一种与原发性肺癌辅助诊断相关的癌‑睾丸基因遗传标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程及肿瘤医学领域，公开了一种与原发性肺癌辅助诊断相关的癌‑睾丸基因SNP标志物及其应用。该标志物为rs12166583、rs12477419、rs75764106、rs74640907、rs74377505、rs1007089、rs1433646、rs6001675、rs11125117、rs3747093和rs793598的组合。该标志物可用于制备原发性肺癌辅助诊断试剂盒，具有较好的临床应用前景。

With a primary diagnosis of lung cancer genetic cancer testis associated gene marker assisted and its application

The invention belongs to the field of gene engineering and medical oncology, and discloses a primary lung cancer diagnosis testis associated gene SNP markers and its application in auxiliary. The markers are combinations of rs12166583, rs12477419, rs75764106, rs74640907, rs74377505, rs1007089, rs1433646, rs6001675, rs11125117, rs3747093 and rs793598. This marker can be used for the preparation of the auxiliary diagnostic kit for primary lung cancer. It has a good prospect in clinical application.

【技术实现步骤摘要】
一种与原发性肺癌辅助诊断相关的癌-睾丸基因遗传标志物及其应用专利
本专利技术属于基因工程及肿瘤医学领域，涉及原发性肺癌辅助诊断相关的癌-睾丸基因SNP标志物及其应用。
技术介绍
恶性肿瘤是危害人类健康的重大疾病之一。自2010年以来，恶性肿瘤已经超过心脑血管疾病成为中国第一大死因，也成为我国最主要的公共卫生问题。肺癌是全球受累人数最多的恶性肿瘤之一。据国际癌症研究署(IARC)估计，2012年肺癌新发病例182.5万人，死亡159.0万人，分别占全部癌症新发病例及死亡人数的13.0％和19.4％。由于持续増长的烟草消费、环境污染化及生活方式的改变，我国肺癌的发病形势亦日趋严峻，发病率和死亡率呈显著上升趋势。据中国肿瘤登记中心最新数据(2009-2011年)估计，2015年我国男性和女性的肺癌发病人数分别为50.9万和22.4万，肺癌死亡人数分别为43.2万和17.8万，均高于世界平均水平。由此可见，肺癌已成为一个亟待解决的重大公共卫生问题，严整威胁全世界及我国人民的生命和健康。肺癌家庭聚集性研究显示，遗传因素在肺癌的发生中同样扮演重要角色。尽管80％以上的肺癌可以归咎为烟草暴露，但仅有不到20％的吸烟者发生肺癌，说明在同等环境暴露下，具有不同遗传背景的个体对肺癌的易感性不同。单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)是指人群中出现频率大于1％的单个核苷酸的变异，包括转换、颠换、缺失和插入。近年来的研究表明人类基因组中可能每100-300个碱基对(basepair，bp)就存在一个SNP，估计SNP总数在数百万个左右。正是这0.1％的遗传学差异决定着绝大多数性状的个体间差异，并且影响个体对疾病(包括肿瘤)的易感性、以及对药物的反应性等。因此，寻找影响肺癌遗传易感性的SNP，用于高危人群筛检，从而采取针对性的预防措施，是有效预防肺癌高发的策略之一。在一些类比研究中，人们注意到精子发生和癌症形成具有很多的相似性：例如癌细胞无限增殖的能力与精原细胞持续优势分裂的能力相似；癌细胞染色体数目的异常与精母细胞减数分裂中染色体数目减半相似；癌细胞的转移与生精细胞的迁移相似等。精子发生的过程高效而有序，却与高度失控的细胞癌变过程存在诸多相似性。基于这些相似之处，一些学者提出：当癌基因和抑癌基因不存在明确驱动突变的情况下，一些本应沉默的生殖细胞(如精细胞、卵细胞等)相关基因重新激活，也可以驱动癌症的发生。癌-睾丸基因(Cancer/testisgenes,CT基因)是一类代表着精子发生和肿瘤形成相似性的基因，正常情况下它们只在睾丸组织中特异表达；而在肿瘤中却能够被异常激活，提示这类基因可能在细胞癌变和转移过程中发挥重要作用。因此，此类基因符合恶性肿瘤表观驱动基因的特征。1991年VanDerBruggen等人采用自体分型(autologoustyping)技术，在一株黑色素细胞系中分离出首个CT抗原(MAGEA1)。CT基因的研究成果有着很好的应用前景。首先，肿瘤组织中特异表达的CT抗原具有免疫原性，能够诱导机体产生免疫应答，从而控制肿瘤细胞的生长和增殖。肿瘤免疫治疗就是借助分子生物学技术和细胞工程技术，增强机体对抗癌症的免疫效应，控制癌症进展。利用疾病易感的SNP谱预测疾病的发生，不仅灵敏、准确和快速，具有广阔的应用前景，而且通过SNP预测谱的构建，还可以实现对疾病作出前瞻性的“基因诊断”。近年来，利用SNP预测疾病的发生发展已经成为临床和科研工作者的研究热点，在肿瘤和心脑血管疾病等常见重大疾病预测上的应用价值已初见端倪。然而，目前还没有将CT基因上的SNP应用于原发性肺癌诊断的报道，若能筛选出位于CT基因上的原发性肺癌易感SNP作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，对我国原发性肺癌的诊断现状必将是一次有力的推动，也为其药物筛选、药效评价及靶向治疗开辟了新的途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述技术问题，提出一种与原发性肺癌辅助诊断相关的CT基因上的SNP标志物。本专利技术的第二个目的是提供上述SNP标志物的特异性引物。本专利技术的第三个目的是提供上述SNP标志物及其特异性引物在制备原发性肺癌辅助诊断试剂盒中的应用。本专利技术的第四个目的是提供原发性肺癌辅助诊断试剂盒。专利技术人通过分离和原发性肺癌患者及与其年龄匹配的健康对照外周血DNA中的单核苷酸多态性，寻找一组与原发性肺癌高度相关的位于CT基因上的高特异性和敏感性的SNP，并研制出可便于临床应用的原发性肺癌辅助诊断试剂盒，为原发性肺癌的筛查和诊断提供数据支持，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。本专利技术的目的是通过下列技术方案实现的：一种与原发性肺癌辅助诊断相关的SNP标志物，该标志物为rs12166583、rs12477419、rs75764106、rs74640907、rs74377505、rs1007089、rs1433646、rs6001675、rs11125117、rs3747093和rs793598的组合。所述的SNP标志物的特异性扩增引物，这些引物为：rs12166583的引物序列为SEQIDNo:1和SEQIDNo:2；rs12477419的引物序列为SEQIDNo:4和SEQIDNo:5；rs75764106的引物序列为SEQIDNo:7和SEQIDNo:8；rs74640907的引物序列为SEQIDNo:10和SEQIDNo:11；rs74377505的引物序列为SEQIDNo:13和SEQIDNo:14；rs1007089的引物序列为SEQIDNo:16和SEQIDNo:17；rs1433646的引物序列为SEQIDNo:19和SEQIDNo:20；rs6001675的引物序列为SEQIDNo:22和SEQIDNo:23；rs11125117的引物序列为SEQIDNo:25和SEQIDNo:26；rs3747093的引物序列为SEQIDNo:28和SEQIDNo:29；rs793598的引物序列为SEQIDNo:31和SEQIDNo:32。所述的SNP标志物的特异性延伸引物，该引物为：rs12166583的引物序列为SEQIDNo:3；rs12477419的引物序列为SEQIDNo:6；rs75764106的引物序列为SEQIDNo:9；rs74640907的引物序列为SEQIDNo:12；rs74377505的引物序列为SEQIDNo:15；rs1007089的引物序列为SEQIDNo:18；rs1433646的引物序列为SEQIDNo:21；rs6001675的引物序列为SEQIDNo:24；rs11125117的引物序列为SEQIDNo:27；rs3747093的引物序列为SEQIDNo:30；rs793598的引物序列为SEQIDNo:33。所述的SNP标志物在制备原发性肺癌辅助诊断试剂盒中的应用。所述的SNP标志物的特异性扩增引物在制备原发性肺癌辅助诊断试剂盒中的应用。所述的SNP标志物的特异性延伸引物在制备原发性肺癌辅助诊断试剂盒中的应用。一种原发性肺癌辅助诊断试剂盒，该试剂盒用于检测外周血DNA中rs12166583、rs12477419、rs75764106、rs74640907本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与原发性肺癌辅助诊断相关的SNP标志物，其特征在于该标志物为rs12166583、rs12477419、rs75764106、rs74640907、rs74377505、rs1007089、rs1433646、rs6001675、rs11125117、rs3747093和rs793598的组合。

