一种茶叶中外源掺杂蔗糖的抗干扰快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种茶叶中外源掺杂蔗糖的抗干扰快速检测方法，利用交联聚乙烯吡咯烷酮‑活性炭组合吸附剂，去除茶样提取液中基质成分对间苯二酚显色反应和检测的干扰。具体方法包括样品提取、使用吸附剂对样品中的干扰基质进行选择性吸附去除、显色反应、颜色分辨用于定性判定或吸光度测量用于定量检测四个步骤。其中对基质的选择性吸附是实现检测的抗干扰性能的关键步骤。本发明专利技术实现了对茶叶加工过程外加蔗糖的定性及定量快速测定，具有抗干扰能力强、适用范围广、操作简单、结果可靠等特点，特别适用于茶叶中掺杂蔗糖的快速定性筛查和定量检测。

An anti-interference rapid detection method for the exogenous sucrose in tea

The present invention discloses anti interference method for rapid detection of exogenous sucrose doped in tea, adsorbent by using cross-linked polyvinylpyrrolidone activated carbon, the removal of tea samples extracted from the interference matrix components in liquid color reaction and detection of resorcinol. Specific methods include sample extraction, sorbent adsorption, removal, color reaction, color discrimination, qualitative determination or absorbance measurement for four steps in quantitative detection. The selective adsorption of the matrix is the key step to achieve the anti-interference performance of the detection. The invention realizes the qualitative and quantitative rapid determination of sucrose in tea processing, and has the characteristics of strong anti-interference ability, wide application range, simple operation and reliable results. It is especially suitable for fast qualitative screening and quantitative detection of sucrose in tea.

【技术实现步骤摘要】
一种茶叶中外源掺杂蔗糖的抗干扰快速检测方法
本专利技术属于食品检测领域，具体涉及一种茶叶中外源添加蔗糖的抗干扰快速检测方法。
技术介绍
近年来，为追求茶叶更好的表观品质，个别生产者在茶叶中添加蔗糖的现象时有发生。茶叶加工过程中所添加的蔗糖一方面可在香气、色泽等方面影响对成茶的感官品质评判；同时，由于蔗糖易吸潮、易变质和易滋生细菌等特点，对茶叶质量安全有较大的影响。因而，关于蔗糖添加在茶叶质量监管体系及消费者中引起越来越广泛的关注，相应的快速检测方法成为市场需要。为适应这一现状，我们前期开发了一种基于蔗糖水解和间苯二酚显色反应的针对茶叶中添加蔗糖快速筛查、检测的方法，以便于茶叶生产和流通过程中的实时监测。但在实际应用中我们发现，该方法对发酵程度较高的红茶等茶类样品中的蔗糖成分检测灵敏可靠，而对绿茶(特别是夏秋绿茶)的显色及检测过程中，存在较严重的干扰现象：一方面，在所采用的强酸性的反应溶液条件下(1：1盐酸溶液)，果糖(蔗糖水解产生)在单纯的盐酸溶液中(不含间苯二酚显色试剂时)与样品基质本身会自发地发生微弱的显色反应，自身呈现一定的浅红色，且易形成絮状浑浊，干扰颜色判断和吸光度测定；而与此现象相反的是，在含有显色试剂的检测试管中，样品基质中的某些成分干扰间苯二酚与果糖的反应，反而使得蔗糖成分无法正常显色，造成假阴性检测结果。