一种快速分析甲壳动物血淋巴细胞类群和数量的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种用于快速检测多种常见甲壳动物血淋巴细胞种类和数量的方法。其原理为凡纳滨对虾、克氏原螯虾以及中华绒螯蟹等甲壳动物血淋巴细胞内的颗粒结构可以作为分类参考，利用具有图像辅助功能的多维全景分析仪，以样点所在分区和辅助图像为依据，可甄别不同类群血淋巴细胞并自动完成统计分析。本方法的特点为:不用染色，避免常规染色及显微镜观察等述诸多人工环节的影响；利用高灵敏度检测器的自动化信号分析，重复性好；多维全景检测仪具有高通量检测能力，数万细胞样点的结果可靠性也远超过人工计数；微量检测所用试剂耗材很少，成本低。本方法不但可用于科学分析、日常监测，还可为分类收集血淋巴细胞提供技术支持，有巨大应用价值。

A method for rapid analysis of the blood lymphocyte groups and numbers of crustaceans and its application

The present invention discloses a method for rapid detection of the species and quantity of the blood lymphocytes of a variety of common crustaceans. The principle of particle structure of Litopenaeus vannamei, crayfish and other crustaceans of Eriocheir sinensis animal lymphocytes can be classified as reference, using the multi-dimensional panoramic analyzer has the auxiliary function of the image, to sample partition and auxiliary image as the basis, can identify different groups of blood lymphocytes and automatic statistical analysis. The characteristics of this method are: no staining, avoid the influence of staining and microscopy, the many artificial links; analysis of the use of automatic signal detector of high sensitivity, good repeatability; multidimensional panorama detector with high throughput detection capability, the reliability of the result of tens of thousands of cell samples is far more than the manual counting; trace detection for reagents and consumables rarely, low cost. This method not only can be used in scientific analysis, daily monitoring, but also can provide technical support for the classification and collection of blood lymphocytes. It has great application value.

【技术实现步骤摘要】
一种快速分析甲壳动物血淋巴细胞类群和数量的方法及应用本专利申请由天津师范大学生命科学学院/天津市动植物抗性重点实验室完成，得到国家自然科学基金（31472299），天津市应用基础与前沿技术研究计划（15JCZDJC33800），天津市水产生态及养殖重点实验室开放基金(TJAE2015005)，“十二五”农村领域国家科技计划课题（2011BAD13B04）的资助。
本专利技术属于检测
，以胞内颗粒特征为基础，结合多维全景检测仪的图像辅助分析功能对凡纳滨对虾、克氏原螯虾及中华绒螯蟹等常见甲壳动物的血淋巴细胞进行准确分类和比例分析，建立一种适用于依据胞内颗粒差异进行分类的高效血象检测方法。
技术介绍
甲壳动物血淋巴的功能与脊椎动物的血液类似，其中的各类细胞承担着重要的免疫职责，因此对各类血淋巴细胞进行准确分类、统计是开展科学研究及客观评价健康状况的重要支撑。人类等高等动物的血细胞研究技术十分成熟，通过各种单克隆抗体不但能够对每类细胞进行辨识区分，还能精确分析细胞所处的不同分化时期以及生理状态，因此，各种特异性抗体的生产是血细胞研究的重要保障。反观甲壳动物，专用抗体的缺乏成了制约血淋巴本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测甲壳动物血淋巴细胞种类和数量的方法， 其特征在于以胞质颗粒的多少和复杂度差异为依据，结合多维全景分析仪的图像辅助功能，区分不同血淋巴细胞类群，对划分的各个类群细胞进行准确鉴定分析并自动完成分类计数和统计分析；按如下的步骤进行：（1）微创抽取10‑1000微升血淋巴，用4%多聚甲醛室温固定5分钟，PBS重悬细胞，用70微米细胞筛过滤去除黏连细胞；（2）取20‑200微升经上述处理的细胞样品，中流速连续采集30000个样点，以Intensity和Area为横、纵坐标作图即可把各类血淋巴细胞按照颗粒分布和复杂度区分为4个类群；所述的甲壳动物指的是：凡纳滨对虾、克氏原螯虾及中华绒螯蟹。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测甲壳动物血淋巴细胞种类和数量的方法，其特征在于以胞质颗粒的多少和复杂度差异为依据，结合多维全景分析仪的图像辅助功能，区分不同血淋巴细胞类群，对划分的各个类群细胞进行准确鉴定分析并自动完成分类计数和统计分析；按如下的步骤进行：（1）微创抽取10-1000微升血淋巴，用4%多聚甲醛室温固定5分钟，PBS重悬细胞，用70微米细胞筛过滤去除黏连细胞；（2）取20-200微升经上述处理的细胞样品，中流速连续采集30000个样点，以Intensity和Area为横、纵坐标作图即可把各类血淋巴细胞按照颗粒分布和复杂度区分为4个类群；所述的甲壳动物指的是：凡纳滨对虾、克氏原螯虾及中华绒螯蟹。2.权利要求1所述的检测方法，其特征在于：（1）样品制备：根据采血量需要，使用微量进样器或一次性注射器吸取抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亦陈，胡锦丽，刘逸尘，晋伟，耿绪云，孙金生，
申请(专利权)人：天津师范大学，
类型：发明
国别省市：天津,12