一种Musca domestica cecropin 衍生肽M27‑39及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种Musca domestica cecropin衍生肽M27‑39及其应用，衍生肽M27‑39由Musca domestica cecropin的第27～39位而得，序列如SEQ ID NO：1所示。采用固相化学合成法获得Musca domesticacecropin M27‑39衍生肽粗品；使用反相高效液相色谱和电喷射质谱法对合成的多肽进行纯化和鉴定。根据本发明专利技术的衍生肽与天然Musca domestica cecropin相比，不仅在抗HBV和抗肝癌方面具有显著优异的生理活性，而且与天然Musca domesticacecropin相比具有明显简单的结构，因此更易进入细胞，生产成本更少的优点。因此，包含根据本发明专利技术的衍生肽作为活性成分的药物组合物对治疗HBV感染、肿瘤等有效，市场前景非常广阔。

A Musca domestica cecropin M27 39 derived peptide and its application

The invention discloses a Musca domestica M27 39 cecropin derived peptide and its application, a peptide derived from M27 39 by Musca domestica cecropin twenty-seventh ~ 39 to sequence as shown in SEQ ID NO:1. Musca domesticacecropin M27 39 derivative crude peptides by solid-phase chemical synthesis; using reversed-phase high performance liquid chromatography and electrospray mass spectrometry of synthetic peptides were purified and identified. According to the invention of the derived peptide compared with natural Musca domestica cecropin, which has not only physical activity was significantly superior in anti HBV and anti liver cancer, and compared with the natural Musca domesticacecropin has obvious simple structure, so are more likely to enter the cell, the production cost less. Therefore, the pharmaceutical composition containing the derivative peptide of the present invention as active component is effective in the treatment of HBV infection and tumor, and the market prospect is very broad.

