一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及生物制品领域，具体涉及一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法。本发明专利技术包括枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌三个菌群，施入水体后能在水体中营养物质的作用下，快速繁殖，形成有优势的菌群，使用过程中耗氧量较低，可以快速分解养殖水体中的残饵等污染物，改良水体底部环境，离心干燥提取的复合菌液基体通过发酵得到的发酵物，加入混合微量元素和蛭石进行混合，得到的复合微生物菌剂通过蛭石的吸附作用能够快速沉降到水体底部，直接作用于水体底部环境，具有良好的稳定性和高效性，同时复合微生物菌剂中的微量元素易溶于水，易于挥发，可以补充水产品生长过程中所需要的微量元素，提高水产品的产量和质量。

【技术实现步骤摘要】
一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法
本专利技术涉及生物制品领域，具体涉及一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法。
技术介绍
水体是鱼虾等水产动物生存生长所必须依赖的环境，水质的好坏是水产养殖特别是集约化养殖成败的关键。随着水产养殖业的迅速发展，水质污染越来越严重。养殖水体污染是指由于人类的活动（生产、生活等）、养殖对象自身的分泌物和排泄物、饵料过剩、药物残留等因素造成水体破坏，水质因子平衡失调的现象。近年来，我国水产养殖业发展迅速，养殖规模不断扩大。但是目前我国的水产养殖多数采用的是高密度集约化的养殖模式，苗种放养过量，大量施肥投饵，使残留饵料、水生生物排泄物及尸体、养殖水体底部沉积物、各种有机无机肥料等富营养因子共处一个水体，进而发生非正常变化，产生有害物质如氨氮、亚硝酸盐、硫化氢等，引起水产养殖动物发病甚至死亡。而工业污水及生活污水的排放无疑加重了养殖水体的污染，严重制约了我国水产养殖业的可持续发展。由于在养殖过程中常进行过量的施肥投饵，使得大量残饵、渔用肥料、养殖动物排泄物和生物残骸所产生的氨氮、亚硝酸盐、硫化物等成为主要污染物，因此使得养殖水体的自净能力严重下降，使得水产品的微量元素严重缺少。目前应用于水质处理的有物理、化学、生物等修复方法。在本专利技术中主要使用微生物修复，其是一种利用微生物对环境污染物吸收、代谢降解的技术。复合微生物菌剂由两种或两种以上且互不拮抗的微生物菌种制成的微生物制剂。此类菌剂一般具有种类全、配伍合理、功能性强、经济效益高等优良特点。复合微生物菌剂按其制品中特定的微生物种类分为细菌菌剂、放线菌菌剂(如抗生菌类)、真菌菌剂(如菌根真菌类)、固氮蓝藻菌剂等；按其作用机理分为根瘤菌类菌剂、固氮菌类菌剂、解磷菌类菌剂、解钾菌类菌剂；按其制品内含物可分为单纯的微生物菌剂和复合(或复混)微生物菌剂等。总的来说，复合微生物菌肥可以增进土壤肥力、制造和协助农作物吸收营养、增强植物抗病和抗旱能力。特别的是，目前水产养殖的中水体底部污染严重，虽然使用化学药剂进行处理可以达到较好的效果，但易产生二次污染。因此，专利技术一种性能优良的水产养殖用复合微生物菌肥，以此来适应于我国水产养殖业的需求，这将大大推动我国水产养殖的发展。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：本专利技术所要解决的技术问题：针对目前水产养殖的中水体底部污染严重，虽然使用化学药剂进行处理可以达到较好的效果，但易产生二次污染的问题，提供了一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下所述的技术方案是：一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：（1）将混合菌粉加入初级培养液进行活化并混合培养，得混合菌液，再将混合菌液加入二级培养液中扩大培养至对数生长期，调节OD600值，得待干燥混合菌液；（2）将上述待干燥混合菌液放入离心机中离心，移去上清液，得到沉淀，将沉淀、水及冻干保护剂混合均匀，得菌悬液，将制得的菌悬液移入真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得干燥物；（3）将上述干燥物与干燥物质量4倍的蒸馏水，混匀后离心，移去上层清液，收集下层沉淀，并将下层沉淀干燥恒重后，冷却，得到复合菌剂的基体；（4）将上述复合菌剂的基体添加发酵营养液进行发酵，发酵完成后，收集发酵物，将发酵物、混合微量元素添加剂、100目的蛭石混合均匀，静置，冷冻干燥，粉碎过筛，收集过筛颗粒，得水产养殖用复合微生物菌剂。所述步骤（1）中混合菌粉中包括枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌，枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌的质量比为2：1：1，初级培养液配方按重量份数计，取牛肉膏1.2~2份、胰酪胨2.5~5份、马铃薯全粉8~10份、琼脂12~15份、葡萄糖1.5~2.5份、NaCl3~5份、KH2PO41.2~2.5份、吐温-800.6~1份、半胱胺酸0.2~0.8份、水1000份，pH值7.0±0.2，121℃灭菌30min，得初级培养液。所述步骤（1）中扩大培养的条件：温度为30~35℃，培养时间18~24h；OD600的调节值为1.5，若OD600＞1.5，用二级培养液稀释至OD600=1.5；若OD600＜1.5可先离心后移去部分上清液，再调整至OD600=1.5，二级培养液的配方按重量份数计，取胰酪胨12~17份、蛋白胨1~5份、牛肉膏0.2~0.5份、麦芽糖20~40份、葡萄糖10~15份、NaCl1~3份、琼脂15~20份、KH2PO41.2~2.5份、MgSO4·7H2O0.8~1.6份、维生素5~10份、水1000份，pH值7.2±0.1，121℃灭菌20min，得二级培养液。所述步骤（2）中冻干保护剂是质量分数为40%甘油溶液，沉淀、水及冻干保护剂得质量比为1：6：4。所述步骤（4）中发酵营养液的配方按重量份数计，取麸皮10~15份，蛋白胨10~15份，小米粉16~20份，Na2CO31.2~2份、MgSO4·7H2O0.1~0.2份、FeSO4·7H2O0.01~0.03份、NaCl2~6份、水1000份，搅拌均匀，得发酵营养液；所述发酵条件为20~35℃，时间为18~24h。所述步骤（4）中发酵物、混合微量元素添加剂、100目的蛭石的质量比为2：1：6，微量元素添加剂的组份包括，按质量份数计，取FeSO4·7H2O0.03~0.05份、ZnSO4·7H2O0.01~0.05份、Na2SeO30.03~0.09份、MgSO4·7H2O0.05~0.2份、Ca(IO3)20.02~0.09份。本专利技术与其他方法相比，有益技术效果是：（1）本专利技术包括枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌三个菌群，施入水体后能在水体中营养物质的作用下，快速繁殖，形成有优势的菌群，使用过程中耗氧量较低，可以快速分解养殖水体中的残饵、药物残留、大分子有机污染物等，降解氨氮、磷、亚硝酸盐、硫化氢等物质，改良水体底部环境；（2）本专利技术离心干燥提取的复合菌液基体通过发酵得到的发酵物，加入混合微量元素和蛭石进行混合，得到的复合微生物菌剂通过蛭石的吸附作用能够快速沉降到水体底部，直接作用于水体底部环境，具有良好的稳定性和高效性，同时复合微生物菌剂中的微量元素易溶于水，易于挥发，可以补充水产品生长过程中所需要的微量元素，提高水产品的产量和质量。具体实施方式混合菌粉的配制：枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌按质量比2:1:1混合均匀。初级培养液的配制：初级培养液配方按重量份数计，取牛肉膏1.2~2份、胰酪胨2.5~5份、马铃薯全粉8~10份、琼脂12~15份、葡萄糖1.5~2.5份、NaCl3~5份、KH2PO41.2~2.5份、吐温-800.6~1份、半胱胺酸0.2~0.8份、水1000份，pH值7.0±0.2，121℃灭菌30min，得初级培养液。二级培养液液的配制：二级培养液的配方按重量份数计，取胰酪胨12~17份、蛋白胨1~5份、牛肉膏0.2~0.5份、麦芽糖20~40份、葡萄糖10~15份、NaCl1~3份、琼脂15~20份、KH2PO41.2~2.5份、MgSO4·7H2O0.8~1.6份、维生素5~10份、水1000份，pH值7.2±0.1，121℃灭菌20min，得二级培养液。发酵营养液的配制：发酵营养液的配方按重量份数计，取麸皮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：（1）将混合菌粉加入初级培养液进行活化并混合培养，得混合菌液，再将混合菌液加入二级培养液中扩大培养至对数生长期，调节OD600值，得待干燥混合菌液；（2）将上述待干燥混合菌液放入离心机中离心，移去上清液，得到沉淀，将沉淀、水及冻干保护剂混合均匀，得菌悬液，将制得的菌悬液移入真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得干燥物；（3）将上述干燥物与干燥物质量4倍的蒸馏水，混匀后离心，移去上层清液，收集下层沉淀，并将下层沉淀干燥恒重后，冷却，得到复合菌剂的基体；（4）将上述复合菌剂的基体添加发酵营养液进行发酵，发酵完成后，收集发酵物，将发酵物、混合微量元素添加剂、100目的蛭石混合均匀，静置，冷冻干燥，粉碎过筛，收集过筛颗粒，得水产养殖用复合微生物菌剂。

