一种外源萝卜片段特异标记及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种甘蓝型油菜外源萝卜片段特异标记和外源萝卜片段特异标记的制备方法及应用，通过甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复材料CLR650全基因组重测序数据和萝卜基因组草图信息比对，开发出外源萝卜片段的特异分子标记CLR9‑1～CLR9‑20。通过细胞质不育恢复材料CLR650回交群体的目标单株，获得BC4分离群体；将BC4群体中的可育株，采用混合法进行多世代混合选择，直至获得可育株所占比例超过75％的混合分离群体；最后通过多代自交进行纯合稳定，获得甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复系。本发明专利技术克服了现有方法中恢复基因遗传力严重偏低、性状难以纯合稳定的障碍。

A specific marker and preparation method and application of extraneous radish fragment

Preparation and application of the invention relates to a Brassica napus fragment specific markers and exogenous exogenous radish radish fragment specific marker, recovery of materials CLR650 whole genome sequencing data and genome information through a comparison between the radish cabbage type rape Radish Cytoplasmic male sterile, open specific molecular marker CLR9 fragment of exogenous issued radish 1 ~ CLR9 20. Recovery of materials CLR650 backcross population by the target plant cytoplasmic male sterility, BC4 segregation in the BC4 population; the fertile plant, using mixed method of multi generation hybrid selection, to obtain fertile plants for mixed populations more than 75%; the generation of self to obtain homozygous stable Brassica Rape Radish Cytoplasmic Male Sterile restorer line. The present invention overcomes the obstacles in the existing methods of restoring the genetic power of the restorer genes seriously low and the character difficult to be stable and stable.

【技术实现步骤摘要】
一种外源萝卜片段特异标记及其制备方法和应用
本专利技术属于油菜育种
和分子生物学领域，具体涉及一种外源萝卜片段特异标记和外源萝卜片段特异标记的制备方法，还涉及外源萝卜片段特异标记在甘蓝型油菜育种中的应用。
技术介绍
油菜具有明显的杂种优势，是国内外应对食用植物油短缺、开拓可再生生物能源最具潜力的油料作物。萝卜细胞质雄性不育(OguCMS)是甘蓝型油菜杂种优势利用的理想不育类型，是日本小仓于1968年在萝卜中发现的不育源而建立的细胞质雄性不育系统。由于该不育系统不育性非常稳定、彻底，在十字花科作物杂种优势利用中具有非常重要的价值。随着油菜分子生物学研究的不断深入，基因组测序技术得以完善，测序成本也进一步下降，分子标记的开发和辅助选择技术应用日益成熟和实用化，这为研究甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复材料提供了技术支撑。Heyn于1976年通过属间杂交成功将萝卜的恢复基因导入到甘蓝型油菜(Heyn,1976)。随后，法国的Pelletier等人通过原生质体融合技术，也将欧洲萝卜中的恢复基因导入到甘蓝型油菜中。但由于恢复基因从萝卜转移至甘蓝型油菜时，冗余的萝卜片段也渗入到油菜基因组，导致恢本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9‑1，其具有SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-1，其具有SEQIDNo：1所示的核苷酸序列。2.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-4，其具有SEQIDNo：4所示的核苷酸序列。3.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-8，其具有SEQIDNo：8所示的核苷酸序列。4.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-10，其具有SEQIDNo：10所示的核苷酸序列。5.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-11，其具有SEQIDNo：11所示的核苷酸序列。6.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-13，其具有SEQIDNo：13所示的核苷酸序列。7.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-14，其具有SEQIDNo：14所示的核苷酸序列。8.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-15，其具有SEQIDNo：15所示的核苷酸序列。9.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-19，其具有SEQIDNo：19所示的核苷酸序列。10.一种外源萝卜片段特异标记，其特征在于，所述特异标记为CLR9-20，其具有SEQIDNo：20所示的核苷酸序列。11.一种外源萝卜片段特异标记的制备方法，包括如下步骤：(1)利用甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复材料CLR650为母本与甘蓝型油菜常规品系A进行杂交，获得F1群体，选择多株F1群体植株进行套袋隔离自交，获得F2育性分离群体单株，并提取各单株的基因组总DNA；在盛花期调查F2群体单株育性，分别建立可育株和不育株基因混合池；(2)对甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复材料CLR650进行全基因组重测序，将测序结果与萝卜基因组草图和萝卜细胞质不育恢复基因序列进行比对，获得CLR650的恢复基因及其旁侧外源萝卜序列信息，根据目标区域设计特...

【专利技术属性】
技术研发人员：王同华，郭一鸣，涂金星，陈卫江，李莓，范连益，曲亮，惠荣奎，
申请(专利权)人：湖南省作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖南,43