通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法，采用以表面涂敷有纤维素‑三(4‑氯‑3‑甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性色谱柱，流动相为添加碱性添加剂的甲醇‑乙醇的混合溶液。采用本发明专利技术的方法，可以实现依度沙班与异构体Edox‑Ⅱ和Edox‑Ⅲ的完全分离，本方法操作方便，经过方法验证，方法专属性好，灵敏度高，精密准确，利用本发明专利技术的方法可以准确的进行甲苯磺酸依度沙班水合物原料药及其制剂的异构体Edox‑Ⅱ和Edox‑Ⅲ的定量分析，从而保证了甲苯磺酸依度沙班水合物及其制剂的质量可控性。

Separation and determination of impurities in the isomer of toluene sulfonic acid Shaaban hydrate by chiral high performance liquid chromatography

The invention discloses a by chiral HPLC separation and determination of toluene sulfonic acid according to method of Shaaban and its hydrate isomer impurity, the surface coated with cellulose three (4 chlorine 3 methyl phenyl carbamate) chiral silica gel packed column, the mobile phase was added mixed solution alkaline additives methanol ethanol. The method of the invention can realize complete separation in Shaaban and isomers of Edox II and Edox III, this method has the advantages of convenient operation, after verified the method is specific, sensitive, precise and accurate, the method of the invention can carry out accurate analysis according to the degree of toluene sulfonic acid hydrate Shaaban quantitative material the medicine and preparation of isomers of Edox II and Edox III, so as to ensure the quality of toluene sulfonic acid in Shaaban controllable hydrate and its preparation.

