矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷在制备3‑氯‑1,2‑丙二醇引发的疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷在制备和/或预防3‑氯‑1,2‑丙二醇引发的生殖疾病药物中的应用。本发明专利技术发现，矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷（C3G）可以改善3‑MCPD染毒造成的大鼠摄食减少，生长迟缓状况；并且可以有效拮抗3‑MCPD染毒造成的大鼠抗氧化系统破坏，通过抑制MAPK信号通路激活调节支持细胞BTB结构功能，来减轻3‑MCPD造成的生精上皮损伤，维持生精微环境稳定并调节生精细胞分裂与分化，改善生精障碍。同时C3G可以通过调节精子能量代谢相关酶，提高精子活性。调节3‑MCPD染毒造成的大鼠性激素分泌紊乱，维持血清性激素与睾丸内环境中雄激素正常水平。本发明专利技术为以后花色苷对3‑MCPD生殖毒性营养干预提供理论基础。

Application of disease drug 3 O cyanidin glucoside in preparing 3 chlorine 1,2 propylene glycol by the

The present invention provides 3 O cyanidin glucoside in preparing and / or prevention of reproductive disease drug 3 chloride 1,2 propylene glycol by the. The present invention, cyanidin 3 O glucoside (C3G) rats feeding can improve caused 3 MCPD exposure reduction, growth retardation; and destroy the antioxidant system of rat effectively antagonize MCPD exposure caused by 3 can, by inhibiting the activation of the MAPK signaling pathway regulating cell structure and function to support BTB. Reduce the seminiferous epithelium injury in 3 caused by MCPD, to maintain the stability and regulation of germinal epithelium of spermatogenic cell division and differentiation, improve dyszoospermia. At the same time, C3G can improve the activity of sperm by regulating the enzymes related to sperm energy metabolism. Regulation of rat sex hormone 3 MCPD exposure caused by androgen secretion disorder, maintain the serum sex hormone levels and testis in normal level. The present invention is 3 MCPD anthocyanins on reproductive toxicity and provide a theoretical basis for nutritional intervention.

