一种新疆大蒜野生近缘种DNA的提取方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种新疆大蒜野生近缘种DNA的提取方法，主要步骤包括：采集原生境下成熟种子，自然干燥后达到种子安全含水量的同批次种子用于提取DNA；将种子置于研钵中迅速研磨成粉末加入提取液，并置于水浴锅中浸提，离心；取上清液加入氯仿‑异戊醇，离心；取上清液再次加入氯仿‑异戊醇，离心；取上清液加入预冷的异丙醇，沉淀，离心得到沉淀物；弃上清液，加入乙醇冲洗沉淀物，倒掉上清液，自然风干，加入双蒸水将沉淀物完全溶解，即得到DNA提取原液。本发明专利技术的新疆大蒜野生近缘种取材时达到了准确识别，工作安全且效率高。DNA提取操作过程成本低、迅速，有效降低含硫化合物及其他成分的干扰，从而获得高质量的种子基因组DNA。

A method for the extraction of the wild DNA of Xinjiang garlic

The invention belongs to the field of biotechnology, discloses a method for extracting garlic of Xinjiang wild relatives of DNA, mainly comprising the following steps: collecting the original habitat of mature seeds under natural drying after reaching the same batch of seed safe moisture for the extraction of DNA; the seeds in a mortar and grind it into powder to rapidly extract,, placed in a water bath extraction centrifugal supernatant; adding chloroform isoamyl alcohol, centrifugal supernatant; once again joined the chloroform isoamyl alcohol, centrifugal supernatant; adding isopropanol, pre cooling precipitation, centrifuged sediment; discard the supernatant, adding ethanol flushing sediment, pour the supernatant, dry, add distilled water to the precipitate is completely dissolved, namely DNA extraction solution. When the wild species of garlic in Xinjiang are extracted, the invention has achieved accurate identification, safe work and high efficiency. The DNA extraction process is low and rapid, effectively reducing the interference of sulfur compounds and other components, so as to obtain high quality seed genome DNA.

【技术实现步骤摘要】
一种新疆大蒜野生近缘种DNA的提取方法
本专利技术涉及植物分子生物学研究的
，尤其涉及一种提取大蒜野生近缘种高质量的种子基因组DNA提取方法。
技术介绍
葱属植物包括蒜、韭、葱、洋葱等栽培种，新疆地处中亚，其境内的天山山脉、阿尔泰山脉、昆仑山脉以及准噶尔盆地和塔里木盆地构成了该地区特殊的地形地貌，地理环境复杂多样，植物区系成分独特，种质资源有别于东北、华北、西南地区以及西北地区的其它省份，蕴藏着蒜、韭、葱、洋葱等野生近缘种，包括野葱、野蒜和野韭，其中野生分布的野蒜长久以来被当地牧民作为蔬菜、药用和观赏植物利用，国内仅分布于新疆的阿勒泰、布尔津、哈巴河、新源、巩留、塔城、裕民等地的山麓荒地或草原灌丛，是重要的大蒜野生近缘种植物，是大蒜种质创新的亲本材料。目前，存在的主要问题是：①随着一些早期被人类驯化利用的葱属植物资源基因的丢失，遗传背景日趋狭窄，限制了现代农业生产的可持续发展，人们才意识到葱属种质资源亲缘关系分析的重要性。②为了增加栽培种类、挖掘优异基因，各国植物育种工作者将目光投向了野生大蒜植物种质资源特殊性状的挖掘。③为了掌握植物的遗传多样性、特殊的抗逆基因以及与栽培种之间本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新疆大蒜野生近缘种DNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取原生境下的成熟的种子0.5‑1g，烘干至恒重，计算种子含水量，达到种子安全含水量的同批次干种子用于提取DNA。（2）将种子置于研钵中迅速研磨成粉末，转入离心管中加入65℃预热的SDS提取液700μL 与20μL β‑羟基乙醇混匀；所述SDS提取液是按下述方法制得：①58.4g NaCl加双蒸水制成200mL溶液即得5M NaCl；②37.22g EDTA加双蒸水至200mL即得0.5M EDTA；③12.11g Tris ，4.2mL HCl加双蒸水至100mL即得1M Tris‑HCl；④SDS提取液：SDS 2g，1M...

【技术特征摘要】
1.一种新疆大蒜野生近缘种DNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取原生境下的成熟的种子0.5-1g，烘干至恒重，计算种子含水量，达到种子安全含水量的同批次干种子用于提取DNA。（2）将种子置于研钵中迅速研磨成粉末，转入离心管中加入65℃预热的SDS提取液700μL与20μLβ-羟基乙醇混匀；所述SDS提取液是按下述方法制得：①58.4gNaCl加双蒸水制成200mL溶液即得5MNaCl；②37.22gEDTA加双蒸水至200mL即得0.5MEDTA；③12.11gTris，4.2mLHCl加双蒸水至100mL即得1MTris-HCl；④SDS提取液：SDS2g，1MTris10mL，0.5MEDTA4mL，5MNaCl28mL，PVP1g，β-羟基乙醇2mL，最后加双蒸水至100mL为SDS提取液。（3）将离心管置于65℃水浴锅中浸提1.5h，其间缓慢混匀10次至提取液与粉末完全融合，取出离心管，擦干离心管外壁水珠，8000r/min离心5min。（4）取上清液600μL至离心管中，加入600μL氯仿-异戊醇，8000r/min离心20min。（5）取上清液600μL至离心管中，再次加入600μL氯仿-异戊醇，8000r/min离心20min。（6）取上清液500μL至离心管中，加入-20℃预冷的异丙醇200μL，-20℃沉淀30min，8000r/min离心5min得到沉淀物。（7）弃上清液，加入-20℃预冷的70％乙醇500μL冲洗沉淀物2遍，缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：林辰壹，马晓蓓，叶远荣，
申请(专利权)人：新疆农业大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65