细胞趋化性检测装置制造方法及图纸

本发明专利技术的目的是提供一种细胞趋化性检测装置，该装置采用微量细胞，可更简单地控制细胞的注入和细胞位置的调整，且能确保防止设定于孔内特定位置的细胞或注入后的样本试料发生意外移动，两个孔经对细胞通过有阻力的流路互相连通，每个孔配有用于细胞或样本试料注入的开口部分，其特征在于，（１）：配有使液体移动的手段和在液体注入或吸出后使该移动停止的手段；和（２）：配有闭塞细胞注入端或样本试料注入端任何一方或双方开口部分的手段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及细胞趋化性检测装置。更详细地说，是指能用微量的细胞检测细胞趋化性的装置，该细胞趋化性检测装置具有下述构造，能在微小的孔(well)内容易地调节细胞位置设定，且能稳定地保持趋化因子等样本试料在流路中形成的浓度梯度。
技术介绍
用微量的细胞能检测细胞趋化性的装置，分别在一个孔内装入细胞悬浊液，在另一个孔内装入样本试料，开通孔间设定的流路，检测细胞是否向装有样本试料的孔移动的细胞趋化性检测装置，本专利技术人等针对此装置提出了后面的几项提案。用于检测细胞趋化性的装置应该既能在1个细胞水平实现观察甚至检测，又能对10个乃至100个左右的细胞进行测定，且具有在容易地检测少量细胞的同时，可定量分析研究细胞反应的优点。可是，在通过流路相互连通的各孔上设有细胞注入口和样本试料注入口的结构中，因借助流路使孔相互形成连通管，所以特别容易引起流路内液体移动。即，向孔内注入细胞等试料时，容易产生注入导致的升压的影响，因此容易引起细胞或样本试料的意外移动。而且注入后无法完全维持孔的水平时或由于振动等造成液面轻微变动时，也会增加流路中的液体流动，容易引起细胞或样本试料的移动。细胞或样本试料的意外移动是使判断样本试料是否是趋化性因子变得混乱的原因。所以，为了正确检测出细胞感受到样本试料的扩散浓度梯度而向装有样本试料的孔移动，需要严格防止包括流路在内的孔内液体的意外移动。而且为了更正确地把握细胞的趋化性，优选孔内细胞开始时相对于流路保持同一状态，即，排成一列。本专利技术人等首先，在用微量移液器等向配有注入或吸出细胞或趋化因子等试料的管的孔中注入或吸出试料时，为了缓和孔内压力的急剧变化，防止孔内试料的意外移动，提出了配备和用于试料注入或吸出的管有连通关系的管的方案(特开2002-159287号)。这是采用通过连通管使试料注入或吸出时的压力分散的结构。而且，本专利技术人等提出了微量试料处理装置，在多个孔通过对流体有阻力性的部分相互连通，并且各个孔配有用于注入、吸出试料的管以及根据需要用于缓和注入、吸出时压力变化的管的结构，在上述等多个管的上部共有可装液体的空间。例如细胞趋化性检测装置(WO02/46356)。通过采用在各个孔配有的总管的上部共有可装液体的空间的结构，可防止试料注入时或之后的液体移动。而且，该装置可移动注入的细胞在孔内位置，还可以使细胞排列到流路一端的初始线上，为此配备了精密地控制孔内液体注入、排出的手段。可是，为了使注入孔内的细胞排列到流路一端的初始线上，需要移动孔内的液体。为此，需要精细的控制，此外，为防止之后的在流路中的液体移动，有必要再次将液体返回到管的顶部的空间中等，复杂而精密地控制操作。除了本专利技术人等的上述提案外，已知还有用流路连接收纳细胞或样本的孔，根据需要，相应的配有使孔上配有的细胞或样本的注入口闭塞的手段的细胞趋化性检测装置(USP5744366)。可是，因为该装置不能调节孔内细胞的位置，所以不能调节初始时细胞的条件。本专利技术进一步改良相应装置，目的在于提供一种用微量细胞，可以更正确检测其趋化性的构造，即，目的在于提供一种细胞趋化性检测装置，其特征是可容易地注入细胞或样本，更简单地进行注入后细胞位置调整的控制，且由于能切实防止设置在孔内特定位置的细胞或注入的样本试料的意外移动，稳定地维持试验样本由于扩散形成的浓度梯度，而且更便于自动化地操作、控制。相关文献1.特开2002-1592872.WO 02/463563.USP5744366
技术实现思路
