一种表达木糖醇脱氢酶基因的质粒的构建方法技术

一种表达木糖醇脱氢酶基因的质粒的构建方法，它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了目前酿酒酵母缺乏木糖醇脱氢酶（ＸＤＨ），而不能使木糖代谢后产生乙醇问题。构建方法：一、克隆ｘｙｌ２基因；二、回收、纯化ｘｙｌ２基因片段后与ｐＧＭＴ　ｖｅｃｔｏｒ载体连接，得到ｐＧＭＴ－ｘｙｌ２；三、重组质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－１的构建；四、重组质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－２的构建；五、重组质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－３的构建；六、将ｘｙｌ２基因加入质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－３，即得到表达木糖醇脱氢酶基因的质粒。本发明专利技术方法所构建的载体转化酿酒酵母后实现了木糖醇脱氢酶基因的高效稳定表达。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种表达木糖醇脱氢酶基因的质粒的构建方法，其特征在于表达木糖醇脱氢酶基因的质粒的构建方法按以下步骤进行：一、以休哈塔假丝酵母基因组为模板克隆ｘｙｌ２基因；二、回收、纯化ｘｙｌ２基因片段后与ｐＧＭＴ　　ｖｅｃｔｏｒ载体在１６℃的条件下连接１０～１２ｈ，得到ｐＧＭＴ－ｘｙｌ２；三、重组质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－１的构建，克隆质粒ｐＫＴ０１５０中的ＡＤＨｔ基因序列，然后以酿酒酵母整合载体ｐ４０６ＡＤＨ１为骨架引入ＡＤＨｔ基因；四、重组质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－２的构建，克隆质粒ｐＫＴ０１５０中的ＫａｎＲ基因，再将ＫａｎＲ基因加入质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－１；五、重组质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－３的构建，克隆酿酒酵母中的ｒＤＮＡ基因，再将ｒＤＮＡ基因加入质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－２；六、将ｘｙｌ２基因加入质粒ｐ４０６ＡＤＨ１－３，即得到表达木糖醇脱氢酶基因的质粒；其中步骤一中扩增上游引物序列为５’－ＴＧＴＴＣＴＡＧＡＡＴＧＡＣＴＧＣＷＡＡＣＣＣＷＴＣＭＴＴＲＧＴ－３’，下游引物序列为５’－ＴＡＴＣＴＣＧＡＧＹＴＡＹＴＣＷＧＧＲＣＣＲＴＣＡＡＴＫＡＲＡＣ－３’；步骤三中ＡＤＨｔ基因序列扩增上游引物序列为５’－ＡＡＴＣＴＣＧＡＧＴＴＴＧＴＴＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴ－３’，下游引物序列为５’－ＴＡＴＧＧＴＡＣＣＣＡＡＧＡＣＴＧＴＣＡＡＧＧＡＧＧＧ－３’；步骤四中ＫａｎＲ基因扩增上游引物序列为５’－ＴＴＡＧＧＴＡＣＣＴＣＴＧＴＴＴＡＧＣＴＴＧＣＣＴ－３’，下游引物序列为５’－ＴＡＴＣＡＴＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＧＡＴＧＡＡＴＴＣＧ－３’；步骤五中ｒＤＮＡ基因扩增上游引物序列为５’－ＣＴＧＣＡＴＡＴＧＧＧＡＡＣＣＴＣＴＡＡＴＣＡＴＴＣＧＣＴＴ－３’，下游引物序列为５’－ＴＣＡＣＡＴＡＴＧＡＡＣＧＡＡＣＧＡＧＡＣＣＴＴＡＡＣＣＴ－３’。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：平文祥，葛菁萍，杜春梅，凌宏志，宋刚，赵丹，高冬妮，洛雪，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]