一种巴克夏猪抗病新品系的培育方法技术

本发明专利技术涉及巴克夏猪抗病新品系的培育方法，包括步骤：第一步：对巴克夏猪核心群断奶仔猪采用饲料添加的方法进行大肠杆菌感染试验，根据表型鉴定的结果，组建巴克夏猪大肠杆菌抗病育种基础群；第二步：利用前期取得的专利技术对基础群进行一般抗病力的分子选育，同时对繁殖性能、生长速度、瘦肉率、胴体品质等性状进行检测和选择，组建第一个世代；第三步：用群体继代选育和分子标记辅助选择的方法，经过4‑5个世代，逐步实现既定育种目标，建立新品系核心群。育成的巴克夏猪抗病新品系具有抗断奶仔猪腹泻病、抗逆性强、适应环境能力强等优点，该方法还可以为其他猪品种的抗病育种和新品系选育提供指导。

Cultivation method of a new strain of barkshire pig disease resistance

The present invention relates to a cultivation method of Berkshire resistant new line comprises the following steps: the first step: the method of Berkshire core group of weaned piglets feed by experimental infection of Escherichia coli, according to phenotypic identification results, the formation of Berkshire Escherichia coli resistant breeding base; the second step: use the previous molecular breeding the patent technology on the basis of general resistance group, simultaneous detection and selection on reproductive performance, growth speed, lean meat rate, carcass quality traits, the formation of the first generation; the third step: the method of group breeding and molecular marker assisted selection, after 4 5 generations, gradually realize the breeding goal the establishment of new lines, the core group. The new barkshire swine disease resistant strain has the advantages of resistance to diarrhoea, strong resistance and strong adaptability to environment. This method can also provide guidance for other pig breeding and breeding.

