一种注射剂中甘油含量的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种注射剂中甘油含量的检测方法，基于定量核磁共振技术(

A method for the determination of glycerol content in injection

The present invention provides a method for detecting glycerol content in a injection, based on a quantitative nuclear magnetic resonance (NMR) technique.

【技术实现步骤摘要】
一种注射剂中甘油含量的检测方法
本专利技术涉及一种药物含量检测方法，尤其是一种注射剂中甘油含量的检测方法。
技术介绍
甘油是日常美容保湿用品，也是注射剂常用辅料，主要用作增溶剂和渗透压调节剂。作为美容用品，主要涂抹在皮肤表面，如面部，手足，身体四肢，并无任何副作用。注射剂主要有静脉注射、肌内注射、皮下注射、皮内注射和脊椎腔注射等给药途径。研究表明，注射液中的高浓度甘油经以上途径进入人体，会出现不同程度的不良反应及副作用。主要原因在于，高浓度甘油具有脱水性，对中枢神经和渗透屏障有直接作用，可以增加血容量，以致引起溶血、头晕、恶心等症状。这些症状在妊娠、高血压、糖尿病、肾病等血容量或血压本身就比较高的情况下，就更加明显。美国食品药品监督管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)规定了不同给药途径注射剂中甘油的最大使用限量，皮下注射剂为32.5％，静脉滴注剂为22.5％，肌肉注射剂的最大用量为15.36％，皮内注射剂为1.6％，静脉注射剂为2.5％。甘油为注射剂常用辅料，目前报道的甘油的测定方法有高碘酸氧化滴定法、GC-FID、HPLC-RID和HPLC-ELSD法等。高碘酸钠滴定法虽然简单快捷，但其专属性和准确度较差。若待测样品含有邻羟基类成分、能被高碘酸钠氧化的成分、能与氢氧化钠溶液反应的成分，均会影响测量结果的准确性。采用气相(GC)检测法测定甘油时，甘油的沸点高(290℃)，不易沸出。HPLC-RID法示差折光检测器准确度低，数据处理十分繁琐。ELSD检测器的稳定性较差，且操作要求高，一般在避光，室内恒温，恒速气流下检测。定量质子核磁共振(quantitativeprotonnuclearmagneticresonance,q1H-NMR)技术是一种日趋成熟的仪器分析方法，现已在化学、药物、食品、农业以及军事领域有广泛的应用，且我国2010版药典将q1H-NMR收载在附录中。q1H-NMR用于药物分析的最大优势在于可同时提供化合物结构确证的定性信息和含量测定的定量信息。与HPLC方法相比，该方法具有样品预处理步骤简单、测试速度快、不破坏样品等优点，能准确地检测出注射剂中的甘油成分，为注射剂中甘油成分的含量测定提供了一种新的手段。注射剂在制备工艺上往往需要添加一些辅料，例如助溶剂、抗氧剂、pH调节剂、等渗调节剂、膨松剂等。近年来注射剂安全问题层出不穷，辅料的安全问题日益受到关注。鉴于此，对注射剂中的甘油成分进行定性定量分析，对保证注射剂安全有效具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种注射剂中甘油含量的检测方法。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：一种注射剂中甘油含量的检测方法，基于定量核磁共振技术(1H-NMR和13C-NMR)对注射液中的甘油成分进行含量测定，具体步骤为：1H-NMR：(1)内标溶液的配制称取马来酸标准品与内标物TSP于容量瓶中，用D2O(重水)溶解并定容至刻度线，用于所有实验溶剂；(2)自制供试品溶液的制备分别精密称取乳酸钠标准品、甘油，加入超纯水、内标溶液，得自制供试品溶液，将所述供试品溶液可转移至5mm核磁管中，直接用于1H-NMR测试；(3)注射液样品溶液的制备分别精密移取注射液0.1ml，加入2ml内标溶液，转移至5mm核磁管中，加封直接用于1H-NMR测试；(4)1H-NMR指纹图谱的测定将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定注射液样品溶液的1H-NMR指纹图谱和自制品溶液的1H-NMR图谱，其中测试参数及条件为：抑水峰序列zgcppr，观测频率600.25MHz，测定温度298K，谱宽16384.0Hz，90°脉冲，采样数据点65536，采样时间1.7039s，扫描次数16次，采样前弛豫延迟时间16s，接受增益28；(5)样品1H-NMR图谱分析选择δ3.657-3.608作为定量质子峰的积分区间；选择内标马来酸δ6.511-6.293为定量质子峰的积分区间；TSP其信号峰在δ0.00，用作定零点，排除内标物对待测成分定量峰的影响；(6)1H-NMR甘油的含量测定在上述实验条件下采集图谱，对甘油和内标物的定量峰分别进行积分，按照1H-NMR内标法根据积分结果依照下式计算样品的质量：其中，PX为待测物的浓度(mmol/L)，PMA为内标马来酸的浓度(mmol/L)，AX为待测物中定量峰面积，AMA为内标马来酸的定量峰面积，NX为待测物的定量质子数，NMA为内标马来酸定量质子数；13C-NMR：(1)内标溶液的配制称取马来酸标准品于容量瓶中，用D2O(重水)溶解并定容至刻度线，用于所有实验溶剂；(2)自制供试品溶液的制备分别精密称取乳酸钠标准品、甘油，加入超纯水、内标溶液，得自制供试品溶液，将所述供试品溶液可转移至5mm核磁管中，直接用于13C-NMR测试；(3)注射剂供试品溶液的制备精密移取注射液并加入上述内标溶液中溶解，将上述供试品溶液可转移至5mm核磁管中，直接用于13C-NMR测试；(4)13C-NMR指纹图谱的测定将核磁管置于核磁共振仪中，采用门控去耦序列测定注射液样品溶液的13C-NMR指纹图谱和自制品溶液的13C-NMR图谱，其中测试参数及条件为：门控去耦序列zgig，观测频率603.80MHz，测定温度298K，谱宽36057.7Hz，90°脉冲宽度16.28μs，采样数据点16384，采样时间0.4544s，扫描次数32次，采样前弛豫延迟时间10s，接受增益2050；(5)样品13C-NMR图谱分析根据13C-NMR谱，选择内标马来酸δ135.62处的官能团上的碳原子为定量峰，甘油δ73.07处的碳原子作为定量峰，分别对峰面积和峰强度进行积分和记录；(6)13C-NMR甘油的含量测定在上述实验条件下采集图谱，对甘油和内标物的定量峰分别进行面积和峰强度积分，按照13C-NMR外标法根据积分结果依照下式计算样品的质量，y＝ax+b；其中x代表定量成分定量峰的积分面积(或峰强度)与内标定量峰的积分面积(或峰强度)之比，y代表定量成分与内标的摩尔浓度比，a和b分别为标准曲线方程的系数。优选的，上述注射剂中甘油成分的含量检测方法，所述1H-NMR步骤(1)中所述内标溶液中含有22.67mmol/L马来酸、0.59mmol/LTSP(例如，精密称取马来酸标准品131.54mg，置于10ml棕色容量瓶中，用D2O溶解(含TSP0.59mmol/L)并定容至刻度，获得马来酸浓度为22.67mmol/L的内标溶液)；所述13C-NMR步骤(1)中所述内标溶液中含有543.11mmol/L马来酸(例如，精密称取马来酸标准品630.40mg，置于10ml棕色容量瓶中，用D2O溶解并定容至刻度，获得马来酸浓度为543.11mmol/L的内标溶液)。优选的，上述注射剂中甘油成分的含量检测方法，所述1H-NMR步骤(2)中自制供试品溶液，方法如下：精密称取每1.44mg乳酸钠标准品，1.25mg甘油，加入30μl超纯水，600μl内标溶液，作为自制供试品溶液；所述13C-NMR步骤(2)中自制供试品溶液，方法如下：精密称取每14.64mg乳酸钠标准品，12.05mg甘油，加入480μl超纯水，120μl内标溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种注射剂中甘油含量的检测方法，其特征在于：基于定量核磁共振技术对注射液中的甘油成分进行含量测定，具体步骤为：

