一种具有抗疲劳作用的驼血多肽及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种具有抗疲劳作用的驼血多肽及其制备方法，本发明专利技术制备得到的驼血多肽产品含量＞80％，回收率＞75％。本发明专利技术与已有技术方法相比，特点在于提供了一种具有抗疲劳活性的驼血多肽的制备工艺；使用高温蒸汽进行预处理，不仅加快体系升温，而且可以使蛋白质发生变化，有利于酶切进行；整个生产过程中使用绿色溶剂，成本低、效率高、环境友好；工艺路线简单，可为食品、保健品、药品等提供具有抗疲劳活性的驼血多肽。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗疲劳作用的驼血多肽及其制备方法
本专利技术属于天然产物提取分离
，具体涉及一种具有抗疲劳作用的驼血多肽及其制备方法。
技术介绍
骆驼是骆驼科骆驼属(Camelus)的动物，是我国重要的家畜资源之一，具有重要的经济价值。骆驼血的蛋白质含量为20.51％，其中，骆驼血清的蛋白质总量中，白蛋白含量高达73.20％，白蛋白与球蛋白比率为2.72，与绵羊、牛、马等比较有极显著差异。由于骆驼生存在严酷的恶劣环境条件下，特殊的环境使其蛋白质类型、分子量、含量等有显著差异，具有特殊的生理、营养功能。骆驼作为“沙漠之舟”，其血液中的成分具有较强的抗疲劳功能。研究表明，人类对蛋白质的利用是将蛋白质酶解成多肽进行吸收利用。骆驼血含有丰富的蛋白质，是制备多肽的理想原料。由于骆驼血的特殊性质，在相关产品的运输和储藏上也存在一定的问题。因此，先利用酶解方法将蛋白质酶解成多肽，然后进行分离富集制备较高纯度和较强抗疲劳作用的驼血多肽，可以大大提高骆驼血中蛋白质的利用率和贮存性能。随着相关技术研究的不断深入，驼血多肽的应用领域将不断加大，可以广泛应用于食品、保健品和化妆品等领域，消费的上升潜力很大，而产品价格未来将相对稳定。同时，随着人民生活水平的提高，国内大中城市的高端消费群体对功能多肽产品的需求还在不断增加，相关产品市场短期内尚供不应求。在高新技术的支持下，具有抗疲劳活性的驼血多肽新产品目标市场将会得到极大的拓展。相关的驼血多肽产品方便消费者食用，有很大的市场需求。就全球市场而言，精细加工的驼血多肽产品必将成为未来骆驼血资源开发的主导方向。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有抗疲劳作用的驼血多肽及其制备方法，针对现有技术中存在的缺陷和不足，提供一种高纯度和高抗疲劳活性的驼血多肽，从而弥补现有技术的不足。本专利技术的方法，包括以下步骤：1)先将新鲜骆驼血或者冷冻骆驼血置于发酵罐中，加水搅拌均匀，通入高温蒸汽进行预处理，然后向发酵罐中加入蛋白酶进行酶解，酶解液进行高温灭酶灭菌。所述的蛋白酶为Protamex复合蛋白酶和/或复合风味蛋白酶；酶解条件是指体系pH值为5～7，温度为40～60℃，酶切时间为0.5～12h。2)将灭酶灭菌后的骆驼血酶解液冷却至室温后，离心收集上清液，得到驼血多肽粗提取液。步骤2)中的高速离心是指离心机转速为8000～20000转/分钟。3)将驼血多肽粗提取液加入大孔吸附树脂柱进行反复多次吸附，流速为4～12BV/h(柱体积，简称BV)；吸附结束后，用5～20BV的纯水进行冲洗，流速为4～12BV/h；然后用5～50BV的洗脱液进行洗脱，流速为4～12BV/h，收集洗脱液，将溶液干燥后得到驼血多肽产品。所述的大孔吸附树脂柱中使用的树脂为XDA-8、LX-68和HPD750，其质量比为1:1～3:1～5；为了获得更好的分离效果，XDA-8:LX-68:HPD750的质量比为1:3:2；所述的洗脱液为乙酸、乙醇和水的混合溶液，其体积比为1:1～10:89～98；为了获得更好的分离效果，乙酸:乙醇:水的体积比为1:5:94。利用本专利技术提供的驼血多肽可用于汤剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、酒剂、冲剂、口服液剂、胶囊剂、片剂、注射剂等食品、保健食品、药品等的原料。本专利技术方法的驼血多肽的提取率大于75％，分离纯化的驼血多肽纯度均达到80％以上，而且大孔吸附树脂的再生性能好，可以多次再生重复使用，洗脱剂无毒无害，也可以回收多次利用。与已有技术方法相比，本专利技术的特点在于提供了一种从骆驼血中制备高纯度和抗疲劳活性多肽的制备工艺；生产过程中使用绿色溶剂，成本低、效率高、环境友好；工艺路线简单，可为药物、保健品或食品等提供高纯度的驼血多肽。本专利技术可进一步促进驼血多肽的产业化开发。具体实施方式在驼血多肽的制备过程中，树脂的比例、洗脱液的组分及比例对纯化效果具有重要的影响，既要保证提取率，又要保证纯度。因此，申请人经过长期的研究，确定驼血多肽纯化的树脂比例、洗脱液的组分及比例。实施例1先将新鲜骆驼血100g置于发酵罐中，加入纯水200g，在转速为220转/分钟时搅拌均匀，通入温度为112℃的高温蒸汽进行预处理，控制体系温度为45℃，用HCl和NaOH调pH值为5.5，然后向发酵罐中加入0.5％的Protamex复合蛋白酶进行酶切，酶切2h后，再将发酵罐温度升至85℃，保温15分钟，进行灭酶灭菌。