竹叶花椒中期染色体的荧光原位杂交方法技术

本发明专利技术提供了竹叶花椒中期染色体的荧光原位杂交方法。包括竹叶花椒中期染色体载玻片标本的制备、荧光原位杂交、信号检测及载玻片回收步骤。本发明专利技术有助于建立稳定便捷的中期染色体荧光原位杂交反应体系，大大提高了竹叶花椒中期染色体的检出效率，为竹叶花椒染色体乃至花椒属物种染色体的检测提供新方法。

Fluorescence in situ hybridization of metaphase chromosomes of Zanthoxylum Zanthoxylum

The present invention provides a fluorescence in situ hybridization method for the metaphase chromosomes of Zanthoxylum Zanthoxylum. It includes the preparation, fluorescence in situ hybridization, signal detection and the recovery steps of slide on the metaphase chromosome carrying slide specimen of Zanthoxylum Zanthoxylum. The invention is helpful for establishing stable and convenient metaphase chromosome fluorescence in situ hybridization reaction system, greatly improving the detection efficiency of metaphase chromosome of Zanthoxylum bungeanum, and providing a new method for chromosome detection of chromosome of Zanthoxylum bungeanum and Zanthoxylum.

【技术实现步骤摘要】
竹叶花椒中期染色体的荧光原位杂交方法
本专利技术属于细胞遗传学和分子生物学领域，具体涉及竹叶花椒中期染色体的荧光原位杂交方法。
技术介绍
现有检测植物染色体的方法普遍采用植物染色体分带，分为两大类，即荧光分带和Giemsa分带。但两种方法均没有在花椒属植物中使用过。主要原因是：第一，花椒属植物种子发芽不易，时间长，种子外壳较硬，不易吸水膨胀，利用种子发芽剪取根尖难。第二，根尖组织富含油脂，严重影响显微镜下染色体观察，不利于找到染色体。第三，花椒属植物染色体多、小，不易分散，不利于找到一个细胞中期染色体数目完整的分裂相。虽然花椒属两百多个物种，但目前已明确染色体数目的物种仅有9个物种：异叶花椒2n＝36，68，刺花椒2n＝64，竹叶花椒2n＝66，两面针2n＝68，花椒勒2n＝68，毡毛花椒2n＝72，尖叶花椒2n＝72，野花椒2n＝ca.132，花椒2n＝136。这些物种的染色体数目，有些略微相同，有些接近呈2倍和4倍的关系。花椒属物种目前还处于确定染色体数目的阶段。花椒属植物倍性也没有明确。根据已报到的花椒属物种染色体数目有些接近2倍和4倍关系，似乎花椒属物种又存在多倍体，例如，染本文档来自技高网...

【技术保护点】
竹叶花椒中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：1)竹叶花椒中期染色体载玻片标本的制备：将竹叶花椒幼苗采用营养土培养，待根尖长至1.5～2.0cm时，剪取1～1.5cm根尖组织，依次用N2O处理3h、冰醋酸处理5min，然后置于75％酒精中于‑20℃保存；将低温保存的根尖组织以双蒸水清洗后切取根尖分生组织1～2mm，置于酶解液中于37℃酶解55min，去除酶解液，依次用双蒸水、75％酒精、95％酒精、100％酒精清洗根尖分生组织后室温晾干；在根尖组织中加入冰醋酸制成悬浮液；将悬浮液滴于载玻片上室温晾干后镜检，镜检良好的玻片于‑20℃保存；2)荧光原位杂交：将载玻片置于4％多聚甲...

【技术特征摘要】
1.竹叶花椒中期染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：1)竹叶花椒中期染色体载玻片标本的制备：将竹叶花椒幼苗采用营养土培养，待根尖长至1.5～2.0cm时，剪取1～1.5cm根尖组织，依次用N2O处理3h、冰醋酸处理5min，然后置于75％酒精中于-20℃保存；将低温保存的根尖组织以双蒸水清洗后切取根尖分生组织1～2mm，置于酶解液中于37℃酶解55min，去除酶解液，依次用双蒸水、75％酒精、95％酒精、100％酒精清洗根尖分生组织后室温晾干；在根尖组织中加入冰醋酸制成悬浮液；将悬浮液滴于载玻片上室温晾干后镜检，镜检良好的玻片于-20℃保存；2)荧光原位杂交：将载玻片置于4％多聚甲醛中处理10min，然后用2×SSC缓冲液处理两次，每次5min，再用双蒸水处理两次，每次5min，再依次用75％酒精、95％酒精、100％酒精梯度处理，每次5min，室温晾干后滴加70％FA液，盖上盖玻片，于80℃变性2min；载玻片变性完成后于5s内依次放入-20℃的75％酒精、95％酒精、100％酒精梯度处理，每次5min，室温晾干；在晾干的载玻片上滴加放有探针的杂交液，盖上盖玻片，于黑暗条件下在杂交盒中于37℃恒温孵化1.5～2h；所述探针采用5SrDNA和(GAA)6，其中5SrDNA探针的碱基序列为：5′-TCAGAACTCCGAAGTTAAGCGTGCTTGGGCGAGAGTAGTAC-3′，采用FAM标记其序列的5’端；(GAA)6探针的碱基序列为：5′-GAAGAAGAAGAAGAAGAA-3’，采用TAMRM标记其序列的5’端；将孵化完成的载玻片在避光条件下依次用2×SSC缓冲液清洗3min、双蒸水处理两次，每次5min，室温晾干；3)信号检测：晾干后的载玻片上...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗小梅，陈亮，万文林，龚伟，王景燕，刘俊成，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51