分泌表达葡萄糖氧化酶的方法、重组菌及其应用技术

本发明专利技术涉及分泌表达葡萄糖氧化酶(GOD)的方法、重组菌及其应用，揭示一种能够有效促进GOD表达、提高其酶活的方法，通过在酵母菌中共表达GOD基因和PDI1基因或PDI3基因来实现。同时，本发明专利技术还提供了以毕赤酵母(Pichia pastoris)为宿主构建的高效分泌GOD的重组菌。

【技术实现步骤摘要】
分泌表达葡萄糖氧化酶的方法、重组菌及其应用
本专利技术属于生物工程
，更具体地，本专利技术涉及一种促进葡萄糖氧化酶分泌表达的方法、重组菌及其应用。
技术介绍
葡萄糖氧化酶(Glucoseoxidase，GOD)广泛应用于食品、化工、医药、生物技术等领域。基于葡萄糖氧化酶催化反应的特异性，可用于生物传感器。葡萄糖氧化酶是用来检测血液中葡萄糖浓度传感器的核心成分，固定在传感器电极上的GOD可将血液中微量的葡萄糖转化成容易测定的过氧化氢，铂电极检测到的过氧化氢越多，电信号就越强。葡萄糖氧化酶做成的血糖仪可方便地检测糖尿病患者血糖的波动水平。葡萄糖氧化酶广泛应用于食品行业中。用于食品除氧保鲜，在商品真空袋中加入少许葡萄糖氧化酶和葡萄糖，可以将真空袋中氧气耗尽，从而抑制微生物的生长和繁殖，延长食品的保质期。去除蛋白制品中的葡萄糖。鸡蛋的蛋白中含有0.5～0.6％的葡萄糖，在贮存和加工的过程中，葡萄糖的羰基和蛋白质的氨基发生了梅拉德反应，会在蛋白中出现小黑点。加入GOD可以消耗掉葡萄糖，从而保证蛋白质的质量。可作为食品添加剂加入到面粉中。Bonet等发现，GOD能够和面团中的葡萄糖反应，产本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用酵母细胞表达葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)在酵母细胞中引入外源的葡萄糖氧化酶编码基因；(2)在步骤(1)的酵母细胞中引入外源的选自下组的至少一种基因：PDI1编码基因，PDI3编码基因；(3)培养步骤(2)的酵母细胞，表达葡萄糖氧化酶，所述的葡萄糖氧化酶为高酶活的葡萄糖氧化酶。

【技术特征摘要】
1.一种利用酵母细胞表达葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)在酵母细胞中引入外源的葡萄糖氧化酶编码基因；(2)在步骤(1)的酵母细胞中引入外源的选自下组的至少一种基因：PDI1编码基因，PDI3编码基因；(3)培养步骤(2)的酵母细胞，表达葡萄糖氧化酶，所述的葡萄糖氧化酶为高酶活的葡萄糖氧化酶。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，葡萄糖氧化酶编码基因，PDI1编码基因或PDI3编码基因通过同源重组的方式整合到酵母细胞的基因组中。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)提供表达载体，所述表达载体中包含葡萄糖氧化酶编码基因的序列，将该表达载体转入到酵母细胞中；(2)提供表达载体，所述表达载体中包含PDI1编码基因或PDI3编码基因的序列，将该表达载体转入到步骤(1)的酵母细胞中；(3)培养步骤(2)的酵母细胞，表达葡萄糖氧化酶。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酵母细胞是毕赤酵母细胞。5.如权利要求1～4任一所述的方法，其特征在于，以AOX1启动子驱动外源的葡萄糖氧化酶编码基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱江潮，魏东升，王泽建，段广东，吴凡，储炬，庄英萍，张嗣良，肖慈英，黎亮，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：上海,31