【技术实现步骤摘要】
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在制备3-氯-1,2-丙二醇引发的疾病药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，更具体地，涉及矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在制备和/或预防3-氯-1,2-丙二醇或3-氯-1,2-丙二醇酯引发的生殖疾病药物中的应用。
技术介绍
3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)在食品中广泛存在且毒性较大，油脂中广泛存在的3-氯-1,2-丙二醇酯在体内的代谢产物即为3-氯-1,2-丙二醇，3-MCPD在消化道内易吸收，在体液中广泛分布，并且可以穿过血睾屏障和血脑屏障到达睾丸和脑。药物代谢动力学表明：3-MCPD可以通过胃肠道吸收后广泛分布到全身各处，在血液中的氯丙醇24h后绝大部分可以代谢出去，但是在脑部的蓄积可达到20％，睾丸中更是高达60％，从而造成睾丸损伤。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)是常见水溶性花色苷中含量最丰富的花色苷之一，是黑豆皮中含量最高的花色苷(68.3％)，具有很强抗氧化活性。目前研究中没有报道关于该花色苷对3-MCPD生殖损伤保护作用，本研究希望为以后花色苷对3-MCPD生殖毒性营养干预提供理论基础。
技术实现思路
本专利技术提供了矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在制备和/或预防3-氯-1,2-丙二醇引发的生殖疾病药物中的应用。本专利技术采用动物实验，采用不同剂量的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对3-MCPD暴露引起的大鼠睾丸损伤的保护作用进行了研究，为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对3-MCPD生殖毒性营养干预提供理论基础。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在制备和/或预防3-氯-1,2-丙二醇或3-氯-1,2-丙二醇酯引发的疾病药物中的应用。优选地，所述疾病为雄性生殖疾病。更优选地，所述雄性生殖疾病为睾丸损伤。更优选地，所述睾丸损伤为生精上皮损伤。优选地，所述雄性生殖疾病为精子能量代谢及雄激素水平紊乱。优选地，所述疾病为3-氯-1,2-丙二醇或3-氯-1,2-丙二醇酯引发的摄食及生长问题。优选地，药物中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的剂量为150～500mg/kg。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点及有益效果：本专利技术发现，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)可以改善3-MCPD染毒造成的大鼠摄食减少，生长迟缓状况；并且可以有效拮抗3-MCPD染毒造成的大鼠抗氧化系统破坏，通过抑制MAPK信号通路激活调节支持细胞BTB结构功能，来减轻3-MCPD造成的生精上皮损伤，维持生精微环境稳定并调节生精细胞分裂与分化，改善生精障碍。同时C3G可以通过调节精子能量代谢相关酶，提高精子活性。调节3-MCPD染毒造成的大鼠性激素分泌紊乱，维持血清性激素与睾丸内环境中雄激素正常水平。在饲料或药物中添加250mg/kg的低剂量到500mg/kg的中剂量呈现了较好的保护作用，而更高的剂量(1000mg/kg)作用并不明显。附图说明图1为C3G干预对大鼠体重变化的趋势。图2为C3G干预对大鼠摄食变化的趋势。图3为C3G干预前后对小鼠脏器系数变化。图4为C3G干预前后对睾丸的病理学分析。图5为C3G干预前后对附睾头的病理学分析。图6为C3G干预前后对附睾尾的病理学分析。图7为C3G干预前后对精子活率/活力测定结果。图8为C3G干预前后对精子动力学参数结果。图9为C3G干预前后对精子总数、畸形率测定结果。图10为C3G干预前后对精子形态影响。图11为C3G干预前后对睾丸LDH与LDH-X活性变化。图12为C3G干预前后对睾丸内GSH与GSSG含量变化。图13为C3G干预前后对睾丸内SOD活性变化。图14为C3G干预前后对睾丸MDA水平变化。图15为C3G干预前后对大鼠血清炎症因子水平变化。图16为C3G干预前后对生精细胞8-0HdG免疫影响。图17为C3G干预前后对大鼠血清激素水平变化。图18为C3G干预前后对生精细胞TUNEL凋亡影响。图19为C3G干预前后对生精细胞凋亡指数的变化影响。图20为C3G干预前后对睾丸GAPDH蛋白表达变化。图21为C3G干预前后对睾丸ERK蛋白表达变化。图22为C3G干预前后对睾丸p38蛋白表达变化。图23为C3G干预前后对睾丸JNK蛋白表达变化。图24为C3G干预前后对睾丸凋亡相关蛋白表达变化。具体实施方式以下结合具体实施例和附图进一步说明本专利技术，其实施例在附图中图示并在后面加以说明，给出了部分详细的实施方式和具体的操作过程。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。实施例11、试验材料：1.1实验动物10周龄雄性Wistar大鼠54只，购自于广东省实验动物中心。大鼠在暨南大学医学院SPF级动物房饲养，昼夜12小时交替。温度维持在22℃-26℃，相对湿度60％-80％，自由摄食。1.2动物饲料及试剂普通AIN93-G饲料购自江苏美迪森，添加C3G的AIN93-G饲料购自江苏美迪森，其中，添加C3G的AIN93-G饲料配方如表1所示：表1添加C3G的AIN93-G饲料配方饲料委托由江苏美迪森生物医药有限公司加工而成1.33-MCPD溶液配制准确称取3-MCPD5g，溶于500mL生理盐水，搅拌均匀，4℃存放。每周重新配制一次。2、实验方法：采用纯度为92％的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷纯品。2.1动物分组及处理使用普通AIN93-G饲料将大鼠适应性喂养三周后，按体重分层法随机分为6组，每组9只，具体分组如下：表2动物分组大鼠组别饲料种类3-MCPD正常对照AIN93-G饲料-3-氯-1,2丙二醇AIN93-G饲料+高剂量花色苷干预高剂量C3GAIN93-G饲料+中剂量花色苷干预中剂量C3GAIN93-G饲料+低剂量花色苷干预低剂量C3GAIN93-G饲料+花色苷对照中剂量C3GAIN93-G饲料-采用灌胃方式每天对大鼠进行3-MCPD给药，给药剂量20mg/kg.bw。3-MCPD配制浓度5mg/mL，4℃存放。大鼠给药期间，自由摄食、饮水。每三天称量一次体重，调整给药剂量。每两天更换一次饲料，并记录摄食量。饲料存放于-20℃，给动物投放饲料时需恢复至室温。2.2动物标本采集及测定2.2.1实验试剂配制睾丸固定液(mDF)：质量百分比30％的甲醛(37％～40％)，15％的无水乙醇，5％的冰乙酸和50％的蒸馏水。SDS-PAGE胶(成分如表3所示)表3SDS-PAGE胶配方单位：mL电泳胶配制时按照成分表顺序依次加入，上表中为四块胶所需体积。30％丙烯酰胺，Tris-Hcl，10％SDS，10％过硫酸铵，TEMED来自试剂盒。蛋白电泳缓冲液(成分如表4所示)表4蛋白电泳液配方蛋白转膜缓冲液(成分如表5所示)表5蛋白转膜液缓冲液配方磁力搅拌混匀后，4℃存放。洗膜缓冲液(TBST)(成分如表6所示)表6洗膜缓冲液配方磁力搅拌混匀后，4℃存放。5％牛奶封闭液(成分如表7所示)表75％牛奶封闭液配方摇匀后4℃静置取上清。2.2.2免疫组化试剂(1)柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)称量柠檬酸钠1.47g，溶于500mLddH2O中，4MHCl调节pH值至6.0，然后加入0.25mLTween-20，混匀后4℃冷藏保存待用。(2)5％BSA封闭液称取2.5gBSA，溶解于50mLPBS中，混匀后冷藏保存待用。2.3具体实验方本文档来自技高网...

【技术保护点】
矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷在制备和/或预防3‑氯‑1,2‑丙二醇或3‑氯‑1,2‑丙二醇酯引发的疾病药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在制备和/或预防3-氯-1,2-丙二醇或3-氯-1,2-丙二醇酯引发的疾病药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述疾病为雄性生殖疾病。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述雄性生殖疾病为睾丸损伤。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述睾丸损伤为生精上皮损伤。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：白卫滨，朱翠娟，孙建霞，蒋鑫炜，李旭升，李夏，焦睿，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44