奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法和应用。试验中选取奶牛乳房炎主要致病菌特异性蛋白，通过ABCpred方案与BepiPred方案预测获得每种蛋白的2个B细胞优势表位将所得优势表位进行连接获得TRE序列，GeneBank上得到cLYZ序列并进行哺乳动物细胞偏好性密码子优化。在TRE序列与cLYZ序列之间插入高剪切效率的Thoseaasigna virus 2A(T2A)自剪切肽，合成后得到含有目的基因片段的pMD‑19T载体。将TRE基因、T2A基因、cLYZ基因亚克隆到穿梭载体pDC315‑MCS‑EGFP上；利用LipoFiter

Construction method and application of recombinant adenovirus of the triad gene of cow mastitis pathogenic bacteria and C lysozyme gene of grouper

The invention discloses the construction method and application of the triple epitope gene of cow mastitis pathogenic bacteria and the recombinant adenovirus of the C lysozyme gene of the grouper. The main pathogenic bacteria of cow mastitis test and selection of specific protein, with ABCpred and BepiPred regimen was predicted for each protein 2 B cell epitope the dominant epitope of the connection to obtain the TRE sequence, GeneBank sequence and cLYZ mammalian cell preference codon optimization. Insert the high shear efficiency between TRE sequence and cLYZ sequence of Thoseaasigna virus 2A (T2A) self cleavage peptide, synthesis after pMD vector containing 19T gene. The TRE gene, T2A gene, cLYZ gene was subcloned into the shuttle vector pDC315 MCS EGFP by LipoFiter;

【技术实现步骤摘要】
奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法和应用
本专利技术属于基因生物工程领域，涉及金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)和链球菌(Streptococcus)的优势B/T细胞表位的预测与设计合成，及和cLYZ基因在T2A剪切肽介导构建共表达重组腺病毒的方法，具体说，是一种利用生物信息学获得奶牛乳房炎主要致病菌三联表位基因(TRE)与石斑鱼c型溶菌酶基因cLYZ共表达重组腺病毒载体构建的方法及应用。
技术介绍
奶牛乳房炎主要由金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)和链球菌(Streptococcus)交叉或共同感染引起的危害奶牛生产的严重疾病，一直困扰着世界乳业的健康发展。现阶段主要依赖抗生素作为预防和治疗手段。抗生素的频繁使用易导致细菌产生耐药性和药物残留等问题，并不是可以长期依赖的治疗方法。表位疫苗具有安全性好、保护力强和应答类型可调控等优点，可以通过在细胞内持续表达抗原的表位多肽，从而激活体内的特异性免疫细胞。石斑鱼c型溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从NCBI上搜索备选蛋白的氨基酸序列，金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的ClfA与EbpS，登录号分别为EFM05894.1和EFM06457.1；大肠杆菌的(Escherichia coli)OmpC和OmpA，登录号为AIL15476.1和ELV73478.1；链球菌(Streptococcus)的SIP和PGK，登录号为AEL21614.1和AKU04271.1；通过ABCpred方案和BepiPred方案预测上述六种特异性蛋白的B细胞表位，选择在ABCpr...

【技术特征摘要】
1.一种奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从NCBI上搜索备选蛋白的氨基酸序列，金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的ClfA与EbpS，登录号分别为EFM05894.1和EFM06457.1；大肠杆菌的(Escherichiacoli)OmpC和OmpA，登录号为AIL15476.1和ELV73478.1；链球菌(Streptococcus)的SIP和PGK，登录号为AEL21614.1和AKU04271.1；通过ABCpred方案和BepiPred方案预测上述六种特异性蛋白的B细胞表位，选择在ABCpred方案中评分较高且BepiPred方案中共有的2个表位序列作为B细胞表位的预测结果；利用MHC-I类分子结合肽在线程序预测细胞毒性T细胞CTL表位，综合HLA-A2、HLA-A*0201、HLA-A*0202、HLA-A*0203、HLA-A*0205五种预测类型，选择预测结果中共有的1个表位序列作为CTL表位预测的结果；采用MHC-II类分子结合肽在线程序预测辅助性T细胞Th表位，选择DRB1-0101、DRB1-0102和DRB1-0301三种预测类型，综合三种方案选择共有的1个方案作为Th表位预测的结果；分别预测获得每种特异性蛋白的2个优势B细胞表位，1个优势CTL细胞表位和1个优势Th细胞表位，将所得优势表位使用连接肽进行连接获得TRE的氨基酸序列，并使用DNAStar软件Protean功能对其进行抗原性分析；2)GeneBank上得到cLYZ序列JQ287658.1，并进行哺乳动物细胞偏好性密码子优化；在所获得的TRE基因序列SEQIDNO.7与优化后的cLYZ序列SEQIDNO.9间插入T2A自剪切肽序列SEQIDNO.8，进行合成，得到含有目的基因片段的质粒pMD-TRE-T2A-cLYZ；3)采用AdMax腺病毒包装系统，将获得的目的基因从质粒pMD-TRE-T2A-cLYZ亚克...

【专利技术属性】
技术研发人员：金天明，林静，李小慧，高珂珂，尚翠玲，孟佳丽，李昕，赵瑞利，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：天津,12