红豆杉中10‑DAB快速半定量测量方法技术

本发明专利技术涉及一种红豆杉中10‑DAB快速半定量测量方法，其特征是，包括以下步骤：（1）剪取多株待测量红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取3‑5g，用剪刀剪碎，得到多组碎片；（2）将多组碎片加入甲醇溶液在超声水浴中震荡，提取红豆杉叶片中的10‑DAB，提取后定容得到多组待测溶液；（3）取10‑脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，加入甲醇制成对照品溶液；（4）吸取多组待测溶液和对照品溶液，点于硅胶G薄层板上，使用展开剂展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；（5）将多组待测量红豆杉斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小判断红豆杉植株中10‑DAB含量的高低。本发明专利技术只需使用超声仪即可进行植株含量的初步筛选，大大提高了筛选的成本和速度。

Method for measuring 10 DAB rapid semi quantitative in Taxus chinensis

The invention relates to a method for measuring 10 DAB rapid semi quantitative species, and is characterized in comprising the following steps: (1). Many strains of measured annual Taxus plant top tender leaves, weighing 3 5g, with scissors broken, resulting in multiple sets of debris; (2) the fragment to the group the shock in methanol solution in ultrasonic bath, in the leaves of 10 Taxus extraction DAB, extraction after sizing to obtain multiple analyte solution; (3) 10 deacetyl baccatin III, adding methanol into the standard solution; (4) from multiple groups of test solution and reference solution on silica gel G thin layer plate, using agent spread out, removed, dried, sprayed with sulfuric acid ethanol solution, heating to spot color clear; (5) the group to be measured were compared with the control sample spots of Taxus spots, according to the spot size and shades of red In 10 bean fir plant DAB content. Preliminary screening of the invention only needs to use ultrasound to plant content, greatly improving the screening cost and speed.

【技术实现步骤摘要】
红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法
本专利技术涉及一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，属于测量方法

技术介绍
10-DAB是红豆杉提取物，来源于红豆杉（Taxaceae）属植物的枝叶，是合成紫杉醇和多烯紫杉醇的前体产品。现有技术中，红豆杉中10-DAB的测定方法需要使用到高效液相色谱仪，步骤较为繁琐，测定较慢，成本较高，不适宜于田间进行大规模高含量植株的筛选。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，提高了高含量红豆杉植株的筛选速度，降低了筛选成本，适用于初期半定量筛选。按照本专利技术提供的技术方案，所述红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，其特征是，包括以下步骤：（1）剪取多株待测量红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取3-5g，用剪刀剪碎，得到多组碎片；（2）将步骤（1）得到的多组碎片加入10-15ml浓度90%的甲醇溶液在超声水浴中震荡，提取红豆杉叶片中的10-DAB，提取后定容至50ml，得到多组待测溶液；所述水浴温度为37-38℃；（3）取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，加入浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；（4）吸取多组待测溶液和对照品溶液各5-6ul，点于硅胶G薄层板上，使用展开剂展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，110-120℃加热至斑点显色清晰；（5）将多组待测量红豆杉斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小判断多株红豆杉植株中10-DAB含量的高低以及高低排序。进一步的，所述步骤（2）中，超声波水浴的震荡次数为3-4次，每次震荡30-40分钟。进一步的，所述展开剂为二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇=8:10-12:0.6-0.8。进一步的，所述硫酸乙醇溶液的浓度为10-15%。本专利技术所述红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，只需使用超声仪即可进行植株含量的初步筛选，并且能够实现多株植株含量的高低排序，大大提高了筛选的成本和速度，适用于初期半定量筛选。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例一：一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，包括以下步骤：（1）剪取红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取5g，用剪刀剪碎；（2）将步骤（1）得到的碎片在超声水浴中震荡三次，每次加入15ml浓度90%的甲醇溶液，每次放在超声仪内水浴震荡30分钟，水温37℃，水面超过试管内甲醇的液面，提取后定容至50ml，震荡摇匀，得到待测溶液；（3）取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ（纯品），加浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；（4）吸取待测溶液和对照品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇=8:12:0.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度10%的硫酸乙醇溶液，110℃加热至斑点显色清晰；（5）将测量植株斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小判断测量植株10-DAB含量与对照相比的高低。实施例二：一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，包括以下步骤：（1）剪取红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取3g，用剪刀剪碎；（2）将步骤（1）得到的碎片在超声水浴中震荡4次，每次加入10ml浓度90%的甲醇溶液，每次放在超声仪内水浴震荡40分钟，水温38℃，水面超过试管内甲醇的液面，提取后定容至50ml，震荡摇匀，得到待测溶液；（3）取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ（纯品），加浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；（4）吸取待测溶液和对照品溶液各6ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇=8:12:0.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度15%的硫酸乙醇溶液，120℃加热至斑点显色清晰；（5）将测量植株斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小判断测量植株10-DAB含量与对照相比的高低。实施例三：一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，包括以下步骤：（1）剪取多株红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取4g，用剪刀剪碎，得到多组碎片；（2）将步骤（1）得到的多组碎片在超声水浴中震荡3次，每次加入12ml浓度90%的甲醇溶液，每次放在超声仪内水浴震荡35分钟，水温37℃，水面超过试管内甲醇的液面，提取后定容至50ml，震荡摇匀，得到多组待测溶液；（3）取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ（纯品），加浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；（4）吸取多组待测溶液和对照品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇=8:11:0.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度12%的硫酸乙醇溶液，115℃加热至斑点显色清晰；（5）将多组测量植株斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小进行排序，能够快带得到待测量植株中10-DAB的高低排序。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红豆杉中10‑DAB快速半定量测量方法，其特征是，包括以下步骤：（1）剪取多株待测量红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取3‑5g，用剪刀剪碎，得到多组碎片；（2）将步骤（1）得到的多组碎片加入10‑15ml浓度90%的甲醇溶液在超声水浴中震荡，提取红豆杉叶片中的10‑DAB，提取后定容至50ml，得到多组待测溶液；所述水浴温度为37‑38℃；（3）取10‑脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，加入浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg 10‑脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；（4）吸取多组待测溶液和对照品溶液各5‑6ul，点于硅胶G薄层板上，使用展开剂展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，110‑120℃加热至斑点显色清晰；（5）将多组待测量红豆杉斑点与对照品斑点进行对比，根据斑点的深浅及大小判断多株红豆杉植株中10‑DAB含量的高低以及高低排序。

【技术特征摘要】
1.一种红豆杉中10-DAB快速半定量测量方法，其特征是，包括以下步骤：（1）剪取多株待测量红豆杉植株顶端当年生嫩叶片，称取3-5g，用剪刀剪碎，得到多组碎片；（2）将步骤（1）得到的多组碎片加入10-15ml浓度90%的甲醇溶液在超声水浴中震荡，提取红豆杉叶片中的10-DAB，提取后定容至50ml，得到多组待测溶液；所述水浴温度为37-38℃；（3）取10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ，加入浓度90%的甲醇制成每1ml含2mg10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ的对照品溶液；（4）吸取多组待测溶液和对照品溶液各5-6ul，点于硅胶G薄层板上，使用展开剂展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱波风，
申请(专利权)人：江苏红豆杉生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32