【技术实现步骤摘要】
一种巴克夏猪抗病新品系的培育方法
本专利技术涉及动物遗传育种与繁殖、分子生物学
，具体涉及一种巴克夏猪抗病新品系的培育方法。
技术介绍
猪病是养猪生产的大敌，产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是初生和断奶仔猪腹泻和水肿病最常见和最重要的病原菌，是养猪业中的重要威胁因素(BoldinB，2008)，其中F18大肠杆菌又是目前在养猪业中发生最普遍、危害最大的大肠杆菌病原之一(VandenBroeckWetal,2000)。尽管当前对仔猪腹泻采取的一些预防性措施(如提高管理水平、改善卫生环境、注射药物以及亚单位疫苗接种等)，在一定程度上减少了该病的发生，但并没有从根本上消除断奶仔猪腹泻的发生与流行，大肠杆菌性仔猪腹泻仍然是引起仔猪高发病率和死亡率最主要的原因之一。为进一步保障我国养猪业步入高产、高效和优质的新时期，非抗生素治疗、广谱、直接、高效和全新的仔猪细菌性腹泻防治措施的研发是目前最迫切的攻关难题。从长远来看，采用现代遗传学方法，提高猪对大肠杆菌的抗病力，进行抗病育种，才是治本的办法。为了获得更多的疾病防治方法，必须清楚地了解动物的免疫抗病系统及致病机理。疾病的发生一般是动物的遗传背景与其所处环境之间相互作用的结果。若某一动物在遗传上对一种疾病易感，则环境条件(包括常规疾病防治方法)可能仅对疾病的防治部分有效。一个可取代疾病常规防治法是针对提高家畜抗病力进行选择性育种。遗传性抗病力包括了机体免疫抗病系统及其相互作用的许多方面，因而极为复杂。目前从根本上开展猪的抗性遗传机制研究，进行抗病育种，已引起了国内外学者的高度重视。研究发现，不少猪病的发病机制与猪本身的遗传背景有关，即猪可能对一些疾病存在完全或部分抗性。广义上讲，任何疾病的发生都是遗传与环境因素共同作用的结果，几乎所有疾病都与遗传有关。狭义上讲，遗传病是由于生殖细胞或受精卵中遗传物质发生了结构或功能上的变异所致。因此，从长远角度来看，采用遗传学方法从遗传基础上提高猪对疾病的一般抗性具有治本的功效。而一般抗性是维持猪在不良环境中生存和生产的必要条件，因此培育具有一般抗性的猪种成为育种领域的主要课题之一。巴克夏猪尾梢和四肢下部为白色，其余部分为黑色。对生存环境的适用力很强，且生长快、易催肥。近些年来，由于最新的基因组学技术被应用于猪的选种，国外的巴克夏猪逐渐向体长、膘薄的肉用型方向发展，现代版的巴克夏猪在保持巴克夏猪传统优质肉(雪花肉)为基础，改进了生长速度、瘦肉率、繁殖性能。目前，巴克夏猪在国际养猪业中被普遍用作终端父本生产精品杂交猪。引进的巴克夏猪优良特性主要是高生长性能，但是也存在抗病力和繁殖力下降等问题和不足，尤其是近年来仔猪腹泻病等疾病的发病率较高，直接和间接导致母猪受胎率、产活仔数和断奶仔猪成活率下降。本专利技术在组建巴克夏猪抗大肠杆菌病群体的基础上，利用前期筛选获得的有效的一般抗病力分子标记并进行分子选育。选留一般抗病力强的个体，同时对繁殖性能、生长速度、瘦肉率、胴体品质等性状进行检测和选择，组建第一个世代；用群体继代选育和分子标记辅助选择的方法，经过4-5个世代，逐步实现既定育种目标，建立新品系核心群。有望降低仔猪腹泻疾病的发病率，培育具有抗大肠杆菌病和一般抗病力强、生长速度快的巴克夏猪抗病新品系，从根本上为实现种猪的健康高效养殖奠定基础，取得可观的社会效益、经济效益和社会效益。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种巴克夏猪科学可行的抗病新品系的培育方法，新品系猪具有抗断奶仔猪腹泻病、抗应激、适应环境能力强、饲料报酬高、产仔数多的优点，该方法还可以为其他猪品种的抗病育种和新品系选育提供指导。为实现上述专利技术目的，本专利技术提供的技术方案是：一种巴克夏猪抗病新品系的培育方法，包括以下步骤：(1)采用饲料添加的方法对巴克夏核心群断奶仔猪进行大肠杆菌感染试验，根据表型鉴定的结果，组建巴克夏猪大肠杆菌抗病育种基础群；(2)利用前期取得的专利技术：杀菌通透性增强蛋白基因作为猪一般抗病力遗传标记的应用，申请号：ZL201210369867.5，授权公布号：CN103173531B对基础群进行一般抗病力的分子选育，同时对繁殖性能、生长速度、瘦肉率、胴体品质等性状进行检测和选择，组建第一个世代；(3)用群体继代选育和分子标记辅助选择的方法，经过4-5个世代，逐步实现既定育种目标，建立新品系核心群。步骤(1)所述的巴克夏猪大肠杆菌抗病育种基础群的组建方法具体是：1)选取的健康的21日龄巴克夏仔猪自由饮水，按照断奶仔猪的营养需求饲喂含有21.7％粗蛋白的颗粒饲料，饲料中不含有任何抗生素和微生态制剂；每天喂料4次，一次饲料计量50g，连续饲喂3天；2)采用饲料添加的方法进行大肠杆菌感染试验，将大肠杆菌菌株F18与饲料混合饲喂，每头猪每天接受菌株的平均剂量是4.6×108CFU，连续进行10天，每天对猪的粪便采集进行检测，以“正常”、“糊状”、“水样”对粪便的粘稠度进行记录；3)对感染试验后个体的大肠杆菌抗性/易感性进行进一步验证，结合常规选种的标准，选留感染试验后表型一直为“正常”的个体，并且在相同饲养管理环境条件下按家系分开饲养，组建巴克夏猪大肠杆菌抗病育种基础群。步骤(2)所述的第一世代的组建具体是：1)利用专利技术：杀菌通透性增强蛋白基因作为猪一般抗病力遗传标记的应用，申请号：ZL201210369867.5在巴克夏大肠杆菌抗病育种基础群中进行应用，对基础群进行一般抗病力的分子选育，具体包括以下步骤：①提取待测样本的耳组织DNA，备用；②PCR扩增：以步骤①的DNA为模板，用下述引物A和引物B分别进行PCR扩增，引物A：上游引物为：5’-TCAGGTTGGTTACCGCAGAG-3’下游引物为：5’-ACCCTGTTGATGTGGCTTCT-3’引物B：上游引物为：5′-CCCAACATGGAGATGCAGTTC-3′下游引物为：5′-CAATGAATCAATGAGCACACC-3′；③引物A的PCR扩增产物用SSCP方法进行分析，引物B的PCR扩增产物用限制性内切酶HapⅡ酶切后经聚丙烯酰胺凝胶电泳银染分析，选择引物A扩增产物出现4条带且同时引物B扩增产物出现445bp/304bp/142bp条带的样本为一般抗病力强的个体；2)对一般抗病力强的个体实行选择，运用BLUP模型进行种猪的遗传评估：测定的主要项目有：繁殖性状，包括：总产仔数、活产仔数；主选性状，包括：初生重、21日龄窝重、产仔间隔；肥育性状，包括：达100kg日龄、30kg－100kg日增重、30kg－100kg饲料转化率；胴体性状，包括：达100kg活体背膘；体型外貌，同时剔除出现遗传损征的个体；通过测定和评定，选留符合育种目标的个体；断奶阶段选择：此阶段许多性状还没有表现出来,因此主要是以多留为原则，剔除不合格的整窝及生长发育差的个别猪只，原则是：剔除出现遗传缺陷的整窝猪，所有公猪去势处理；根据亲代成绩，剔除繁殖指数过低的整窝猪，所有公猪去势处理；在保证每窝至少有3头公猪的前提下，将体重低、外形差、生活力弱的所有公猪去势处理；75日龄阶段即保育结束时选择：此阶段的选择主要依据个体本身生长发育进行选择，仅淘汰生长发育差，或有遗传缺陷的猪只；因采用的是“全进全出”的饲养模式，在断奶阶段选择剔本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种巴克夏猪抗病新品系的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)采用饲料添加的方法对巴克夏猪核心群断奶仔猪进行大肠杆菌感染试验，根据表型鉴定的结果，组建巴克夏猪大肠杆菌抗病育种基础群；(2)利用前期取得的专利技术：杀菌通透性增强蛋白基因作为猪一般抗病力遗传标记的应用，申请号：ZL201210369867.5，授权公布号：CN 103173531 B对基础群进行一般抗病力的分子选育，同时对繁殖性能、生长速度、瘦肉率、胴体品质等性状进行检测和选择，组建第一个世代；(3)用群体继代选育和分子标记辅助选择的方法，经过4‑5个世代，逐步实现既定育种目标，建立新品系核心群。