【技术实现步骤摘要】
通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及用手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物及其异构体杂质的方法。
技术介绍
甲苯磺酸依度沙班水合物为日本第一三共株式会社研制的小分子口服抗凝药，为凝血因子X(FXa)阻滞剂，于2011年4月由日本厚生劳动省(MHLW)批准在日本上市，用于预防骨科大手术后静脉血栓栓塞包括膝关节全置手术、股关节全置手术以及股关节骨折手术，于2015年1月由美国食品药品管理局(FDA)批准以商品名Savaysa在美国上市，用于降低非瓣膜性心房颤动患者的卒中和系统性栓塞的风险。甲苯磺酸依度沙班水合物结构中含有3个手性中心，应存在8个异构体，不同立体构型可能会产生不同的药理活性，从而可能具有不同的药效和毒副作用。手性异构体对药品的质量影响较大，因此对于甲苯磺酸依度沙班水合物中其他构型异构体的检测对其质量控制具有重要的意义。根据其合成工艺分析，甲苯磺酸依度沙班水合物原料中可能含有的异构体为Edox-Ⅰ、Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ，结构见表1。表1甲苯磺酸依度沙班水合物及其异构体信息表其中Edox-Ⅰ可采用反相HPLC法分离检测，Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ在反相条件下无法实现分离，需采用手性色谱柱进行拆分。目前甲苯磺酸依度沙班水合物的文献报道多为药理作用、临床评价、合成方法等。有文献报道用手性HPLC法拆分其他沙班类药物，文献《利伐沙班及其光学异构体的HPLC法分离与测定》(中国医药工业杂志,2015,46(11):1220-1222)报道崔萍等用研创IB手性柱拆分了利伐沙班及其光学异构体。文献《HPLC法测定利伐沙班中对映异构体的含量》(中国药师,2014,17(10):1629-1631)报道张倩如等用ChiralpakIA手性柱拆分了利伐沙班及其对映异构体，但目前尚未见甲苯磺酸依度沙班水合物异构体检测的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法，可以将甲苯磺酸依度沙班水合物异构体杂质为Edox-Ⅱ与Edox-Ⅲ进行有效分离，从而可以准确控制甲苯磺酸依度沙班水合物的质量，从而实现甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的分离测定。本专利技术所用的液相色谱方法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物(Edox)与其异构体杂质的方法，采用以表面涂敷有纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性色谱柱，以添加碱性试剂的甲醇-乙醇混合溶液作为流动相，甲醇-乙醇体积比为30:70～50:50，碱性试剂与甲醇-乙醇混合溶液的体积比为0.05％～0.5％。上述所说的手性色谱柱选自牌号DAICELCHIRALCELOX-H手性色谱柱(规格4.6mm×250mm，5μm)。本专利技术的碱性添加剂选自以下溶剂二乙胺、丁胺或乙醇胺，优选的碱性添加剂为二乙胺。本专利技术所述的方法，其流动相甲醇-乙醇的混合溶液配比为30:70～50:50，优选的配比为40:60。上述所说的有机混合溶液中包含的碱性添加剂与甲醇-乙醇溶液的体积比为0.05％～0.5％，优选的体积比为0.3％。本专利技术所述的分离测定方法，可按以下方法实现：1)系统适用性溶液的制备：取Edox对照品、Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ各适量，加流动相溶解并制成三者的混合溶液，其中Edox浓度为0.01mg/ml～2mg/ml，Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ的浓度分别为Edox浓度的0.5％～1％。2)供试品溶液：取Edox供试品适量，加流动相溶解并稀释制成0.01mg/ml～2mg/ml的溶液。3)对照溶液：精密量取供试品溶液0.1ml～1.0ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。4)色谱条件：采用以表面涂敷有纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性色谱柱；以添加体积比为0.05％～0.5％碱性添加剂的配比为30:70～50:50的甲醇与乙醇的混合溶液为流动相，碱性添加剂为二乙胺、丁胺或乙醇胺，流动相优选为甲醇-乙醇-二乙胺40:60:0.3；检测波长为：210nm～310nm，优选为290nm；流速为0.5ml/min～1.0ml/min，优选为1.0ml/min；柱温为：0℃～40℃，优选为35℃。5)甲苯磺酸依度沙班水合物的异构体测定：精密量取上述供试品溶液和对照溶液各5μl～20μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱柱，按照主成分自身对照法计算样品中异构体Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ的量。本专利技术的有益效果：采用本专利技术的方法来控制甲苯磺酸依度沙班水合物中的异构体杂质含量，可以实现依度沙班与异构体Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ的完全分离，本方法操作方便，经过方法验证，方法专属性好，灵敏度高，精密准确，利用本专利技术的方法可以准确的进行原料药甲苯磺酸依度沙班水合物及其制剂的异构体Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ的定量分析，从而保证了甲苯磺酸依度沙班水合物原料及其制剂的质量可控性。附图说明图1：实施例1甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体分离的系统适用性图谱图2：实施例1甲苯磺酸依度沙班水合物中异构体杂质测定的空白溶剂图谱图3：实施例1甲苯磺酸依度沙班水合物中异构体杂质测定的其他杂质干扰试验图谱图4：实施例1甲苯磺酸依度沙班水合物中异构体杂质测定的图谱图5：实施例2甲苯磺酸依度沙班水合物片中异构体杂质测定的空白辅料图谱图6：实施例2甲苯磺酸依度沙班水合物片中异构体杂质测定的图谱具体实施方式：实施例仅对本
技术实现思路
做进一步说明，并不限定本专利技术，本专利技术的技术保护范围以权利要求书为准。本专利技术所用的甲苯磺酸依度沙班水合物原料、异构体Edox-Ⅱ、异构体Edox-Ⅲ、各其他杂质、甲苯磺酸依度沙班水合物及空白辅料均为本公司自制。本专利技术所用的仪器：DionexU-3000高效液相色谱仪，Chromeleon色谱工作站(Themo公司)，XSE105分析电子天平(瑞士METTLERTOLEDO公司)。实施例1本专利技术所述的甲苯磺酸依度沙班水合物中的异构体Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ测定的方法验证。色谱柱：DAICELCHIRALCELOX-H手性色谱柱(规格4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-乙醇-二乙胺(40:60:0.3)；检测波长：290nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃。1.1系统适用性试验取Edox对照品、Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ各适量，加流动相溶解并制成每1ml中含Edox1mg、Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ各5μg的混合溶液，精密量取20μl，照上述色谱条件进样分析，结果显示：Edox-Ⅲ、Edox、Edox-Ⅱ依次出峰，三者之间分离度为15.5和13.3，达基线分离(见图1)。1.2专属性试验甲苯磺酸依度沙班水合物原料中可能存在的杂质见表2，取Edox、Edox-Ⅱ、Edox-Ⅲ及表2中杂质各适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含Edox1mg，Edox-Ⅱ、Edox-Ⅲ及表2中各杂质各5μg的混合溶液，精密量取空白溶剂(流动相)及上述混合溶液各20μl，照上述色谱条件进样分析。结果显示，空白溶剂对Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ的测定无干扰，见图2；Edox-Ⅱ、Edox-Ⅲ与其相邻本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质Edox‑Ⅱ和Edox‑Ⅲ的方法，其特征在于，该方法的色谱条件为采用以表面涂敷有纤维素‑三(4‑氯‑3‑甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性色谱柱，以添加碱性试剂的甲醇‑乙醇混合溶液作为流动相，所述甲醇‑乙醇体积比为30:70～50:50，所述碱性试剂与甲醇‑乙醇混合溶液的体积比为0.05％～0.5％。

【技术特征摘要】
1.一种通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ的方法，其特征在于，该方法的色谱条件为采用以表面涂敷有纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性色谱柱，以添加碱性试剂的甲醇-乙醇混合溶液作为流动相，所述甲醇-乙醇体积比为30:70～50:50，所述碱性试剂与甲醇-乙醇混合溶液的体积比为0.05％～0.5％。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述手性色谱柱为DAICELCHIRALCELOX-H手性色谱柱。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碱性添加剂为二乙胺、丁胺或乙醇胺。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，该方法包括如下步骤：1)系统适用性溶液的制备：取Edox对照品、Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ各适量，加流动相溶解并制成三者的混合溶液，其中Edox浓度为0.01mg/ml～2mg/ml，Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ的浓度分别为Edox浓度的0.5％～1％，即得。2)供试品溶液：取Edo...

【专利技术属性】
技术研发人员：范婧，王秀云，魏伟，王益群，谢少斐，李纬，黄海燕，朱丽君，
申请(专利权)人：南京长澳医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32