一种基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达的方法。该方法包括用农杆菌侵染液悬浮活化后的农杆菌；将甘蓝或甘蓝型油菜幼苗叶片切割成小块；将叶片小块置于农杆菌侵染液中，抽真空处理促进农杆菌对植物组织的渗入；将农杆菌侵染后的叶片小块暗培养的步骤。本发明专利技术结合叶片预处理和真空处理实现农杆菌渗入甘蓝或甘蓝型油菜叶片组织中从而实现农杆菌高效浸染甘蓝或甘蓝型油菜细胞，并且可以实现高效率的甘蓝和甘蓝型油菜中外源基因瞬时表达。

【技术实现步骤摘要】
一种基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达的方法。
技术介绍
瞬时表达方法是指将外源基因转入细胞中，通过外源基因在目的细胞中的表达获得表达产物或特定性状的方法。通常用于研究蛋白功能、启动子特性、外源基因表达产物的收集以及新生物学工具的测试等。目前常用的瞬时表达方法为基因枪或PEG介导的原生质体外源基因表达，或农杆菌介导的叶片瞬时表达，但两种方法多用于拟南芥或烟草等模式植物中。与原生质体中的瞬时表达方法相比，农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达方法操作更简单，成本更低。但该方法局限很多，由于甘蓝和甘蓝型油菜的叶片结构或气孔形态、特性与烟草不同，用于烟草叶片的瞬时表达方法不适用于甘蓝和甘蓝型油菜。此外，由于甘蓝和甘蓝型油菜的表皮细胞与叶肉细胞结合太过紧密，通过撕表皮促进侵染的方法也不可行。目前有少量报导利用PEG或农杆菌介导的甘蓝或甘蓝型油菜的原生质体转化，或者使用基因枪轰击原生质体的方法进行瞬时表达实验。但原生质体制备、转化及培养对实验操作要求较高，并且试剂成本高，实验周期长(Thomzik,J.E.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达的方法，其特征在于包括以下步骤：1)用农杆菌侵染液悬浮活化后的农杆菌；2)将甘蓝或甘蓝型油菜幼苗叶片切割成小块；3)将叶片小块置于农杆菌侵染液中，抽真空处理促进农杆菌对植物组织的渗入；4)将农杆菌侵染后的叶片小块暗培养。

【技术特征摘要】
1.一种基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达的方法，其特征在于包括以下步骤：1)用农杆菌侵染液悬浮活化后的农杆菌；2)将甘蓝或甘蓝型油菜幼苗叶片切割成小块；3)将叶片小块置于农杆菌侵染液中，抽真空处理促进农杆菌对植物组织的渗入；4)将农杆菌侵染后的叶片小块暗培养。2.根据权利要求1所述基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达方法，其特征在于所述步骤1)中，农杆菌指根癌农杆菌为GV3101或EHA105等常用于甘蓝和甘蓝型油菜侵染的菌株。3.根据权利要求1或2所述基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达方法，其特征在于所述步骤1)中，农杆菌在含有相应抗生素的LB液体培养至OD600约为0.7，将农杆菌离心富集后2倍培养基体积的农杆菌重悬液重悬菌体。4.根据权利要求1所述基于真空渗入的甘蓝和甘蓝型油菜叶片瞬时表达方法，其特征在于所述农杆菌侵染液的组成成分为：1×MS，20g/L蔗糖，100μM乙酰丁香酮，10mM2-(N-吗啡啉)乙磺酸，1.5mMMgSO4，20μMFeSO...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙勤富，王幼平，吴健，蒋金金，林俐，方玉洁，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32