一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法技术

本发明专利技术公开一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱与咖啡因的方法，按照如下步骤进行：(1)制备样品溶液：取适量样品，用有机溶剂溶解，配制成每1L含茶碱和咖啡因2.5×10

【技术实现步骤摘要】
一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法
本专利技术属于高效液相色谱法领域，特别是一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法。
技术介绍
茶碱的化学结构式：茶碱是嘌呤母核或黄嘌呤母核生物碱，从新鲜茶组织中提取，可松弛支气管平滑肌，是一种抗支气管痉挛药，具有良好的平喘作用；对肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放组胺有抑制作用，具有良好的抗炎性；也具有较好的兴奋中枢神经、解热镇痛和持久的利尿的功效。同时茶碱也是化学合成咖啡因的一种重要的中间体。咖啡因，化学结构式：咖啡因是一种黄嘌呤生物碱化合物，可从茶叶、咖啡果实等天然植被组织中提取，与茶碱结构类似，但药理效果却不相同，咖啡因是一种中枢神经兴奋剂，能够驱走睡意并恢复精力，也可作为人们日常的食品添加剂，如可乐、咖啡类饮料等。高效液相色谱方法经过近60年的发展，在色谱理论研究和分析实践等方面已取得长足的进步，并作为一种成熟的分析手段为各国药典所采用。高效液相色谱法适合分析沸点高、热稳定性差及分子量较大的物质，具有高速、高效、高灵敏度的优点，在制药工程、食品分析、环境检测、生物工程等方面有着广泛的应用。柱子反复使用，用一根色谱柱可分离不同的化合物；由于它使用了非破坏性检测器，样品分析后，可除去流动相，回收少量珍贵药品，亦可用于样品的纯化制备。目前，关于茶碱和咖啡因高效液相色谱分离法的报道，我们查到如下一些文献：1.王嘉琦，贾丽，夏敏.液相色谱法测定饮料中咖啡因、可可碱和茶碱.现代食品科技.2011，27(1)：114-116；其中提到茶碱的含量测定，采用高效液相色谱法，用C18色谱柱(250mm×4.6mm)，以甲醇和水为流动相，流速1.0mL/min，检测波长271nm。2.陆向红，王定海，计建炳.高速逆流色谱分离茶叶中咖啡因和茶碱.中草药.2005，10(36):1492-1494；其中提到茶碱与咖啡因的分离，采用高速逆流色谱法，选择氯仿-水(1:1)，流量10mL/min，转速339r/min为色谱条件，但使用氯仿为溶剂，造成了产品的二次污染。3.申请号：200610134544.2，专利技术名称：含间苯二酚大孔球状吸附树脂的合成及其应用方法，其中提到应用大孔球状吸附树脂提取茶碱和咖啡因，是将吸附树脂装成树脂柱，用1MHCl和40％的甲醇溶液洗脱，操作复杂且灵敏度不高。4.蒋旭红，吴嫦秋，刘展眉.茶碱分子印迹聚合物微球的合成及其性能研究.中草药.2013，15(44):2055-2058；其中提到所合成的分子印迹微球具有特异性吸附能力，特异性识别茶碱分子，实现其与咖啡因的分离，但分子印迹聚合物合成及后续处理复杂。关于一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法，到目前为止未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决上述存在的问题，提供一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法，该方法灵敏度高、操作简单，不会对药物、保健品、食品造成二次污染。为实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：(1)制备样品溶液：取适量样品，用有机溶剂溶解，配制成每1L含茶碱和咖啡因2.5×10-3～2.5×10-5的样品溶液；所述样品为茶碱与咖啡因的混合物；(2)设定参数：将松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为0.1-1.0mL/min，检测波长254-270nm，柱温箱30±10℃；(3)分离：启动进样阀使流动相将样品溶液带入松香基高分子色谱柱中，实现茶碱和咖啡因的分离。作为技术方案的进一步改进，以上所述的松香基高分子色谱柱，其柱内填料为松香基高分子微球。作为技术方案的进一步改进，以上所述的松香基高分子微球有为带羧基型、带酯基型或带羟基型三种中的一种。作为技术方案的进一步改进，以上所述的松香基高分子微球为多孔材料，其粒径分布为5-20μm，平均孔径为10-15nm，比表面积为90～130m2/g，酸值为0.5～2.5mmol/g。