本专利技术是下述细胞趋化性检测装置。(1)在两个孔用流路相互连通，各孔分别设有注入细胞或样本试料的开口部分的构造中，配有为调节孔内浮游细胞位置而使液体移动的手段以及在液体注入或吸出后停止该移动的手段，并且，配有使细胞注入端和样本试料注入端任何一方或双方的开口部闭塞的手段。此处，(2)作为同时配有使液体移动的手段和在液体注入或吸出后停止该移动的手段的装置的优选例，可以举出例如脉冲式泵或注射器。另外，(3)作为使该开口部闭塞的手段的优选例，可以举出例如柔软的密闭栓、滑动式开关部件(slide-type switching member)、螺塞、阀等任何一种或它们等的组合。作为本专利技术的一种实施方案可以举出下述细胞趋化性检测装置，该装置由基板和与之密合的玻璃基板组成，在基板上设有堤(bank)和孔，两个孔在堤的两端，在堤和玻璃基板之间形成对浮游细胞通过有阻力的流路。这里，在该基板或该基板和玻璃基板之间设置用于使液体移动的开口部，在该开口部，设置通过注入或吸出使液体移动、然后使液体停止移动的手段/装置，且在基板上设置的任何一个孔上设置细胞注入口，在另外一个孔上设置样本试料注入口，并设置使上述注入口中的任何一方或双方闭塞的的手段/装置。这里，在基板上设置的堤和玻璃基板之间形成对浮游细胞通过有阻力的流路，可以在堤的上部设置阶梯(terrace)，该阶梯和玻璃基板之间可以形成和细胞的直径或其变形能力相吻合的缝隙。或在流路上，在堤上部的阶梯上，设置和细胞的直径或其变形能力相吻合宽度的1个到多个沟组成的屏障，根据需要，该屏障和玻璃基板之间也可以形成和细胞的直径或其变形能力相吻合的缝隙。而且在流路上，也可以在阶梯上的2个位置形成构成沟的屏障列。此外，还可以在设置在流路上的堤上，可形成和玻璃基板间不同深度的缝隙，也可形成多段的梯。作为本专利技术的其它实施方案，可以举出基板和玻璃基板一体化的结构，或至少一方的一面是透明的结构。本专利技术包括以上述细胞趋化性检测装置为单位元件，使多个相同或不同元件集成，由集成元件组成的集成型细胞趋化性检测装置，此外还包括以该集成元件为单位元件，使多个同种或不同种元件集成得到的集成型细胞趋化性检测装置。附图说明图1表示通过从细胞注入口侧的液体的输送，将细胞聚集在堤端类型的细胞趋化性检测装置的一个例子的模式图。箭头表示充满装置的液体的移动方向。图2是用注射器代替图1的脉冲泵时的模式图。图3表示采用阀作为闭塞手段的示例的模式图。箭头表示充满装置的液体的流动方向。图4表示采用滑动式开关部件作为闭塞手段时的模式图。图5是补充图4的结构，样本试料注入口也进行开关的结构的模式图。图6是采用柔软的密闭栓作为闭塞手段时的模式图。图7是表示通过从检测样品注入口端的液体的吸出将细胞收集到堤端类型的细胞趋化性检测装置的一个示例的模式图。箭头表示充满装置的液体移动的方向。图8表示在图7类型中，使液体循环的结构模式图。箭头表示充满装置液体的移动方向。图9表示在图8类型中闭塞细胞注入口的结构模式图。(1)和(3)分别是截面图，(2)和(4)分别是俯视图。箭头表示充满装置液体的移动方向。图10是闭塞细胞注入口和样本试料注入口双方的结构模式图。图11是集成多个图6类型的单位元件时的模式图。图12是集成多个图10类型的单位元件时的模式图。图13表示堤和流路结构的一个示例的截面图。图14表示在流路上设置屏障和沟时的一个例子。图15表示在堤上设置的阶梯的两侧，在两个位置形成屏障阵列的例子。(1)是俯视图，(2)是截面图。符号的说明1基板2堤3装细胞的孔4装样本试料的孔5细胞注入口6样本试料注入口7脉冲泵8注入管9对细胞通过有阻力的流路10玻璃基板11检测器12细胞13注射器14液体注入手段15本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞趋化性检测装置，具有两个孔通过对细胞通过有阻力的流路相互连通，各个孔设有用于注入细胞或检验试料的开口的结构，其特征在于（１）：配有使液体移动的手段和在液体注入或吸出后停止该移动的手段；（２）：配有闭塞细胞注入端和样本试料注入端任何一方或双方的开口部的手段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：金崎士朗，
申请(专利权)人：艾菲克特细胞研究所股份有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]