【技术特征摘要】
1.一种与原发性肺癌辅助诊断相关的SNP标志物，其特征在于该标志物为rs12166583、rs12477419、rs75764106、rs74640907、rs74377505、rs1007089、rs1433646、rs6001675、rs11125117、rs3747093和rs793598的组合。2.权利要求1所述的SNP标志物的特异性扩增引物，其特征在于该引物为：rs12166583的引物序列为SEQIDNo:1和SEQIDNo:2；rs12477419的引物序列为SEQIDNo:4和SEQIDNo:5；rs75764106的引物序列为SEQIDNo:7和SEQIDNo:8；rs74640907的引物序列为SEQIDNo:10和SEQIDNo:11；rs74377505的引物序列为SEQIDNo:13和SEQIDNo:14；rs1007089的引物序列为SEQIDNo:16和SEQIDNo:17；rs1433646的引物序列为SEQIDNo:19和SEQIDNo:20；rs6001675的引物序列为SEQIDNo:22和SEQIDNo:23；rs11125117的引物序列为SEQIDNo:25和SEQIDNo:26；rs3747093的引物序列为SEQIDNo:28和SEQIDNo:29；rs793598的引物序列为SEQIDNo:31和SEQIDNo:32。3.权利要求1所述的SNP标志物的特异性延伸引物，其特征在于该引物为：rs12166583的引物序列为SEQIDNo:3；r...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡志斌，郭雪江，霍然，戴俊程，王铖，秦娜，江玥，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32