核酸分子NRN1SR1及其在制备抗癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及ＮＲＮ１ＳＲ１及其在制备抗肿瘤药物中的应用。肿瘤严重威胁着人类的健康。本发明专利技术提供了一种用于制备抗肿瘤药物的核苷酸分子ＮＲＮ１ＳＲ１，其序列包括５’－ＧＧＣＡＧＣＵＵＡＵＵＣＧＡＡＣＵＣＵ－３’或者５’－ＧＧＣＡＧＣＴＴＡＴＴＣＧＡＡＣＴＣＴ－３’。含有ＮＲＮ１ＳＲ１的裸鼠与相同培养条件下不含ＮＲＮ１ＳＲ１的裸鼠相比，瘤体的增长明显受到抑制，而且这种现象随着时间的推移日益明显。本发明专利技术为肿瘤的治疗和缓解提供了一种新的途径和手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及一种核苷酸分子及其在制备抗肿瘤药物中 的应用。
技术介绍
肿瘤疾病现已上升为世界第2号〃杀手〃，其死亡人数仅次于心血管病。几 年来，国外医学界对于肿瘤疾病的发病机理在细胞基础上又有了新的认识。基 于对肿瘤发病机制的进一步理解，人们利用各种途径来研制和开发能够特异，有 效地杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无毒性的药物。目前，对于癌症的治疗仍以化 疗及放疗为首选，两者虽对肿瘤的治疗取得了相当的疗效，但由于缺乏对肿瘤细 胞的特异性因而具有较大的毒副作用以及某些肿瘤细胞对化疗和放疗处理的不 敏感，因此在很大程度上限制了它们在临床中的应用。近年来，为了开发出能 特异性地杀伤癌细胞而对正常细胞无毒负作用的药物，人们对癌症的发病机制从 细胞，分子水平上的研究予以高度重视和巨额投资。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于制备抗肿瘤药物的核苷酸分子。 本专利技术的另一个目的是提供上述核苷酸分子的应用。本专利技术提供了一种用于制备抗肿瘤药物的核苷酸分子，它具有抑制肿瘤生 长的活性并且其序列包括5' - GGCAGCTTATTCGAACTCT -3' 或者5'-GGCAGCUUAUUCGAACUCU _3，，在本专利技术中被称为NRN1SR1。其中，A、 U、 G和C分别是腺嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、鸟嘌呤核苷酸和 胞嘧啶核苷酸。在本专利技术中，术语"核苷酸分子NRN1SR1"指具有抑制NRN1蛋白活性、并 且含有与5' - GGCAGCUUAUUCGAACUCU -3，序列高度同源的核酸序列。该术语还 包括与5' -GGCAGCUUAUUCGAACUCU-3，的同源性至少70%，较佳地至少80%，更 佳地至少90%的核苷酸序列。该术语还包括5， - GGCAGCUUAUUCGAACL)CU -3'的核苷酸序列变异形式。这 些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-15个，较佳地1-10个，更佳 地l-5个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5'和/或3'端添加数个(通 常为10个以内，较佳地为5个以内)核苷酸。例如，在 5' -GGCAGCUUAUUCGAACUCU-3'后(3 '端)加入若干dT (脱氧胸苷)后形成的 序列。在本专利技术中的核苷酸分子，其序列可以包括5'-GGCAGCTTATTCGAACTCT-3' 或者5， -GGCAGCUUAUUCGAACUCUdTdT-3'。本专利技术中的核苷酸分子，其序列可以包括 5' -GGCAGCU翻UCGAACUCU-3，。本专利技术中的核苷酸分子，其序列可以包括 5， -GGCAGCUUAUUCGAACUCUdTdT-3'。本专利技术中的核苷酸分子，其序列可以包括5' - GGCAGCTTATTCGAACTCT-3' 或者5' -GGCAGCUUAUUCGAACUCUdTdT-3，。本专利技术中的核苷酸分子，其序列可以是 5， -GGCAGCUUAUUCGAACUCUdTdT-3'。本专利技术还提供了一种载体，它含有序列包括5' - GGCAGCTTATTCGAACTCT-3' 或者5， -GGCAGCUUAUUCGAACUCUdTdT-3'的核苷酸分子。本专利技术的上述载体，其序列中可以包括5' -GGCAGCTTATTCGAACTCT-3'或者 5' - GGCAGCUUAUUCGAACUCU -3'。在本专利技术中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体。