【技术特征摘要】
1.一种水产养殖用复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：（1）将混合菌粉加入初级培养液进行活化并混合培养，得混合菌液，再将混合菌液加入二级培养液中扩大培养至对数生长期，调节OD600值，得待干燥混合菌液；（2）将上述待干燥混合菌液放入离心机中离心，移去上清液，得到沉淀，将沉淀、水及冻干保护剂混合均匀，得菌悬液，将制得的菌悬液移入真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得干燥物；（3）将上述干燥物与干燥物质量4倍的蒸馏水，混匀后离心，移去上层清液，收集下层沉淀，并将下层沉淀干燥恒重后，冷却，得到复合菌剂的基体；（4）将上述复合菌剂的基体添加发酵营养液进行发酵，发酵完成后，收集发酵物，将发酵物、混合微量元素添加剂、100目的蛭石混合均匀，静置，冷冻干燥，粉碎过筛，收集过筛颗粒，得水产养殖用复合微生物菌剂。2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中混合菌粉中包括枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌，枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母及双歧杆菌的质量比为2：1：1，初级培养液配方按重量份数计，取牛肉膏1.2~2份、胰酪胨2.5~5份、马铃薯全粉8~10份、琼脂12~15份、葡萄糖1.5~2.5份、NaCl3~5份、KH2PO41.2~2.5份、吐温-800.6~1份、半胱胺酸0.2~0.8份、水1000份，pH值7.0±0.2，121℃灭菌30min，得初级培养液。3.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中扩大培养的条件：温度为30~35℃，培养时间18~24h；OD600的调节值为1.5，...

【专利技术属性】
技术研发人员：石磊，李璐，尹凯欣，
申请(专利权)人：石磊，
类型：发明
国别省市：江苏,32