【技术特征摘要】
1.一种巴克夏猪抗病新品系的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)采用饲料添加的方法对巴克夏猪核心群断奶仔猪进行大肠杆菌感染试验，根据表型鉴定的结果，组建巴克夏猪大肠杆菌抗病育种基础群；(2)利用前期取得的专利技术：杀菌通透性增强蛋白基因作为猪一般抗病力遗传标记的应用，申请号：ZL201210369867.5，授权公布号：CN103173531B对基础群进行一般抗病力的分子选育，同时对繁殖性能、生长速度、瘦肉率、胴体品质等性状进行检测和选择，组建第一个世代；(3)用群体继代选育和分子标记辅助选择的方法，经过4-5个世代，逐步实现既定育种目标，建立新品系核心群。2.根据权利要求1所述的巴克夏猪抗病新品系的培育方法，其特征在于：步骤(1)所述的巴克夏猪大肠杆菌抗病育种基础群的组建方法具体是：1)选取的健康的21日龄巴克夏仔猪自由饮水，按照断奶仔猪的营养需求饲喂含有21.7％粗蛋白的颗粒饲料，饲料中不含有任何抗生素和微生态制剂；每天喂料4次，一次饲料计量50g，连续饲喂3天；2)采用饲料添加的方法进行大肠杆菌感染试验，将大肠杆菌菌株F18与饲料混合饲喂，每头猪每天接受菌株的平均剂量是4.6×108CFU，连续进行10天，每天对猪的粪便采集进行检测，以“正常”、“糊状”、“水样”对粪便的粘稠度进行记录；3)对感染试验后个体的大肠杆菌抗性/易感性进行进一步验证，结合常规选种的标准，选留感染试验后表型一直为“正常”的个体，并且在相同饲养管理环境条件下按家系分开饲养，组建巴克夏猪大肠杆菌抗病育种基础群。3.根据权利要求1所述的巴克夏猪抗病新品系的培育方法，其特征在于：步骤(2)所述的第一世代的组建具体是：1)利用专利技术：杀菌通透性增强蛋白基因作为猪一般抗病力遗传标记的应用，申请号：ZL201210369867.5在巴克夏大肠杆菌抗病育种基础群中进行应用，对基础群进行一般抗病力的分子选育，具体包括以下步骤：①提取待测样本的耳组织DNA，备用；②PCR扩增：以步骤①的DNA为模板，用下述引物A和引物B分别进行PCR扩增，引物A：上游引物为：5’-TCAGGTTGGTTACCGCAGAG-3’下游引物为：5’-ACCCTGTTGATGTGGCTTCT-3’引物B：上游引物为：5′-CCCAACATGGAGATGCAGTTC-3′下游引物为：5′-CAATGAATCAATGAGCACACC-3′；③引物A的PCR扩增产物用SSCP方法进行分析，引物B的PCR扩增产物用限制性内切酶HapⅡ酶切后经聚丙烯酰胺凝胶电泳银染分析，选择引物A扩增产物出现4条带且同时引物B扩增产物出现445bp/304bp/142bp条带的样本为一般抗病力强的个体；2)对一般抗病力强的个体实行选择，运用BLUP模型进行种猪的遗传评估，测定的主要项目有：繁殖性状，包括：总产仔数、活产仔数；主选性状，包括：初生重、21日龄...

【专利技术属性】
技术研发人员：包文斌，刘颖，吴圣龙，黄小国，是英豪，魏宗友，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32