巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用制造技术

本发明专利技术公开一种巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用，属于植物保护领域。所述巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)YJB3具有溶磷、固氮、产嗜铁素等促进植物生长功能以及抑制植物病原菌的生防作用。利用植物内生菌YJB3菌液通过根际接种、喷雾或涂抹叶片处理或种子浸菌和浸根的方式，使内生菌定殖于植物体内或根际，提高所接种植物营养水平，提高抗病能力，增加植物生物量，促进植物生长。本发明专利技术操作简单、安全、经济，可降低农业生产中农药、化肥的使用量，减少农业面源污染，对改善农田土壤生态环境，提高农产品品质具有重要意义。

Application of Bacillus megigantobacilli YJB3 in promoting plant growth and Biocontrol

The invention discloses an application of Bacillus gigantobacilli YJB3 in promoting plant growth and biocontrol, and belongs to the field of plant protection. The Bacillus megaterium (Bacillus megaterium) YJB3 with soluble phosphorus, nitrogen fixation, siderophore producing and promoting plant growth and inhibit plant pathogen biocontrol effect. The use of endophytic bacteria YJB3 bacteria through root inoculation, spraying or painting leaves or seed treatment leaching bacteria and root soaking method, the endophyte colonization in plants or plant rhizosphere, improve the nutrition level of inoculation, improve disease resistance, increase plant biomass, promote the growth of plants. The invention has the advantages of simple operation, safety and economy, which can reduce the amount of pesticides and fertilizers used in agricultural production, reduce the pollution of agricultural non-point source, and improve the soil ecological environment and improve the quality of agricultural products.

