用于检测靶核酸的高灵敏度方法技术

本文提供：一种能够抑制样品中的非靶核酸的核酸扩增和选择性地核酸扩增靶核酸的方法，其中在样品中混合存在大量的非靶核酸和罕见的靶核酸；一种用于以高灵敏度检测罕见突变基因的方法，所述方法组合该核酸扩增方法和用于检测靶核酸的特异性实时方法；以及一种用于该方法的组合物和试剂盒。

High sensitivity method for detecting target nucleic acid

This paper provides a method for selectively and nucleic acid can inhibit the non target nucleic acid in the sample and amplification of the target nucleic acid in the sample, which has a large number of mixed non target nucleic acid and rare target nucleic acid; for a rare mutant gene with high sensitivity detection method, the method of the combination of nucleic acid amplification method and a method for real-time detection of specific target nucleic acid; and a composition and a kit for the method.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测靶核酸的高灵敏度方法
本专利技术涉及一种靶核酸的高灵敏度检测方法，其包括组合至少一种选择性抑制非靶核酸的核酸扩增的寡核苷酸和具有错配核酸内切酶活性的多肽。
技术介绍
已知有遗传性或后天性疾病与包括碱基置换、缺失和插入的基因突变有关。在这些突变中，某些突变与疾病直接相关和某些突变与疾病的风险和/或预后有关。在这些疾病中，对于随着疾病的进展而野生型基因变为突变型基因或具有突变型基因的细胞增加的疾病，检测突变型基因的存在是重要的。伴有基因突变的后天性疾病的实例和与疾病有关的基因突变的实例包括：肺癌和EGFR基因突变或K-ras基因突变；肺鳞状细胞癌和DDR2基因突变；结肠直肠癌和K-ras基因突变、PIK3CA基因突变或B-raf基因突变；及胃癌和Kit基因突变或PDGFR基因突变。也存在与上述的案例相反的情况。例如，在伴有基因突变的后天性疾病治疗过程中，监测到突变型基因减少和野生型基因增加。作为一个实例，提到微小残留病变的检测。作为一种分析基因突变的方法，限制性片段长度多态性方法(RFLP法)已被常规使用。然而，RFLP法需要繁琐操作和时间长。另外，依单核苷酸多态性(SNP)位点本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在含有靶核酸和具有与靶核酸同源的核苷酸序列区域的非靶核酸的样品中选择性切割非靶核酸的方法，所述方法包括使样品与以下接触的步骤：(i) 寡核苷酸，当所述寡核苷酸与非靶核酸杂交时其形成至少一个错配，和当所述寡核苷酸与靶核酸杂交时，比所述寡核苷酸与非靶核酸杂交时形成更多的错配；和(ii) 具有错配核酸内切酶活性的多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.20 JP 2015-0582701.一种在含有靶核酸和具有与靶核酸同源的核苷酸序列区域的非靶核酸的样品中选择性切割非靶核酸的方法，所述方法包括使样品与以下接触的步骤：(i)寡核苷酸，当所述寡核苷酸与非靶核酸杂交时其形成至少一个错配，和当所述寡核苷酸与靶核酸杂交时，比所述寡核苷酸与非靶核酸杂交时形成更多的错配；和(ii)具有错配核酸内切酶活性的多肽。2.权利要求1的方法，其中非靶核酸通过碱基置换具有与靶核酸的核苷酸序列不同的核苷酸序列，并且当所述寡核苷酸与非靶核酸杂交时所述寡核苷酸形成至少一个错配，和当所述寡核苷酸与靶核酸杂交时形成与所述至少一个错配对应的错配和至少另一个错配。3.权利要求2的方法，其中当所述寡核苷酸与非靶核酸杂交时所述寡核苷酸形成一个错配，和当所述寡核苷酸与靶核酸杂交时形成与所述一个错配对应的错配和另一个错配。4.权利要求3的方法，其中当所述寡核苷酸与靶核酸杂交时形成的两个错配位置连续或间隔不超过5个碱基。5.权利要求1的方法，其中非靶核酸通过碱基插入具有与靶核酸的核苷酸序列不同的核苷酸序列，并且当所述寡核苷酸与在非靶核酸中含有插入的区域杂交时，所述寡核苷酸形成至少一个错配。6.权利要求1的方法，其中非靶核酸通过碱基缺失具有与靶核酸的核苷酸序列不同的核苷酸序列，并且当所述寡核苷酸与在非靶核酸中含有缺失的区域杂交时，所述寡核苷酸形成至少一个错配。7.权利要求1-6中任一项的方法，其中具有错配核酸内切酶活性的多肽为源自耐热微生物的多肽或其突变体。8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述方法在酸性高分子物质存在下实施。9.一种在含有靶核酸和具有与靶核酸同源的核苷酸序列区域的非靶核酸的样品中选择性扩增靶核酸的方法，所述方法包括：(1)通过权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：上森隆司，相良武宏，井上晃一，
申请(专利权)人：宝生物工程株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP