养基：ＭＳ＋ＢＡ０．０５～０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．０５～０．５ｍｇ／Ｌ；（６）生根培养基：１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．０５～０．５ｍｇ／Ｌ；（７）无菌播种培养基：１／２ＭＳ；２）、人参果茎尖脱毒培养：（１）外植体的选取与灭菌：剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；（２）茎尖培养：将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在双筒解剖镜下，摘出０．２～０．３ｍｍ大小的带１～２个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养２０～３０天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养２０～３０天，培养成３～５节、高５～７ｃｍ的幼苗；（３）微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、３～５节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养３０～４５天每节又培养成３～５节、高５～７ｃｍ的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔３０～４５天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；（４）壮苗培养：将微扦插培养成３～５节、高５～７ｃｍ的幼苗切成一节一芽、３～５节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养３０～４５天，幼苗２～３节、高３～５ｃｍ、茎变粗；３）、指示植物番茄的无菌苗培养：（１）外植体的选取与灭菌：取番茄的种子，经灭菌处理，作为无菌播种的外植体；（２）无菌播种培养：将灭菌处理后的种子接种在无菌播种培养基上，在培养条件下培养２０～３０天后，从种子培育成高５～７ｃｍ的幼苗；（３）微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、３～５节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养３０～４５天每节又培养成３～５节、高５～７ｃｍ的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔３０～４５天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；４）、微嫁接培养：（１）微嫁接砧木准备：将步骤２）人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈剑平，徐刚，汪一婷，吕永平，牟豪杰，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]