因而，开发一种更加普适的、能够抵抗茶叶样品本身基质干扰的茶叶中所添加蔗糖的快速检测方法，具有明显的应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种茶叶中掺杂蔗糖的抗干扰快速检测方法，以适应于不同茶类样品的检测需求。该方法具有抗干扰能力强、适用范围广、操作方便、检测迅速、结果可靠等特点。为实现上述目标，本专利技术采用如下技术方案：一种茶叶中外源掺杂蔗糖的抗干扰快速检测方法，所述方法为：(1)待测茶叶样品用水提取或冲泡，除去茶叶渣得到待测茶汤样品；(2)抗干扰处理：将待测茶汤样品中加入吸附剂，混匀后常温下反应或水浴加热3～30min，离心，取上清液作为待测样品溶液；(3)待测样品溶液利用间苯二酚显色试剂进行定性判定和定量检测；所述吸附剂为交联聚乙烯吡咯烷酮与活性炭质量比1:0～1的混合，其中的0代表可以为0，即不加活性炭，但优选吸附剂为交联聚乙烯吡咯烷酮与活性炭质量比1:0.1～0.5的混合，更优选1:0.2的混合；吸附剂的加入量是以待测茶汤样品的体积计为5～100mg/mL，优选10～50mg/mL，更优选30mg/mL；进一步，所述步骤(1)中，待测茶汤样品按以下三种方案之一制备：(1-A)对于单纯定性判定，将待测茶叶样品，按照茶、水的质量比为1：20～100(优选1:50)加入沸水冲泡2～10min，沥出茶汤作为待测茶汤样品，然后进行步骤(2)的抗干扰处理和步骤(3)的定性判定(1-B)对于定量检测，准确称取待测茶叶样品，按照茶、水的质量比为1:10～50(优选1:40)，加入煮沸的去离子水，超声提取2次，每次超声提取5～10min，合并滤液，定容后得到待测样品溶液，然后进行步骤(2)的抗干扰处理和步骤(3)的定量检测；滤液定容的体积以茶叶的质量计为50～200mL/g(优选100mL/g)。进一步，超声提取茶叶样品后，可用水清洗茶叶渣，清洗液并入滤液，然后定容得到待测样品溶液。(1-C)对于既要定性判定又需进一步定量检测的样品，或需先行定性判定而根据定性判定结果决定是否需定量检测的样品，优先选用(1-B)方法制备待测茶汤样品。所述步骤(2)中，待测茶汤样品中加入吸附剂后，优选50℃水浴，加热10min，然后离心、取上清液作为待测样品溶液。所述步骤(3)中，定性判定的步骤优选为：(3-A1)配制显色试剂：将间苯二酚溶于质量分数7～25％的盐酸(优选18～20％盐酸)，配成间苯二酚浓度0.1～2.0g/L的溶液；其中间苯二酚的浓度优选为0.5g/L；(3-A2)定性判定：取两只试管，分别为试管a、b，分别加入等体积的显色试剂，然后取相同体积的去离子水和待测样品溶液分别加入试管a、b，去离子水或待测样品溶液与显色试剂的体积比为1：5～50，(优选1：10)。然后将两试管同时浸入开水浴中，反应2～10min后取出试管，用水冲洗冷却后对比两试管内液体颜色，以试管a颜色为参照，若试管b内出现明显红色，则判定为阳性，即所测茶叶中掺杂了蔗糖；若试管b内未出现明显红色，则判定为阴性，茶叶中未添加蔗糖。所述步骤(3)中，定量检测的步骤优选为：(3-B1)配制显色试剂：间苯二酚溶于质量分数7～25％的盐酸(优选18～20％盐酸)，配成间苯二酚浓度0.1～2.0g/L的溶液，所述间苯二酚的浓度优选为0.5g/L；(3-B2)配制蔗糖标准溶液：以去离子水溶解分析纯蔗糖样品，分别配制3种以上不同浓度的蔗糖水溶液作为标准溶液，蔗糖标准溶液的浓度范围0.01～5g/L；(3-B3)绘制工作曲线：根据前述所配制蔗糖标准溶液个数取相应数量的试管，编号记录；分别将去离子水以及蔗糖标准溶液与显色试剂按照体积比1：10～100(优选1：30)加入对应编号的试管，并分别混合摇匀，80～100℃水浴加热1～10min后取出，立即用水冲洗冷却至室温，在400～500nm波长条件下，以前述去离子水所在试管溶液为参比溶液，使用分光光度计测定各试管中蔗糖溶液的吸光度；然后以蔗糖标准溶液的浓度为横坐标、相应的吸光度数值为纵坐标，绘制工作曲线并拟和得到标准曲线方程；(3-B4)实际样品测定：按照待测样品数量，取相应数量的试管并编号记录，试管中分别加入相应样品编号的、与步骤(3-B3)中试管中去离子水或蔗糖标准溶液相同体积的待测样品溶液，并加入与步骤(3-B3)中各试管中相同体积的显色试剂，混匀后按照步骤(3-B3)相同的方法水浴加热、分光光度计检测，仍以步骤(3-B3)所用参比溶液作为此次检测的参比溶液，使用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度，然后根据步骤(3-B3)的标准曲线方程，换算得到相应待测样品溶液中的蔗糖浓度，并结合前述前处理步骤中的样品质量和定容后的提取液体积关系，计算得到相应待测茶叶中掺杂蔗糖的含量。所述定量检测步骤(3-B3)中，蔗糖标准溶液与显色试剂的体积比优选为1:30；步骤(3-B3)中，水浴温度优选为100℃，水浴加热时间优选为4min，分光光度计的检测波长优选为485nm。本专利技术的抗干扰检测原理是：根据本实验研究，当茶叶样品提取液中存在较高浓度的儿茶素类组分时，会对间苯二酚显色反应本身造成严重的干扰；除此之外，提取液中的其他有色成分对显色后的检测过程——特别是用肉眼进行定性判定的过程存在较大的干扰，影响了直接判定结果的可靠性。交联聚乙烯吡咯烷酮和活性炭分别对上述两种干扰有一定的去除效果，因此本方法中，采用交联聚乙烯吡咯烷酮-活性炭组合吸附剂，有效消除了茶叶提取液中的前述两类干扰基质。经过抗干扰处理以后，茶叶提取液中的蔗糖在盐酸条件下发生水解反应，生成一分子的葡萄糖和一分子的果糖；果糖在盐酸条件下与显色试剂中的间苯二酚发生高选择性的显色反应，生成鲜红色的产物，产物在485nm附近有最大吸收，因而可根据反应后的溶液颜色识别和吸光度数值分别进行茶叶中掺杂蔗糖的定性判别和定量检测，从而解决了绿茶中掺杂蔗糖快速检测方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茶叶中外源掺杂蔗糖的抗干扰快速检测方法，其特征在于所述方法为：(1)待测茶叶样品用水提取或冲泡，除去茶叶渣得到待测茶汤样品；(2)抗干扰处理：将待测茶汤样品中加入吸附剂，混匀后常温下反应或水浴加热3～30min，离心，取上清液作为待测样品溶液；(3)待测样品溶液利用间苯二酚显色试剂进行定性判定和定量检测；所述吸附剂为交联聚乙烯吡咯烷酮与活性炭质量比1:0～1的混合，其中的0代表可以为0，即不加活性炭；吸附剂的加入量是以待测茶汤样品的体积计为5～100mg/mL。

【技术特征摘要】
1.一种茶叶中外源掺杂蔗糖的抗干扰快速检测方法，其特征在于所述方法为：(1)待测茶叶样品用水提取或冲泡，除去茶叶渣得到待测茶汤样品；(2)抗干扰处理：将待测茶汤样品中加入吸附剂，混匀后常温下反应或水浴加热3～30min，离心，取上清液作为待测样品溶液；(3)待测样品溶液利用间苯二酚显色试剂进行定性判定和定量检测；所述吸附剂为交联聚乙烯吡咯烷酮与活性炭质量比1:0～1的混合，其中的0代表可以为0，即不加活性炭；吸附剂的加入量是以待测茶汤样品的体积计为5～100mg/mL。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述吸附剂为交联聚乙烯吡咯烷酮与活性炭质量比1:0.1～0.5的混合。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述吸附剂为交联聚乙烯吡咯烷酮与活性炭质量比1:0.2的混合。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述吸附剂的加入量是以待测茶汤样品的体积计为10～50mg/mL。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，待测茶汤样品按以下三种方案之一制备：(1-A)对于单纯定性判定，将待测茶叶样品，按照茶、水的质量比为1：20～100加入沸水冲泡2～10min，沥出茶汤作为待测茶汤样品，然后进行步骤(2)的抗干扰处理和步骤(3)的定性判定；(1-B)对于定量检测，准确称取待测茶叶样品，按照茶、水的质量比为1:10～50，加入煮沸的去离子水，超声提取2次，每次超声提取5～10min，合并滤液，定容后得到待测样品溶液，然后进行步骤(2)的抗干扰处理和步骤(3)的定量检测；(1-C)对于既要定性判定又需进一步定量检测的样品，或需先行定性判定根据定性判定结果决定是否需定量检测的样品，优先选用(1-B)方法制备待测茶汤样品。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，待测茶汤样品中加入吸附剂后，50℃水浴，加热10min，然后离心、取上清液作为待测样品溶液。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，定性判定的步骤为：(3-A1)配制显色试剂：将间苯二酚溶于质量分数7～25％的盐酸，配成间苯二酚浓度0.1～2.0g/L的溶液；(3-A2)定性判定：取两只试管，分别为试管a、b，分别加入等体积的显色试剂，然后取相同体积的去离子水和待测样品溶液分别加入试管...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝振霞，金莉莉，刘新，鲁成银，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：浙江,33