The present invention provides a method for waterfowl multiple yolk antibody preparation method, the technical scheme for common diseases in waterfowl and several days old small screening of six kinds of viral antigen, covering avian reovirus, parvovirus, gosling plague virus, duck hepatitis virus and other pathogens. On this basis, targeted design was made from the perspective of vaccine preparation and immunization methods, which effectively ensured the titer of antibodies in high egg and laid the foundation for the clinical protective effect of yolk antibody. At the same time, the invention improves the subsequent purification process, and filters and concentrates by using a hollow fiber column with a specific molecular weight. It can eliminate most of the macromolecular impurities on the basis of enhancing the purity of the antibody, and reduces the incidence of adverse reactions.
【技术实现步骤摘要】
一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法
本专利技术涉及禽用生物制品
,进一步涉及卵黄抗体制备技术,具体涉及一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法。
技术介绍
由于人类餐饮业的快速发展,并且人们消费水平的不断提升,水禽养殖量在逐日扩大,但是水禽养殖方式相对分散,养殖模式比较开放,导致许多禽类疾病在水禽上发生几率越来越大。呼肠孤病毒是鸡病毒性关节炎和腱鞘炎的主要病原之一,属于呼肠孤病毒科,呼肠孤病毒属的一种。该毒株自1954年首次从患慢性呼吸道病的鸡呼吸道分离得到以来,多种禽呼肠孤病毒分离株相继被报道。呼肠孤病毒感染的宿主范围逐渐扩大,现在已成为危害养鸭业的重要传染病之一。随着宿主范围的不断扩大,发病日龄越来越小,7日龄内的樱桃谷肉鸭、番鸭、麻鸭等各品种鸭的发病几率越来越大。发病日龄的降低导致该疾病的预防面临重大挑战。2015年以来,福建、山东、安徽、江苏等地半番鸭、樱桃谷鸭流行一种以短嘴、软脚、易骨折、生长障碍为临床特征的新疫病,给养鸭业带来很大的经济损失,该病主要病原是新型鹅细小病毒或番鸭细小病毒,该疾病主要侵害3周内的番鸭、半番鸭、肉鸭等各品种的鸭,发病日龄小、病理损伤大、发病范围广是其主要特点,这就要求养殖户找到适宜的防御办法,提前做好预防,降低疾病的发生。鸭肝炎病毒是养鸭业长期存在的疾病,是雏鸭易感的一种急性接触性传染病,以3周龄以内的雏鸭急性发病、肝脏病变和高死亡率为主要特征。并且目前疾病类型发生了新的变化,由原来Ⅰ型鸭肝炎转变为新型的Ⅲ型鸭肝炎病毒,导致传统的Ⅰ型鸭肝炎抗体或是疫苗不能起到很好的保护作用。卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取的针对特定抗原的 ...
【技术保护点】
一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法,其特征在于包括以下步骤:1)分别制备灭活的新型番鸭源鸭呼肠孤病毒、新型肉鸭源鸭呼肠孤病毒、番鸭源细小病毒、小鹅瘟病毒、Ⅰ型鸭肝炎病毒病、Ⅲ型鸭肝炎病毒毒液,六者等体积混合,得到混合抗原溶液;2)取由美国埃索公司出品的、型号为MARCOL52的白油,熬制,在熬制的过程中向其中加入所述白油质量4份的司班和所述白油质量2份的硬脂酸铝,得到疫苗佐剂;3)将步骤1)所得的混合抗原溶液与步骤2)所得的疫苗佐剂以(1~1.5):(1~2)(v/v)的比例混合均匀,即得到多联疫苗;4)利用步骤3)所得的多联疫苗免疫蛋鸡,产蛋前1个月免疫1次,两周后二免,二免两周后三免疫,收集三免后蛋鸡的鸡蛋,即为高免蛋;5)取步骤4)所得高免蛋,分离得到卵黄,搅拌得到卵黄匀浆;6)向步骤5)所得卵黄匀浆中加入其2倍体积的醋酸缓冲液,调pH至4.6~4.8;在15~20℃、搅拌条件下逐滴加入辛酸,至其中正辛酸终浓度为1%(v/v),4~8℃条件下静置6~8h,然后以4000~6000r/min的转速离心30min,弃沉淀;上清液经中空纤维柱过滤浓缩后,加入浓缩产物1/10体积的、浓度 ...
【技术特征摘要】
1.一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法,其特征在于包括以下步骤:1)分别制备灭活的新型番鸭源鸭呼肠孤病毒、新型肉鸭源鸭呼肠孤病毒、番鸭源细小病毒、小鹅瘟病毒、Ⅰ型鸭肝炎病毒病、Ⅲ型鸭肝炎病毒毒液,六者等体积混合,得到混合抗原溶液;2)取由美国埃索公司出品的、型号为MARCOL52的白油,熬制,在熬制的过程中向其中加入所述白油质量4份的司班和所述白油质量2份的硬脂酸铝,得到疫苗佐剂;3)将步骤1)所得的混合抗原溶液与步骤2)所得的疫苗佐剂以(1~1.5):(1~2)(v/v)的比例混合均匀,即得到多联疫苗;4)利用步骤3)所得的多联疫苗免疫蛋鸡,产蛋前1个月免疫1次,两周后二免,二免两周后三免疫,收集三免后蛋鸡的鸡蛋,即为高免蛋;5)取步骤4)所得高免蛋,分离得到卵黄,搅拌得到卵黄匀浆;6)向步骤5)所得卵黄匀浆中加入其2倍体积的醋酸缓冲液,调pH至4.6~4.8;在15~20℃、搅拌条件下逐滴加入辛酸,至其中正辛酸终浓度为1%(v/v),4~8℃条件下静置6~8h,然后以4000~6000r/min的转速离心30min,弃沉淀;上清液经中空纤维柱过滤浓缩后,加入浓缩产物1/10体积的、浓度为0.01mol/l无菌PBS缓冲液,调pH至7.2;向其中加入浓度为1%(v/v)的柳硫汞溶液,至其中柳硫汞终浓度为0.01%(v/v),搅拌均匀;7)以30mg/mL的用量向步骤6)所得产物中加入β-葡聚糖干粉,加入冻干保护剂,分装冻干,即得到所述用于水禽的多联卵黄抗体。2.根据权利要求1所述的一种用于水禽的多联卵黄抗体制备方法,其特征在于步骤1)中灭活的新型番鸭源鸭呼肠孤病毒毒液、灭活的新型肉鸭源鸭呼肠孤病毒毒液是通过以下方法制备的:用冷冻保存的新型番鸭源鸭呼肠孤病毒和新型肉鸭...
【专利技术属性】
技术研发人员:康亚男,陈冰,唐荣宏,张立霞,付旭彬,郁宏伟,梁武,李守军,
申请(专利权)人:天津瑞普生物技术股份有限公司,
类型:发明
国别省市:天津,12
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