一种猪粪样总DNA的提取方法技术

本发明专利技术涉及微生物学和分子生物学技术领域，是一种猪粪样总ＤＮＡ的提取方法，本发明专利技术主要包括粪便样品的预处理、样品总ＤＮＡ提取。以采集新鲜粪便样品或冻存的粪便样品为材料，先用ＰＢＳ缓冲液、多聚甲醛溶液、无水乙醇等进行粪便样品的预处理，获得粪样菌悬液；再以ＣＴＡＢ溶液、β－巯基乙醇等共同裂解细胞释放ＤＮＡ。本发明专利技术具有操作简单、快捷、高效、重复性好以及经济等特点，所提ＤＮＡ浓度、纯度及得率高，无需纯化就能直接用于ＰＣＲ扩增等后续分子生物学实验研究。

【技术实现步骤摘要】
一种猪粪样总DNA的提取方法
本专利技术属于微生物学和分子生物学
，具体涉及从猪粪便样品中提取总DNA的 方法。 哺乳动物肠道中存在约30个属500多种不同的细菌，约lxlO"个活细菌，形成了复杂 而动态平衡的微生态系统，对宿主营养物质的消化、吸收及免疫机制激活、生长发育等都起 着十分重要的作用。若这种微生态平衡失调，则动物机体正常的生理功能就会发生紊乱，导 致疾病的发生、流行，对畜牧养殖业尤其是规模化养殖产生了极大的潜在威胁。因而，近年 来对肠道微生物区系结构及其多样性研究成为当前的热点，但由于肠道的特殊生存环境，使 得肠道中有60%-80%的微生物是目前无法用传统的分离培养技术进行研究，从而阻碍了人 们对肠道微生物结构及其多样性的客观认识。随着现代分子生物学技术的发展及其在微生态学研究中的应用，人们能避开了传统菌的 群分离培养过程，直接从DNA水平上对这些肠道菌群进行相关研究，因此，获得高质量、 具有代表性的肠道菌群总DNA就成为这些研究的前提和重要技术手段。但由于粪便不但组 成成分复杂(含有多聚糖、胆酸、胆盐、胆色素等PCR的强抑制物)，而且粪便中细菌类 型数目繁多，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪粪样总ＤＮＡ的提取方法，其方法特征在于按如下步骤操作：　　　　（１）取适量经过预处理的粪便样品菌悬液于１．５或２ｍｌ离心管中，１２，０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，弃上清；　　　　（２）加入０．８～１．５ｍｌ经６０～７０℃预热的裂解液及适量浓度的β－巯基乙醇溶液，混匀后６０～７０℃水浴０．５～１ｈ，每隔几分钟取出摇匀一次；　　　　（３）１２，０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ，离心后，移出上清于另一无菌１．５或２ｍｌ离心管中，弃沉淀；　　　　（４）向上清中加入等体积的氯仿∶异戊醇（２４∶１），混匀后，１０，０００ｒｐｍ离心１０ｍｉｎ，取上清至另一无菌１．５或２ｍｌ离心管中；　　　　（５）加入等体积的氯仿...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王红宁，唐俊妮，曾志光，樊汶樵，谢波，曾瑜虹，杨鑫，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]