一种蜗牛活性肽的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种蜗牛活性肽的提取方法，包括以下步骤：（1）采用活体蜗牛静养一周，清除杂物，挑出足部肉体进行粉碎搅拌为泥状，经过液氮研磨法粉碎，得到蜗牛组织，待用；（2）脱脂；（3）浸提；（4）酶解；（5）将酶解产物进行一次透析、盐析、纯化，然后进行再次透析、干燥，即得。本发明专利技术的蜗牛活性肽能迅速被胃肠壁细胞直接吸收，促进消化酶的分泌；能清除低密度脂蛋白，降低血粘，增强心肌和血管的弹性；能激活肺部细胞、修正气血屏障，清除肺部毒素；可抑制破骨细胞，调理骨质疏松、关节炎和钙缺乏导致的疾病；在免疫系统方面具有刺激胸腺再生、加快淋巴T细胞、B细胞和NK细胞的生成、预防肿瘤病变等功能。

【技术实现步骤摘要】
一种蜗牛活性肽的提取方法
本专利技术涉及一种生物工程领域，具体是一种蜗牛活性肽的提取方法。
技术介绍
蜗牛蛋白活性肽是原肉体组织含量最多的蛋白质，是细胞外基质中的主要成分，占蛋白质总量的95%，相当于肉体体重的95%左右；蜗牛蛋白活性肽可为人体所需补充能量，对人体的技能起到修复调整。利用生物酶技术将蜗牛蛋白活性肽转化为小分子多肽，小分子量相容性良好，并能提高生物利用度，因而被作为生物制药、化妆品及保健品的原料或中间体。蜗牛活性肽含有18种氨基酸，还包括含多种干细胞活性分泌因子，因此具有较大的生物学利用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蜗牛活性肽的提取方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种蜗牛活性肽的提取方法，包括以下步骤：（1）采用活体蜗牛静养一周，清除杂物，挑出足部肉体进行粉碎搅拌为泥状，经过液氮研磨法粉碎至100-200目，得到蜗牛组织，待用；（2）脱脂：采用脱脂溶剂对上述蜗牛组织进行脱脂，得到脱脂物料，其粗蛋白含量达60%左右；（3）浸提：采用酸性提取液对上述脱脂物料进行浸提，得到浸出液；（4）酶解：用胃蛋白酶溶液对上述浸出液进行酶解，酶解后高温灭酶10-20分钟，得到酶解产物；（5）将上述酶解产物进行一次透析、盐析、纯化，然后进行再次透析、干燥，即得具有特定的小分子肽并且具有一定的生物活性的蜗牛活性肽，该蜗牛活性肽总蛋白含量95%以上。作为本专利技术进一步的方案：步骤（2）中，所述脱脂剂包括正丁醇和乙醇溶液；所述正丁醇与乙醇溶液的体积比为（0.05-0.15）：1；每100g蜗牛组织所用的脱脂剂用量为5-10g；步骤（3）中，每100g脱脂物料所用的酸性提取液的用量为1-2L；步骤（4）中，每升浸出液所用的胃蛋白酶溶液的用量为5-20L。作为本专利技术进一步的方案：步骤（2）脱脂的条件为：脱脂温度为0-25℃，脱脂的时间为每6-10小时更换脱脂溶剂一次，共更换2-8次；步骤（3）浸提的条件为：浸提温度为0-25℃，浸提时间为10-60小时；步骤（4）酶解的条件为：酶解的温度为10-40℃，酶解的时间为10-40小时。作为本专利技术进一步的方案：步骤（5）中一次透析所用的透析介质为0.01-0.03mol/L、且pH值7.0-7.4的Na2HPO4溶液，相对于1体积的酶解产物，所述透析介质的用量为10-30倍体积，透析的时间为每6-18小时更换透析介质一次，共更换2-8次；透析所得的透析液离心取沉淀后复溶于5-20倍体积的0.5-1.5mol/L醋酸溶液中，得到透析纯化产物。作为本专利技术进一步的方案：然后将透析纯化产物与NaCl固体混合，使得NaCl的终浓度为0.5-1.5mol/L，然后进一步加入NaCl溶液和Tris-HCl溶液的混合溶液中进行盐析，混合溶液pH值为7.2-7.7，其中NaCl溶液浓度为2-3mol/L，Tris-HCl溶液浓度为0.03-0.08mol/L；将盐析所得沉淀复溶于5-20倍体积的0.5-1.5mol/L醋酸溶液中，得到盐析纯化产物。