将灭酶灭菌后的骆驼血酶解液冷却至室温后，8000转/分钟进行离心，收集离心液，得到驼血多肽提取液。称取100gXDA-8型大孔吸附树脂、100gLX-68型大孔吸附树脂和100gHPD750型大孔吸附树脂，在水溶液中均匀混合，湿法装入一根内径4cm、柱高60cm的玻璃柱中，利用输液泵将驼血多肽提取液由下端泵入大孔树脂混合柱中进行反复吸附3次，流速为6BV/h，弃去吸附残液；吸附结束后，用6BV的纯水进行冲洗，流速为5BV/h，弃去水洗液；然后用10BV的乙酸:乙醇:水(1:2:97,v/v)进行洗脱，流速为5BV/h，收集洗脱液，浓缩后干燥得到驼血多肽产品。对本品进行高效液相色谱法(HPLC法)检验，色谱条件如下：色谱柱：TSKgelG2000SWXL(300mmI.D.×7.8mm)或性能与此相近的同类型其它适用于测定蛋白质和多肽的凝胶柱；流动相为乙腈:水:三氟乙酸＝20:80:0.1(体积比)；流速为0.5mL/min；检测波长为214nm；进样量为10μL。检测结果表明驼血多肽的纯度为83.2％，驼血多肽的提取率为76.1％。树脂柱以70％乙醇除杂后，再以95％乙醇再生重复使用，并回收溶剂。实施例2先将冷冻骆驼血300g置于发酵罐中，加入纯水1200g，在转速为250转/分钟时搅拌均匀，通入温度为115℃的高温蒸汽进行预处理，控制体系温度为50℃，用HCl和NaOH调pH值为6.0，然后向发酵罐中加入2％的复合风味蛋白酶进行酶切，酶切5h后，再将发酵罐温度升至90℃，保温20分钟，进行灭酶灭菌。将灭酶灭菌后的骆驼血酶解液冷却至室温后，10000转/分钟进行离心，收集离心液，得到驼血多肽提取液。称取300gXDA-8型大孔吸附树脂、600gLX-68型大孔吸附树脂和900gHPD750型大孔吸附树脂，在水溶液中均匀混合，湿法装入一根内径8cm、柱高120cm的玻璃柱中，利用输液泵将驼血多肽提取液由下端泵入大孔树脂混合柱中进行反复吸附3次，流速为8BV/h，弃去吸附残液；吸附结束后，用7BV的纯水进行冲洗，流速为8BV/h，弃去水洗液；然后用15BV的乙酸:乙醇:水(1:8:91,v/v)进行洗脱，流速为8BV/h，收集洗脱液，浓缩后干燥得到驼血多肽产品。对本品进行高效液相色谱法(HPLC法)检验，驼血多肽的纯度为86.8％，驼血多肽的提取率为78.9％。树脂柱以70％乙醇除杂后，再以95％乙醇再生重复使用，并回收溶剂。实施例3先将新鲜骆驼血1000g置于发酵罐中，加入纯水6000g，在转速为300转/分钟时搅拌均匀，通入温度为120℃的高温蒸汽进行预处理，控制体系温度为55℃，用HCl和NaOH调pH值为6.5，然后向发酵罐中加入5％的Protamex复合蛋白酶和复合风味蛋白酶(1:3)进行酶切，酶切1h后，再将发酵罐温度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种驼血多肽的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：1)先将新鲜骆驼血或者冷冻骆驼血置于发酵罐中，加水搅拌均匀，通入高温蒸汽进行预处理，然后向发酵罐中加入蛋白酶进行酶解，酶解液进行高温灭酶灭菌；2)将灭酶灭菌后的骆驼血酶解液冷却至室温后，离心收集上清液，得到驼血多肽粗提取液；3)将驼血多肽粗提取液加入大孔吸附树脂柱进行反复多次吸附，流速为4～12BV/h(柱体积，简称BV)；吸附结束后，用5～20BV的纯水进行冲洗，流速为4～12BV/h；然后用5～50BV的洗脱液进行洗脱，流速为4～12BV/h，收集洗脱液，将溶液干燥后得到驼血多肽产品。

【技术特征摘要】
1.一种驼血多肽的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：1)先将新鲜骆驼血或者冷冻骆驼血置于发酵罐中，加水搅拌均匀，通入高温蒸汽进行预处理，然后向发酵罐中加入蛋白酶进行酶解，酶解液进行高温灭酶灭菌；2)将灭酶灭菌后的骆驼血酶解液冷却至室温后，离心收集上清液，得到驼血多肽粗提取液；3)将驼血多肽粗提取液加入大孔吸附树脂柱进行反复多次吸附，流速为4～12BV/h(柱体积，简称BV)；吸附结束后，用5～20BV的纯水进行冲洗，流速为4～12BV/h；然后用5～50BV的洗脱液进行洗脱，流速为4～12BV/h，收集洗脱液，将溶液干燥后得到驼血多肽产品。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中的蛋白酶为Protamex复合蛋白酶和/或复合风味蛋白酶。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中酶解条件是体系pH值为5～7，温度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：邸多隆，刘永峰，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62