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极耐热葡聚糖酶重组菌固相平板筛选方法技术

技术编号:1708505 阅读:452 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了极耐热葡聚糖酶重组菌固相平板筛选方法,依以下步骤进行:尼龙膜121℃灭菌15min;E.coli JM109BL21(DE3)pET-20b-Cel12B在5mL的LB液体培养基中培养6小时;4μl浓度5μg/mLIPTG涂在LB固体培养基上,37℃正放2-3小时;菌液涂LB固体平板上,37℃培养15小时;平板4℃放置1-2小时;尼龙膜置于平板上影印菌落;尼龙膜影响菌落面向上置于LB固体平板上,37℃倒置培养4-5小时;尼龙膜置于经细胞壁裂解液、细胞膜裂解液和平衡缓冲液浸泡上30min;尼龙膜菌落面向下铺于筛选平板上,70℃放置3小时;在揭去尼龙膜筛选平板上0.1%的刚果红显色15min,1mol/L NaCl脱色15min,挑取透明圈菌株。本发明专利技术方法简单,省时省事,筛选效率高,筛选效果好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物学、基因工程、生物技术等领域,具体涉及极 耐热葡聚糖酶重组菌固相平板筛选方法。
技术介绍
世界上每年生成1500-2000亿吨植物性有机物,其中约一半为 纤维素物质,如何将纤维素物质降解转化为糖、乙醇、甲烷等容易利 用的小分子有机物是当前国际上的重大课题之一。目前,对纤维素的 降解利用主要采用酸碱化处理等化学手段,以及汽爆及蒸气加热等物 理手段。生物法由于对设备要求低,分解后的产物易回收利用,对环 境污染较小等特点而备受重视。由于耐热细菌可生长于高温环境,培 养过程中不易受常温微生物的污染等优点,分离和筛选多功能的高效 纤维素产生菌就显得尤为重要,特别是它产生的纤维素酶具有较好的 热稳定性,提高反应温度可加快降解速度,因此耐热纤维素酶在高温 领域具有广泛的应用前景。高温酶的重要研究价值热稳定性酶在工业上已被广泛应用,它 与常温酶类相比有以下优点1、高温下的热稳定性,大多数酶在70 ll(TC温度范围内进行,这样可减少污染的危害。2、室温下较长的贮存期,尽可能长的存放期对商品酶制剂尤为重要,尤其是用于诊断试剂中的酶类对贮存期要求更高。3、较高的抗化学变性作用, 本文档来自技高网...

【技术保护点】
极耐热葡聚糖酶重组菌固相平板筛选方法,其特征在于筛选方法依以下步骤进行: (1)将直径9cm的尼龙膜夹在两层滤纸中间进行常规121℃灭菌,15min; (2)极耐热葡聚糖酶重组菌为E.coli JM109BL21(DE3)pET-20b-Cel12B,用接种环挑取一环重组菌在5mL的LB液体培养基中振摇培养6小时;其中,LB液体培养基配制:胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠10.0g,调节pH至7.2,用蒸馏水定容至1000ml,高压灭菌,冷却至55℃加入氨苄青霉素100mg;其中,LB液体培养基中氨苄青霉素终浓度为100μg/mL; (3)将4μl的浓度5μg/mL的IPTG均匀地涂在直...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:李相前
申请(专利权)人:淮阴工学院
类型:发明
国别省市:32[中国|江苏]

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