微生物制剂的制造方法及微生物制剂技术

本发明专利技术的微生物制剂的制造方法具备：在含有对象化合物的培养基中添加含有对象化合物分解性微生物的生物质和无机微粒载体，使生物质所含的微生物载持在无机微粒上，一边监视载持于无机微粒载体的微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例、一边进行培养的工序；和在对象化合物分解性微生物的存在比例达到预定值之后，对载持有对象化合物分解性微生物的无机微粒载体进行回收，获得微生物制剂的工序；其中，对象化合物分解性微生物的存在比例通过包含以下工序的方法获得：对载持于无机微粒载体的微生物的16S rRNA基因的预定区域进行扩增，获得扩增产物的工序；和对扩增产物的碱基序列数据进行分析，根据各碱基序列数据间的同源性将所得碱基序列数据分为多个组，将具有各个组的碱基序列数据的微生物作为单一的种类，根据各个组的代表碱基序列数据确定对象化合物分解性微生物的种类，并根据所得碱基序列数据的数量计算全部微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例的工序。

Microbiological preparation and microbial preparation

A manufacturing method of microbial preparation of the invention: adding objects containing compounds and inorganic particulate carrier of microbial biomass in the culture medium containing object compounds, which supported on inorganic particles on the microbial biomass, in proportion, carrying on the monitored object side of compound inorganic particles in carrier microbial decomposition the microbial side were cultured and the existing process; after the proportion of decomposition of the microorganisms in the object compound reaches a predetermined value, the recovery of inorganic particles carrying carrier microbial compound object decomposition, obtained the microbial preparation process; the microbial decomposition ratio of compound object by a method comprising the steps: a predetermined area the 16S rRNA gene of microbial supported on inorganic particle carriers were amplified, To obtain the amplified products and processes; base sequence data of amplified products were analyzed according to the data base sequence homology between the nucleotide sequence data is divided into a plurality of groups, each group will have the nucleotide sequence data of microorganisms as a single species, according to the type of the object to determine the representative compound microbial decomposition sequence data of each group, and the proportion of income according to the number of existing sequence data calculation object compounds are all microorganisms in microbial decomposition process.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】微生物制剂的制造方法及微生物制剂
本专利技术涉及微生物制剂的制造方法及微生物制剂。
技术介绍
