cdtB基因过表达慢病毒载体及其构建方法和包含cdtB基因的慢病毒及其应用技术

本发明专利技术提供了cdtB基因过表达慢病毒载体及其构建方法和包含cdtB基因的慢病毒及其应用，属于基因工程技术领域。一种cdtB基因过表达慢病毒载体pLVX‑AcGFP1‑N1‑cdtB，以pLVX‑AcGFP1‑N1慢病毒表达载体为基础，在多克隆位点处引入cdtB基因。本发明专利技术还提供了含有cdtB基因的慢病毒，利用构建得到的pLVX‑AcGFP1‑N1‑cdtB载体与慢病毒包装体系VSVG、pCMV△R8.2混合，实现慢病毒包装过程，得到能够直接感染真核细胞的慢病毒，从而实现了cdtB基因在真核细胞中正常表达的目的，为进一步了解cdtB基因的功能打好基础。

【技术实现步骤摘要】
cdtB基因过表达慢病毒载体及其构建方法和包含cdtB基因的慢病毒及其应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及cdtB基因过表达慢病毒载体及其构建方法和包含cdtB基因的慢病毒及其应用。
技术介绍
CDT是由一些革兰阴性菌产生的一种具有细胞毒性蛋白，包括空肠弯曲菌、某些大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、嗜血杆菌和肝螺杆菌。完整的CDT蛋白由cdtA、cdtB、cdtC三个亚基组成，其中cdtA结合细胞膜，cdtC帮助cdtB进入细胞，进而cdtB引起细胞毒性。CdtB是Mg2+、Ca2+依赖性中性核酸酶，含有DNA水解和阳离子结合结构域，通过水解断裂磷酸二脂键引发宿主细胞的DNA损伤，并且导致细胞质和细胞核的延伸，激活细胞周期检查点阻断细胞周期G2/M期，最终导致细胞肿胀和凋亡。为了进一步研究cdtB对细胞产生作用的具体作用，现有的方法主要是构建cdtB原核表达载体，通过诱导大肠杆菌体外表达cdtB蛋白，经过纯化获得cdtB蛋白，所得的cdtB蛋白经过显微注射细胞或直接加入细胞培养液中，用于观察cdtB对细胞的作用。但是原核表达的cdtB蛋白结构会发生一定改变，可能影响cdtB蛋白的功能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种cdtB基因过表达慢病毒载体pLVX‑AcGFP1‑N1‑cdtB，以pLVX‑AcGFP1‑N1慢病毒表达载体为基础，在多克隆位点处引入cdtB基因；所述cdtB基因具有如序列表中Seq ID No.1所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种cdtB基因过表达慢病毒载体pLVX-AcGFP1-N1-cdtB，以pLVX-AcGFP1-N1慢病毒表达载体为基础，在多克隆位点处引入cdtB基因；所述cdtB基因具有如序列表中SeqIDNo.1所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的pLVX-AcGFP1-N1-cdtB，其特征在于，所述多克隆位点为XhoI和BamHI的酶切位点。3.根据权利要求1或2所述的pLVX-AcGFP1-N1-cdtB，其特征在于，所述多克隆位点为MCS序列。4.一种cdtB基因过表达慢病毒载体的构建方法，包括以下步骤：1)从肝螺杆菌基因组中利用引物进行PCR扩增cdtB基因，所述的引物具有如序列表中SEQIDNo.1和SEQIDNo.2的核苷酸序列；2)将所述步骤1)中得到的PCR产物连接于T载体上，获得带有cdtB片段的T载体；3)用限制性内切酶XhoI和BamHI分别对带有cdtB的T载体和慢病毒载体Plvx-AcGFP1-N1进行双酶切，分别得到线性化cdtB基因片段和线性慢病毒载体片段；4)将所述步骤3)得到的线性化cdtB基因片段和线性慢病毒载体片段进行连接，得到cdtB基因过表达慢病毒载体pLVX-AcGFP1-N1-cdtB。5.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，所述步骤1)中PCR扩增的反应体系如下：DNA聚合酶10μL10μmol引物SEQIDNo.11μL10μmol引物SEQIDNo.21μL100ng/μL肝螺杆菌基因组1μLddH2O7μL总计20μL所述步骤1)中PCR扩增的反应程序如下：98℃1min30s，98℃30...

【专利技术属性】
技术研发人员：张泉，谢灵志，于宁，孙靖谕，钱淼，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32