作为进一步的说明，以上所述松香基高分子色谱柱，柱径与柱高比值为1:1-300，柱内管径在1-100mm，柱高10-300mm。作为进一步的说明，所述有机溶剂为甲醇、乙腈。本专利技术所使用的松香基高分子色谱柱，是通过如下方法制备出来的：(1)带羧基型：按照专利201010100733.4制备带有羧基的松香基高分子微球，按照专利201611001162.2填充制备色谱柱。(2)带酯基型：按照专利201611001162.2合成带有酯基的松香基高分子微球并填充制备色谱柱。(3)带羟基型：按照专利201610998945.6合成带有羟基的松香基高分子微球并填充制备色谱柱。本专利技术制备出的松香基高分子色谱柱，其填料膨胀度小、比表面积大，可用于提取植物中的有效成分，并可在有机溶剂中使用，不会因膨胀而破坏微球的网状结构，以松香基高分子微球为填料制备的松香基高分子色谱柱，因富含大小不一的孔结构，具有通透性好、背压低、高效和高通量等优点，在较高的流速和压力下，没有出现压塌的现象，并且稳定性好，可重复使用，长时间使用后，色谱柱里的填料仍没有破坏、溶解。与现有的技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术所使用的色谱柱，对茶碱和咖啡因有较好的分离效果，分离度为5.31，与已有的商品柱C18柱相比，C18柱的分离度为0.90；(2)松香基高分子微球以天然产物松香的衍生物为原料，廉价易得，机械强度高，安全无毒，能够用于食品级的分离；(3)HPLC灵敏度高，操作简单，分离过程中不会造成目标产物的破坏。附图说明图1为C18柱对茶碱与咖啡因混合溶液的液相分离图；图2为本专利技术实施例1对茶碱与咖啡因混合溶液的液相分离图；图3为本专利技术实施例2对茶碱与咖啡因混合溶液的液相分离图；图4为本专利技术实施例3对茶碱与咖啡因混合溶液的液相分离图；图5为本专利技术实施例4对茶碱与咖啡因混合溶液的液相分离图；图6为本专利技术实施例5对茶碱与咖啡因混合溶液的液相分离图；图7为本专利技术实施例6对茶碱与咖啡因混合溶液的液相分离图；图8为本专利技术实施例7对茶叶提取物的液相分离图；图9为本专利技术实施例7对咖啡因的液相分析图；具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式并不局限于实施例表示的范围。应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因：实施例1将带有羧基的松香基高分子微球填充制备色谱柱接入高效液相色谱仪，用甲醇冲洗至基线平衡即可进样。一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法，按照如下步骤进行：(1)制备样品溶液：取适量茶碱、咖啡因，用甲醇溶解，配制成每1L含茶碱2.5×10-5mol的茶碱与咖啡因混合溶液，进样；(2)设定参数：将松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为0.3mL/min，检测波长270nm，柱温箱25℃；(3)分离：启动进样阀使甲醇将样品带入松香基高分子色谱柱中，进样量为20μL，实现茶碱和咖啡因的分离，所得结果如图所示，在保留时间，18.44min时出现茶碱峰，在保留时间23.98min时出现咖啡因峰，分离度为5.31。在本实施例中，松香基高分子色谱柱的柱径与柱高比值为1:54，其柱内填料为带有羧基的松香基高分子微球，所述松香基高分子微球为多孔材料，其粒径5～20μm，平均孔径为11.42nm，比表面积为89.44m2/g，酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)制备样品溶液：取适量样品，用有机溶剂溶解，配制成每1L含茶碱和咖啡因2.5×10

【技术特征摘要】
1.一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)制备样品溶液：取适量样品，用有机溶剂溶解，配制成每1L含茶碱和咖啡因2.5×10-3～2.5×10-5的溶液；所述样品为茶碱与咖啡因的混合物；(2)设定参数：将松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为0.3～1.0mL/min，检测波长254～270nm，柱温箱30±10℃；(3)分离：启动进样阀使流动相将样品带入松香基高分子色谱柱中，实现茶碱与咖啡因的分离。2.根据权利要求1所述的一种应用松香基高分子色谱柱分离茶碱和咖啡因的方法，其特征在于：所述松香基高分子色谱柱，其柱内填料为松香基高分子微球。3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷福厚，王海洋，王婷，李鹏飞，覃丽婷，王振，程格格，孙耀，
申请(专利权)人：广西民族大学，
类型：发明
国别省市：广西,45