【技术实现步骤摘要】
巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用
本专利技术属于植物保护领域，具体涉及一种巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用。
技术介绍
由于过分追求农业产量，农药、化肥和地膜等农业化学品滥用，土壤生态环境遭到严重破坏，土壤环境受有机污染物和重金属严重污染，土壤肥力严重下降，导致农产品质量下降。居民普遍感到现在的农产品品质下降，甚至由于农产品污染，严重损害人体健康。研究发现植物内生菌系统地分布于植物的各个器官、组织的细胞和细胞间隙。某些土壤微生物在植物根际或根表面定殖后可以进入植物根系内部，然后迁移至其他器官。内生菌在与宿主植物长期协同发展过程中，彼此形成了相互依存、相互作用的生态学关系。植物内生菌在改善植物生长条件、提高植物对不良环境条件的抵御能力、减少病虫害、提高植物产量等方面具有重要有益生物学作用。植物内生菌对宿主植物的促生作用可以分为直接促生作用和间接促生作用，内生菌可以通过分泌植物激素，溶解土壤中P、Fe等营养元素，固氮、拮抗植物病原菌以及缓解生物或非生物胁迫等方式促进宿主植物的生长发育，提高作物产量。研究表明沙雷氏菌属(Serratia)、肠杆菌属(Enterobacter)、不动杆菌属(Acinetobacter)、农杆菌属(Agrobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、草螺菌属(Herbaspirillum)、克雷白氏杆菌属(Klebsiella)等不同种属的植物内生菌具有促生作用。内生菌还可以与病原菌竞争营养和生态位，或者直接产生抗菌活性物质如丁二醇、脂肽、氢氰酸(HCN)、生物表面活性剂或挥发性有机化合物(VOC)等抑制植物病原微生物，如杨树内生菌BacilluspumilusJK-SX001产生甲苯可以防止杨树溃疡病。植物内生菌定殖于植物体内，可以改善植物营养水平，提高植物抵御病虫害，可以减少农药化肥的使用，改善生态环境，提高农产品品质，具有广阔的应用前景。
技术实现思路
为了克服现在农业生产中过分依赖农药和化肥来提高农业产量的缺点与不足，响应国家关于化肥、农药零增长的规定，本专利技术的目的在于提供一种巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用。所述的巨大芽孢杆菌YJB3具有溶磷、固氮、产嗜铁素等促进植物生长功能以及抑制植物病原菌的生防作用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：本专利技术提供一种巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用。所述的巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)YJB3的保藏信息：保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2017年06月28日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：M2017389。所述的促进植物生长在于溶解无机磷Ca3(PO4)2、AlPO4、FePO4的能力为6.16～40.78mg/L，溶解有机磷卵磷脂的能力为80.35～108.26mg/L。所述的促进植物生长在于固氮能力以固氮酶还原生产的乙烯量表示，所述的巨大芽孢杆菌(B.megaterium)YJB3固氮酶活性为105.56～135.89nmolC2H4/(h·mL)。所述的促进植物生长在于产嗜铁素的水平为69.72～96.86％。对于产嗜铁素作用可作为抑菌剂抑制植物病原菌；具体为，可与植物病原菌争夺铁元素发挥抑菌作用。所述的促进植物生长和生防在于巨大芽孢杆菌(B.megaterium)YJB3可以抑制植物病原菌丝核菌(Rhizoctoniasolani)、壳球孢属(Macrophominaphaseolina)和镰刀菌属(Fusariumoxysporum)。所述的巨大芽孢杆菌(B.megaterium)YJB3菌液制备方法为：取斜面保藏B.megateriumYJB3菌种转接于100mLLB液体培养基中，30℃，120rpm摇床培养7～9h后，3000r/min离心收集菌体，然后悬浮于PBS溶液中，稀释至浓度为106～109CFU/mL的菌悬液并补充0.5～1.5g/L的醋酸钠为起始碳源。将所述的巨大芽孢杆菌(B.megaterium)YJB3按照浓度为106～109CFU/mL接种量为1～10mL接种于植物根际或喷雾或涂抹叶片方法接种处理促进植物生长。所述的巨大芽孢杆菌(B.megaterium)YJB3的接种方法还可以为：取颗粒饱满的植物种子，首先用5％次氯酸钠浸种消毒15～20min，然后用无菌去离子水冲洗2～3次，浸入含有浓度为106～109CFU/mL的巨大芽孢杆菌YJB3菌悬液中30～180min。将植物幼苗根系浸入含有浓度为106～109CFU/mL的巨大芽孢杆菌YJB3菌悬液中30～90min。所述的植物可以为用于土壤污染植物修复的东南景天、苜蓿、黑麦草、龙葵等，或者水稻、玉米、菜心、番茄等作物。上述植物的种子均可从市场上购买得到。本专利技术相对于现有技术，具有如下的优点及效果：本专利技术提供一种植物内生菌BacillusmegateriumYJB3在促进植物生长和生防中的应用。利用植物内生菌B.megateriumYJB3菌液通过根际接种、喷雾或涂抹叶片处理或种子浸菌和浸根的方式，使内生菌定殖于植物体内或根际，提高所接种植物营养水平，提高抗病能力，增加植物生物量，促进植物生长。本专利技术操作简单、安全、经济，可降低农业生产中农药、化肥的使用量，减少农业面源污染，对改善农田土壤生态环境，提高农产品品质具有重要意义。附图说明图1是土培环境中巨大芽孢杆菌(B.megaterium)YJB3对DBP污染胁迫下菜心生物量的影响。图2是土培环境中巨大芽孢杆菌(B.megaterium)YJB3对无DBP污染胁迫下菜心生物量的影响。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。本专利技术所使用的LB培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl为10g，pH7.5，水1000mL；培养基使用前先在121℃下高温灭菌20min。PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。培养基使用前先在121℃下高温灭菌20min。磷酸缓冲液(PBS，g·L-1)：K2HPO4，1.44；KH2PO4，0.24；KCl，0.2；NaCl，8.0；pH7.2。实施例中所述的巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)YJB3的保藏信息：保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2017年06月28日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：M2017389。实施例1菌株B.megateriumYJB3溶磷能力定量测定方法参照Liuetal.(Liu,F.P.,Liu,H.Q.,Zhou,H.L.,etal.,2014.Isolationandcharacterizationofphosphate-solubilizingbacteriafrombetelnut(Arecacatechu)andtheireffectsonplantgrowthandphosphorusmobilizationintropicalsoils.Biol.Fertile.Soils50,927-937.)。盐酸钼酸铵溶液：称本文档来自技高网...

【技术保护点】
巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用，其特征在于：所述的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)YJB3，于2017年06月28日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2017389。

【技术特征摘要】
1.巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用，其特征在于：所述的巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)YJB3，于2017年06月28日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO：M2017389。2.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用，其特征在于：所述的促进植物生长在于溶解无机磷Ca3(PO4)2、AlPO4、FePO4的能力为6.16～40.78mg/L，溶解有机磷卵磷脂的能力为80.35～108.26mg/L。3.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用，其特征在于：所述的促进植物生长在于固氮能力以固氮酶还原生产的乙烯量表示，所述的巨大芽孢杆菌YJB3固氮酶活性为105.56～135.89nmolC2H4/(h·mL)。4.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用，其特征在于：所述的促进植物生长在于产嗜铁素的水平为69.72～96.86％。5.根据权利要求1所述的巨大芽孢杆菌YJB3在促进植物生长和生防中的应用，其特征在于：所述的促进植物生长和生防在于巨大芽孢杆菌YJB3抑制植物病原菌。6.根据权利要求5所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫测辉，冯乃宪，李彦文，喻娇，赵海明，蔡全英，李慧，左娜，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44