比如，选用 市售的载体，然后将含有本专利技术NRN1SR1核苷酸序列的 5' -GGCAGCUUAUUCGAACUCU-3'，可操作地连于表达调控序列，可以形成重组载 体。例如，可以采用慢病毒、腺病毒或者森林脑炎病毒表达系统(Semliki Forest Virus)。慢病毒(Lentivirus)属于逆转录病毒亚属，以人类免疫缺陷病毒 (human i鹏unod efficiency virus, HIV)为代表.慢病毒不仅具有感染分 裂靶细胞并整合其基因组中，尤其是具有感染包括神经元细胞、巨噬细胞、肝细 胞、心肌细胞和干细胞等在内的多种非分裂细胞能力，因而，慢病毒载体已作为 基因转移的有效工具，被广泛应用于基因功能尤其是基因治疗的研究。如本文所用，"可操作地连于"指这样一种情况，即线性腦A序列地某些部 分能够影响同一线性RNA序列其他部分地活性，例如，如果信号肽RNA作为前体 表达并参与多肽的分泌，那么信号肽(分泌前导序列)RNA就是可操作地连于多 肽RNA;如果启动子控制序列地转录，那么它是可操作地连于编码序列；如果核糖体结合位点被置于能使其翻译地位置时，那么它是可操作连于编码序列。 一般， "可操作连于"意味着相临近，而对于本专利技术的核酸分子则意味着相邻且不影响 功能。本专利技术中还提供了一种宿主细胞，它含有序列包括 5' -GGCAGCTTATTCGAACTCT-3，或者5， - GGCAGCUUAUUCGAACUCU -3，的核苷酸 分子。在本专利技术中，术语"宿主细胞"主要是真核细胞。常用的有CH0细胞、COS-7、 293细胞，等等。另一方面，本专利技术还提供了上述的核苷酸分子NRN1SR1的制备方法，即按 NRN1SR1的序列，将各核糖核酸分子依次脱水縮合。本专利技术的核苷酸分子NRN1SR1可以采用各种常规的制备方法制备。本专利技术 的核苷酸分子NRN1SR1序列通常可以用酶解法或人工合成的方法获得。本专利技术还提供了上述的核苷酸分子NRN1SR1在制备抗肿瘤药物中的应用。 体内和体外结果均验证，本专利技术的NRN1SR1可明显削减NRN1的表达。 实验证明，NRN1 (NCBI登陆号丽_016588)可以促进肿瘤生长，因此，削 减NRN1的表达就意味着抑制肿瘤生长。将含有NRN1SR1的细胞注射裸鼠的肿瘤中，与相同培养条件下不注射 NRN1SR1的裸鼠相比，瘤体的增长明显受到抑制，而且这种现象随着时间的推移 日益明显。这说明，本专利技术的N腦1SR1可以作为肿瘤抑制剂。所述的肿瘤可以是肝脏、肺或者乳腺部位的良性或者恶性肿瘤。 本专利技术的核苷酸分子NRN1SR1及其类似物，当在治疗上进行施用(给药)时， 可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受 的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可 随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通 过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)肌内、腹膜内、皮下、皮内、或 局部给药。以本专利技术的核苷酸分子NRN1SR1为例，可以将其与合适的药学上可接受的 载体联用。这类药物组合物含有治疗有效量的化合物和药学上可接受的载体或赋 形剂。这类载体包括(但并不限于)盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、 及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本专利技术的核苷酸分子NRN1SR1可以被 制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物 组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约i微克/千克体重-约io毫克/千克体重。此外，本专利技术的NRN1SR1还可与其他治疗剂一起使用。当本专利技术的核苷酸分子N本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核苷酸分子，其特征在于，它具有抑制肿瘤生长的活性并且其序列包括５’－ＧＧＣＡＧＣＵＵＡＵＵＣＧＡＡＣＵＣＵ－３’或者５’－ＧＧＣＡＧＣＴＴＡＴＴＣＧＡＡＣＴＣＴ－３’。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，仙玲玲，秦波，季国庆，杨磊，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]