作为本专利技术进一步的方案：将盐析纯化产物进行再次透析纯化，所用的再次透析介质为去离子水，且相对于1体积的盐析纯化产物，再次透析所用去离子水的用量为10-30倍体积，再次透析的时间为每6-18小时更换去离子水一次，共更换2-8次；并且，将再次透析所得的透析液于-18℃到-22℃的温度下预冷冻8-20小时，再进行真空冷冻干燥。一种利用蜗牛活性肽的提取方法得到的蜗牛活性肽。作为本专利技术进一步的方案：所述蜗牛活性肽具有以下肽分子量高斯分布模式：分子量为100-1000道尔顿的肽高斯分布面积为26-30%，且分子量在1000-10000道尔顿的多肽高斯分布面积为40-46%。作为本专利技术进一步的方案：所述蜗牛活性肽具有如下所示的肽分子量高斯分布模式：分子量大于10000道尔顿的肽高斯分布面积为20-21%；分子量为5000-10000道尔顿的肽高斯分布面积为10-11%；分子量为3000-5000道尔顿的肽高斯分布面积为9-10%；分子量为2000-3000道尔顿的肽高斯分布面积为14-15%；分子量为1000-2000道尔顿的肽高斯分布面积为10-11%；分子量为100-1000道尔顿的肽高斯分布面积为28-29%，且分子量小于100道尔顿的肽高斯分布面积为7-8%。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的蜗牛活性肽能够被人体所吸收，且能迅速被胃肠壁细胞直接吸收，促进消化酶的分泌；能清除低密度脂蛋白，降低血粘，增强心肌和血管的弹性；能激活肺部细胞、修正气血屏障，清除肺部毒素；可抑制破骨细胞，调理骨质疏松、关节炎和钙缺乏导致的疾病；在免疫系统方面具有刺激胸腺再生、加快淋巴T细胞、B细胞和NK细胞的生成、预防肿瘤病变等功能。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。实施例1一种蜗牛活性肽的提取方法，包括以下步骤：（1）采用活体蜗牛静养一周，清除杂物，挑出足部肉体进行粉碎搅拌为泥状，经过液氮研磨法粉碎至100目，得到蜗牛组织，待用；（2）脱脂：采用脱脂溶剂对上述蜗牛组织进行脱脂，得到脱脂物料，其粗蛋白含量达60%左右；所述脱脂剂包括正丁醇和乙醇溶液；所述正丁醇与乙醇溶液的体积比为0.05：1；每100g蜗牛组织所用的脱脂剂用量为5g；脱脂的条件为：脱脂温度为0℃，脱脂的时间为每6小时更换脱脂溶剂一次，共更换2次；（3）浸提：采用酸性提取液对上述脱脂物料进行浸提，得到浸出液；每100g脱脂物料所用的酸性提取液的用量为1L；所述酸性提取液为浓度为0.5-1.5mo1/L的酸溶液；所述酸采用醋酸；浸提的条件为：浸提温度为0℃，浸提时间为10小时；（4）酶解：用胃蛋白酶溶液对上述浸出液进行酶解，酶解后高温灭酶10分钟，得到酶解产物；每升浸出液所用的胃蛋白酶溶液的用量为5L；所述胃蛋白酶溶液包括胃蛋白酶和醋酸溶液；其中胃蛋白酶质量含量为5-10%，醋酸溶液浓度为5-1.5mo1/L；酶解的条件为：酶解的温度为10℃，酶解的时间为10小时；（5）将上述酶解产物进行一次透析、盐析、纯化，然后进行再次透析、干燥，即得具有特定的小分子肽并且具有一定的生物活性的蜗牛活性肽，该蜗牛活性肽总蛋白含量95%以上；其中，一次透析所用的透析介质为0.01-0.03mol/L、且pH值7.0-7.4的Na2HPO4溶液，相对于1体积的酶解产物，所述透析介质的用量为10倍体积，透析的时间为每6小时更换透析介质一次，共更换2次；透析所得的透析液离心取沉淀后复溶于5倍体积的0.5-1.5mol/L醋酸溶液中，得到