【技术实现步骤摘要】
一种Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39及其应用
本专利技术涉及生物
，具体地，涉及一种Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39及其应用，具体应用在抗HBV和抗肝癌方面。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)为嗜肝病毒，全球约20亿人有过HBV感染经历，3.5亿人为慢性HBV感染者，大约80%的患者有不同程度的肝细胞受损，并可能发展成肝硬化和肝癌。每年死于乙肝相关疾病(肝硬化、肝癌等)的人数高达100多万，WHO已将HBV感染列为全球十大最常见致死病因之一。我国属HBV高流行区，一般人群HBsAg携带率高达7.18%。肝癌是世界上发病率第二高的疾病，属于高度恶性肿瘤，是中国的多发病和重大疾病，尽管采取手术切除、放/化疗综合疗法，死亡率仍高居不下。2013年，世界卫生组织宣布原发性肝癌引发全球745517人死亡，我国每年约有38.3万人死于肝癌，占全球肝癌死亡病例数的51%。据调查，我国因慢性乙型肝炎及其相关疾病(肝硬化、肝癌等)每年造成的直接经济损失高达1122.8亿元人民币。这不仅严重影响人民身体健康，而且给国家带来了严重的社会和经济负担。因此针对HBV和肝癌的药物研究，对降低肝癌、HBV感染相关疾病的发病率和病死率具有重大的社会和经济意义。抗菌肽（Antimicrobialpeptides,AMP）是生物免疫系统产生的一类抵抗外界病原体感染的小分子多肽，广泛存在于昆虫、植物、动物及人体内，其中昆虫抗菌肽cecropin是人类发现最早的一类抗菌肽。抗菌肽具有一系列引人注目的生物学活性，包括抗菌、抗炎、抗病毒、抗寄生虫、抑制肿瘤细胞及免疫调节活性等。抗菌肽能够破坏细菌细胞膜或穿过细胞膜作用于胞内靶位点，作用机制独特，不易产生耐药性，对正常人体细胞毒、副作用小。因此在传统抗菌、抗病毒和抗肿瘤药物研发和临床效果不尽如人意的现今，抗菌肽的上述特点使其显示出了良好的应用开发前景。Muscadomesticacecropin是广东药科大学/广东省生物活性药物研究重点实验室从家蝇幼虫脂肪体cDNA文库中克隆的一种昆虫抗菌肽，该基因的ORF区全长为192bp，可编码63个氨基酸的前体蛋白，1～23位氨基酸是以保守4肽结尾的信号肽，其成熟肽含有40个氨基酸，具有较强的抗菌效果和较广的抗菌谱。Muscadomesticacecropin作用机制涉及通过破坏细菌的细胞膜，使菌细胞内容物外泄，胞内DNA也可能是其作用靶点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于对Muscadomesticacecropin进行改造，获得一种效果更好、生产成本更低的Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39。本专利技术的另一个目的在于提供Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39在制备抗HBV和/或抗肝癌药物中的应用。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：一种Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。本专利技术研发设计的Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39与天然Muscadomesticacecropin相比，具有更显著的抗HBV活性和抗肝癌活性，取得了意想不到的技术效果。作为优选实施方案，如上所述的Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39的制备方法如下：S1.取Muscadomesticacecropin的第27～39位氨基酸序列；S2.采用固相化学合成法，通过多肽合成仪合成多肽粗品；S3.将合成的多肽使用反相高效液相色谱进行纯化，并利用电喷射质谱法对合成的多肽进行鉴定，完成多肽的制备。如上所述的Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39在制备治疗HBV感染和/或抗肝癌药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：通过本方法制备的Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39的实验技术简单，对获得的Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39进行抗HBV和抗肝癌活性检测，发现Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39与天然Muscadomesticacecropin相比，具有更显著的抗HBV活性和抗肝癌活性。附图说明图1为Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39的高效液相色谱图。图2为Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39的质谱图。图3显示Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39与天然Muscadomesticacecropin相比具有更显著的抗HBV活性。图4显示Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39与天然Muscadomesticacecropin相比具有更显著的抗肝癌活性。具体实施方式下面结合说明书附图和具体实施例对本专利技术作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39的设计：Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39的氨基酸序列为：VAQQAANVAATLK。通过截取Muscadomesticacecropin第27～39位的氨基酸，设计得到Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39，衍生肽的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，含有13个氨基酸，理论等电点为8.72，理论分子量为1325.54，推测半衰期为100小时，不稳定指数为17.52，GRAVY指数为0.469。实施例2固相化学合成法合成Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39：Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39的制备从C端到N端逐一进行，通过多肽合成仪来完成。首先将Fmoc-X(X是Muscadomesticacecropin衍生肽C端的第一个氨基酸)接入到Wang树脂，然后脱去Fmoc基团后得到X-Wang树脂；再将Fmoc-Y-Trt-OH(9-芴甲氧羧基-三甲基-Y，Y为Muscadomesticacecropin衍生肽C端第二个氨基酸)；按照这个程序依次从C端合成到N端，直至合成完毕，得到脱去Fmoc基团的侧链保护的树脂；在上述得到的肽树脂中，加入切割试剂，20℃避光下反应2h，过滤；沉淀TFA(三氟乙酸)洗涤，将洗液与上述滤液混合，旋转蒸发仪浓缩，再加入10倍左右体积的预冷无水乙醚，-20℃沉淀3h，析出白色粉末物，以2500g离心10min，收集沉淀，再用无水乙醚洗涤沉淀，真空干燥，得到多肽，其中切割试剂由TFA、水和TIS(三异丙基氯硅烷)按照质量比95:2.5:2.5混合而成；使用0.2mol/L硫酸钠(磷酸调节至pH7.5)进行柱平衡30min，用90%乙腈水溶液溶解多肽，过滤，C18反相常压柱，采用梯度洗脱(洗脱剂为甲醇和硫酸钠水溶液按照体积比本文档来自技高网...

【技术保护点】
Musca domesticacecropin衍生肽M27‑39，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.Muscadomesticacecropin衍生肽M27-39，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。2....

【专利技术属性】
技术研发人员：卢雪梅，唐亚男，陈朝霞，刘阿龙，金小宝，朱家勇，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44