在废水处理中，作为将对象化合物从废水中去除的方法，使用燃烧处理方法或利用了对象化合物分解性微生物的生物学处理方法等。作为获得对象化合物分解性微生物的方法，已知对分解对象化合物的微生物进行富集培养、然后对该分解微生物进行鉴定、分离、进行纯培养的方法(分离培养方法)。另外，为如活性污泥这样的混合微生物体系时，已知将对象化合物以低浓度作为营养源供给、通过慢慢地提高浓度使活性污泥习惯对象化合物、从而提高分解能力的被称作驯化的方法(驯化方法)。但是，分离培养方法中，分解微生物的分离需要很长时间，适合的微生物也只限于能够人工培养者，具有用于进行进一步纯培养的制造成本高的课题。另一方面，驯化方法虽然能够廉价且大量地培养分解微生物，但具有驯化需要很长时间的课题。另外，作为将对象化合物分解微生物高密度化的方法，例如如专利文献1所记载的，公开了对硝化细菌进行高密度化、对具有优异物性的微粒个体和微生物进行凝聚造粒化的微生物制剂的制造方法。该微生物制剂由于通过连续培养也可高效地进行制造、保存，因此对于废水的高效处理是有用的。现有技术文献专利文献1：日本特开2003-274937号公报
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题但是，专利文献1所记载的方法虽然能够以氮处理能力为指标对硝化细菌进行高密度化，但造粒化中及造粒化后的硝化细菌群的种类、存在量是无法掌握的。在除氮以外的对象化合物的处理中，认为也是同样的。这样的方法中，仅以对象化合物的分解性为指标时，由于对象化合物分解性微生物的存在量及存在比例无法掌握，因而难以预测在造粒化工序中添加的对象化合物的浓度过高所导致的对象化合物分解微生物群的增殖抑制、或者因对象化合物的分解中间物的蓄积所导致的对象化合物分解微生物的增殖抑制等。另一方面，随着近年的基因分析技术的进步，能够在不对微生物进行分离的情况下，从活性污泥等复合微生物体系中掌握所存在的微生物的种类及存在量。但是，该技术的充分利用在现有情况下由于未脱离单纯的测定领域而受到局限，因而期待确立用于使基因分析技术应用于微生物制剂的制造方法的技术。本专利技术鉴于上述事实，其目的在于提供通过监视对象化合物分解性微生物的存在比例，稳定且高效地制造以所期望的密度载持对象化合物分解性微生物的微生物制剂的方法。另外，本专利技术的目的还在于提供利用上述制造方法制造的微生物制剂、使用了该微生物制剂的化合物分解方法及该微生物制剂的评价方法。用于解决技术问题的手段本专利技术者们通过根据对制造中的微生物制剂所载持的微生物包罗性地进行分析的基因分析信息、对微生物制剂所载持的对象化合物分解性微生物进行监视，从而新确立了有效地制造微生物制剂的方法，进而完成了本专利技术。即，本专利技术例如涉及以下的[1]～[6]。[1]一种载持对象化合物分解性微生物的微生物制剂的制造方法，其具备：在含有对象化合物的培养基中添加含有对象化合物分解性微生物的生物质和无机微粒载体，使生物质所含的微生物载持在无机微粒上，一边监视载持于无机微粒载体的微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例(丰度比例，abundanceratio)、一边进行培养的工序；和在对象化合物分解性微生物的存在比例达到预定值之后，对载持有对象化合物分解性微生物的无机微粒载体进行回收，获得微生物制剂的工序；其中，对象化合物分解性微生物的存在比例通过包含以下工序的方法获得：对载持于无机微粒载体的微生物的16SrRNA基因的预定区域进行扩增，获得扩增产物的工序；和对扩增产物的碱基序列数据进行分析，根据各碱基序列数据间的同源性将所得碱基序列数据分为多个组，将具有各个组的碱基序列数据的微生物作为单一的种类，根据各个组的代表碱基序列数据确定对象化合物分解性微生物的种类，并根据所得碱基序列数据的数量计算全部微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例的工序。[2]上述[1]所述的制造方法，其中，对象化合物为(S)-2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸。[3]上述[1]所述的制造方法，其中，对象化合物为氨。[4]一种微生物制剂，其是通过上述[1]～[3]中任一项所述的制造方法制造的。[5]一种化合物分解方法，其使用了上述[4]所述的微生物制剂。[6]一种评价方法，其为上述[4]所述的微生物制剂的评价方法，其具备以微生物制剂所含微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例为指标、对微生物制剂进行评价的工序；其中，对象化合物分解性微生物的存在比例通过包含以下工序的方法获得：对微生物制剂所含微生物的16SrRNA基因的预定区域进行扩增，获得扩增产物的工序；和对扩增产物的碱基序列数据进行分析，根据各碱基序列数据间的同源性将所得碱基序列数据分为多个组，将具有各个组的碱基序列数据的微生物作为单一的种类，根据各个组的代表碱基序列数据决定对象化合物分解性微生物的种类，并根据所得碱基序列数据的数量计算全部微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例的工序。