【技术特征摘要】
1.一种注射剂中甘油含量的检测方法，其特征在于：基于定量核磁共振技术对注射液中的甘油成分进行含量测定，具体步骤为：1H-NMR：(1)内标溶液的配制称取马来酸标准品与内标物TSP于容量瓶中，用D2O(重水)溶解并定容至刻度线，用于所有实验溶剂；(2)自制供试品溶液的制备分别精密称取乳酸钠标准品、甘油，加入超纯水、内标溶液，得自制供试品溶液，将所述供试品溶液可转移至5mm核磁管中，直接用于1H-NMR测试；(3)注射液样品溶液的制备分别精密移取注射液0.1ml，加入2ml内标溶液，转移至5mm核磁管中，加封直接用于1H-NMR测试；(4)1H-NMR指纹图谱的测定将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定注射液样品溶液的1H-NMR指纹图谱和自制品溶液的1H-NMR图谱，其中测试参数及条件为：抑水峰序列zgcppr，观测频率600.25MHz，测定温度298K，谱宽16384.0Hz，90°脉冲，采样数据点65536，采样时间1.7039s，扫描次数16次，采样前弛豫延迟时间16s，接受增益28；(5)样品1H-NMR图谱分析选择δ3.657-3.608作为定量质子峰的积分区间；选择内标马来酸δ6.511-6.293为定量质子峰的积分区间；TSP其信号峰在δ0.00，用作定零点，排除内标物对待测成分定量峰的影响；(6)1H-NMR甘油的含量测定在上述实验条件下采集图谱，对甘油和内标物的定量峰分别进行积分，按照1H-NMR内标法根据积分结果依照下式计算样品的质量：其中，PX为待测物的浓度(mmol/L)，PMA为内标马来酸的浓度(mmol/L)，AX为待测物中定量峰面积，AMA为内标马来酸的定量峰面积，NX为待测物的定量质子数，NMA为内标马来酸定量质子数；13C-NMR：(1)内标溶液的配制称取马来酸标准品于容量瓶中，用D2O(重水)溶解并定容至刻度线，用于所有实验溶剂；(2)自制供试品溶液的制备分别精密称取乳酸钠标准品、甘油，加入超纯水、内标溶液，得自制供试品溶液，将所述供试品溶液可转移至5mm核磁管中，直接用于13C-NMR测试；(3)注射剂供试品溶液的制备精密移取注射液并加入上述内标溶液中溶解，将上述供试品溶液可转移至5mm核磁管中，直接用于13C-NMR测试；(4)13C-NMR指纹图谱的测定将核磁管置于核磁共振仪中，采用门控去耦序列测定注射液样品溶液的13C-NMR指纹图谱和自制品溶液的13C-NMR图谱，其中测试参数及条件为：门控去耦序列zgig，观测频率603.80MHz，测定温度...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜苗苗，张梦晗，王秋影，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津,12