透析纯化产物；然后将透析纯化产物与NaCl固体混合，使得NaCl的终浓度为0.5-1.5mol/L，然后进一步加入NaCl溶液和Tris-HCl溶液的混合溶液中进行盐析，混合溶液pH值为7.2-7.7，其中NaCl溶液浓度为2-3mol/L，Tris-HCl溶液浓度为0.03-0.08mol/L；将盐析所得沉淀复溶于5倍体积的0.5-1.5mol/L醋酸溶液中，得到盐析纯化产物；然后将盐析纯化产物进行再次透析纯化，所用的再次透析介质为去离子水，且相对于1体积的盐析纯化产物，再次透析所用去离子水的用量为1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蜗牛活性肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采用活体蜗牛静养一周，清除杂物，挑出足部肉体进行粉碎搅拌为泥状，经过液氮研磨法粉碎至100‑200目，得到蜗牛组织，待用；（2）脱脂：采用脱脂溶剂对上述蜗牛组织进行脱脂，得到脱脂物料，其粗蛋白含量达60%左右；（3）浸提：采用酸性提取液对上述脱脂物料进行浸提，得到浸出液；（4）酶解：用胃蛋白酶溶液对上述浸出液进行酶解，酶解后高温灭酶10‑20分钟，得到酶解产物；（5）将上述酶解产物进行一次透析、盐析、纯化，然后进行再次透析、干燥，即得具有特定的小分子肽并且具有一定的生物活性的蜗牛活性肽，该蜗牛活性肽总蛋白含量95%以上。

【技术特征摘要】
1.一种蜗牛活性肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采用活体蜗牛静养一周，清除杂物，挑出足部肉体进行粉碎搅拌为泥状，经过液氮研磨法粉碎至100-200目，得到蜗牛组织，待用；（2）脱脂：采用脱脂溶剂对上述蜗牛组织进行脱脂，得到脱脂物料，其粗蛋白含量达60%左右；（3）浸提：采用酸性提取液对上述脱脂物料进行浸提，得到浸出液；（4）酶解：用胃蛋白酶溶液对上述浸出液进行酶解，酶解后高温灭酶10-20分钟，得到酶解产物；（5）将上述酶解产物进行一次透析、盐析、纯化，然后进行再次透析、干燥，即得具有特定的小分子肽并且具有一定的生物活性的蜗牛活性肽，该蜗牛活性肽总蛋白含量95%以上。2.根据权利要求1所述的蜗牛活性肽的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，所述脱脂剂包括正丁醇和乙醇溶液；所述正丁醇与乙醇溶液的体积比为（0.05-0.15）：1；每100g蜗牛组织所用的脱脂剂用量为5-10g；步骤（3）中，每100g脱脂物料所用的酸性提取液的用量为1-2L；步骤（4）中，每升浸出液所用的胃蛋白酶溶液的用量为5-20L。3.根据权利要求1所述的蜗牛活性肽的提取方法，其特征在于，步骤（2）脱脂的条件为：脱脂温度为0-25℃，脱脂的时间为每6-10小时更换脱脂溶剂一次，共更换2-8次；步骤（3）浸提的条件为：浸提温度为0-25℃，浸提时间为10-60小时；步骤（4）酶解的条件为：酶解的温度为10-40℃，酶解的时间为10-40小时。4.根据权利要求1所述的蜗牛活性肽的提取方法，其特征在于，步骤（5）中一次透析所用的透析介质为0.01-0.03mol/L、且pH值7.0-7.4的Na2HPO4溶液，相对于1体积的酶解产物，所述透析介质的用量为10-30倍体积，透析的时间为每6-18小时更换透析介质一次，共更换2-8次；透析所得的透析液离心取沉淀后复溶于5-20倍体积的0.5-1.5mol/L醋酸溶液中，得到透析...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈和平，
申请(专利权)人：陈和平，
类型：发明
国别省市：江苏,32