专利技术效果根据本专利技术可以提供一种方法，其通过检测载持于微生物制剂的微生物的种类、根据计算其存在比例的结果、对对象化合物分解性微生物进行监视，来稳定且高效地制造以所期望的密度载持对象化合物分解性微生物的微生物制剂。另外，本专利技术还可以提供利用上述制造方法制造的微生物制剂、使用了该微生物制剂的化合物分解方法及该微生物制剂的评价方法。附图说明图1为制造本实施方式的微生物制剂的反应槽的概略纵截面图。具体实施方式以下对用于实施本专利技术的方式(以下称作“本实施方式”)详细地进行说明。其中，本专利技术并不限定于以下的实施方式。＜微生物制剂的制造方法＞本实施方式的载持对象化合物分解性微生物的微生物制剂的制造方法具备以下的工序：在含有对象化合物的培养基中添加含有对象化合物分解性微生物的生物质和无机微粒载体，使生物质所含的微生物载持在无机微粒上，一边监视载持于无机微粒载体的微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例、一边进行培养的工序；和在对象化合物分解性微生物的存在比例达到预定值之后，对载持有对象化合物分解性微生物的无机微粒载体进行回收，获得微生物制剂的工序。作为本实施方式的对象化合物，只要是可被微生物分解的化合物则无特别限定，但优选含有在废水中的化合物。作为这样的化合物，例如可举出氨、亚硝酸、苯、甲苯、苯乙烯、二甲苯、儿茶酚、原儿茶酸、原儿茶醛、2-苯基丁酸、2-异丙基苯基丁酸、(S)-2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸、苯甲酸、苯甲醛等。其中，优选期待从废水中除去的氨或(S)-2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸。作为含有对象化合物的培养基，只要含有对象化合物且能够对对象化合物分解性微生物进行培养，则无特别限定。作为这样的培养基，可以是人工调节了各盐类、pH等的培养基，也可以是下水(脏水)或废水。培养基所含对象化合物的浓度从对对象化合物分解性微生物进行驯化的观点出发，优选初始浓度设定得较低，在培养过程中逐渐提高。初始浓度可以每个对象化合物地进行适当设定。对象化合物分解性微生物是指能够以对象化合物作为营养源进行分解、利用的微生物。本实施方式的对象化合物分解性微生物根据对象化合物的选择来适当选择。对象化合物选择氨时，例如可举出硝化细菌(亚硝化单胞菌(Nitrosomo本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种载持对象化合物分解性微生物的微生物制剂的制造方法，其具备：在含有对象化合物的培养基中添加含有所述对象化合物分解性微生物的生物质和无机微粒载体，使所述生物质所含的微生物载持在所述无机微粒上，一边监视载持于所述无机微粒载体的微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例、一边进行培养的工序；和在对象化合物分解性微生物的存在比例达到预定值之后，对载持有对象化合物分解性微生物的无机微粒载体进行回收，获得微生物制剂的工序；其中，所述对象化合物分解性微生物的存在比例通过包含以下工序的方法获得：对载持于所述无机微粒载体的微生物的16S rRNA基因的预定区域进行扩增，获得扩增产物的工序；和对所述扩增产物的碱基序列数据进行分析，根据各碱基序列数据间的同源性将所得碱基序列数据分为多个组，将具有各个组的碱基序列数据的微生物作为单一的种类，根据各个组的代表碱基序列数据确定对象化合物分解性微生物的种类，并根据所得碱基序列数据的数量计算全部微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例的工序。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.03 JP 2015-0769551.一种载持对象化合物分解性微生物的微生物制剂的制造方法，其具备：在含有对象化合物的培养基中添加含有所述对象化合物分解性微生物的生物质和无机微粒载体，使所述生物质所含的微生物载持在所述无机微粒上，一边监视载持于所述无机微粒载体的微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例、一边进行培养的工序；和在对象化合物分解性微生物的存在比例达到预定值之后，对载持有对象化合物分解性微生物的无机微粒载体进行回收，获得微生物制剂的工序；其中，所述对象化合物分解性微生物的存在比例通过包含以下工序的方法获得：对载持于所述无机微粒载体的微生物的16SrRNA基因的预定区域进行扩增，获得扩增产物的工序；和对所述扩增产物的碱基序列数据进行分析，根据各碱基序列数据间的同源性将所得碱基序列数据分为多个组，将具有各个组的碱基序列数据的微生物作为单一的种类，根据各个组的代表碱基序列数据确定对象化合物分解性微生物的种类，并根据所得碱基序列数据的数量计算全部微生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：中村洋介，新田英二，朝子弘之，冈崎文美，
申请(专利权)人：住友化学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP