一种基于Ｉ型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法技术方案

本发明专利技术首次公开了一种基于Ｉ型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法，包括蛋白表达质粒、基因编辑质粒及基因编辑过程。原核生物中该双基因即可分开转录也可位于同一操纵子同时转录，故该方法对原核生物基因组可方便、灵活、有效地进行基因编辑；可望有效地应用于基础生物科学及制药、食品、农业等其它领域。

【技术实现步骤摘要】
一种基于I型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法本专利技术涉及生物技术中的基因工程领域，确切地说是一种基于I型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法。
技术介绍
CRISPR/Cas系统广泛存在于细菌及古生菌中,是机体长期进化形成的RNA指导的降解入侵病毒或噬菌体DNA的适应性免疫系统(李君,张毅,陈坤玲,单奇伟,王延鹏,梁振,高彩霞.CRISPR/Cas系统:RNA靶向的基因组定向编辑新技术[J/OL].遗传,2013,35(11):1265-1273)。根据Cas基因序列及蛋白结构，可将CRISPR/Cas系统分为2类六型，目前可用于基因编辑只有是2类Ⅱ型(Cas9)及2类V型(Cpf1)Cas系统(P.Mohanraju,K.S.Makarova,B.Zetsche,F.Zhang,E.V.Koonin,J.vanderOost,DiverseevolutionaryrootsandmechanisticvariationsoftheCRISPR-Cassystems.Science353,aad5147(2016))。维吉尼亚链霉菌IBL14(Stre本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于Ｉ型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法，其特征在于：该方法包括含有

【技术特征摘要】
1.一种基于Ｉ型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法，其特征在于：该方法包括含有cas7与cas3两个基因所组成的蛋白表达质粒的构建、基因编辑质粒的构建以及利用构建的蛋白表达质粒和/或基因编辑质粒形成基因编辑工具对原核生物进行基因编辑。2.根据权利要求1所述的一种基于Ｉ型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）蛋白表达质粒plasmid-cas7-3的构建根据载体相关序列信息设计用于结合cas基因的引物，通过PCR反应扩增得到线性化克隆载体；根据维吉尼亚链霉菌IBL14中cas基因及相关信息序列设计引物，以提取到的维吉尼亚链霉菌IBL14基因组为模板，通过PCR反应扩增得到末端带有与载体有15-25bp重叠区域及含有重叠区的cas7与cas3两个基因，并通过overlapPCR方式将cas7与cas3基因连接起来，最后再将overlapPCR产物通过一步法连接到线性质粒上，得到蛋白表达质粒plasmid-cas7-3；（2）基因编辑质粒plasmid-t/g-geneabbreviation的构建根据靶向基因DNA序列信息设计引物，以提取到的原核生物基因组为模板，通过PCR反应分别扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：童望宇，杨兴旺，曹素丽，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34