一种基于荧光漂白的超分辨成像方法技术

本发明专利技术提供一种基于荧光漂白的超分辨成像方法，包括以下步骤：1)采用具有光致漂白特性的荧光染料标记样品；2)利用点激发扫描式激光显微镜将激光光束聚焦到经过标记的待测样品上，待测样品经所述激光光束激发发出荧光；3)收集所述待测样品发出的荧光，得到荧光强度信息；以及4)使用一定功率的激发光以及一定的扫描参数对样品进行逐点扫描以在扫描过程中直接漂白样品，使得采集到的有效像素数目相对减小，从而获得较小的荧光斑点，直接获得突破光学衍射极限的超高分辨率成像。本发明专利技术提供了一种可在普通激光扫描显微镜上实现的、适用于所有具有漂白特性的荧光染料的、利用荧光漂白的非线性现象来实现的超分辨成像方法。

A super-resolution imaging method based on fluorescence bleaching

The present invention provides a fluorescent bleaching method based on super resolution imaging, which comprises the following steps: 1) with fluorescent dye labeled sample photobleaching characteristics; 2) using laser scanning microscope excitation laser beam focusing through labeled sample, the sample to be measured by the laser beam emitted excitation fluorescence; 3) fluorescence collection of the sample to be detected by fluorescence intensity, get information; and 4) point by point scanning to bleach directly sample in the scanning process of the sample using excitation light power and scanning parameters, the effective pixel number makes the collected relatively reduced, so as to obtain small fluorescent spots the direct access to ultra high resolution imaging breakthrough of optical diffraction limit. The invention provides a super resolution imaging method that can be realized on ordinary laser scanning microscope and applied to all fluorescent dyes with bleaching characteristics, and is realized by the nonlinear phenomenon of fluorescence bleaching.

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光漂白的超分辨成像方法
本专利技术涉及突破光学衍射极限的超分辨远场光学成像领域，更具体地涉及一种基于荧光漂白的超分辨成像方法。
技术介绍
光学显微镜可以无损的对生物样品进行实时观测成像，是生物学研究中必不可少的关键工具。而光学显微镜的发展也推动着生命科学的进步。细胞内的细胞器以及蛋白等都是处于纳米尺度，这就要求显微镜的分辨率达到纳米级才能够将其分辨清楚。然而由于光学衍射的存在使得光学显微镜的横向分辨率被限制在200nm左右，这就阻碍了人们利用光学显微镜进行更深入的研究。最近二十年来，利用多种非线性光学效应，一系列的超分辨显微镜的出现则打破了光学衍射极限对分辨率的限制。例如通过对激发照明光进行调制来实现超分辨成像的受激发射损耗显微术(stimulatedemissiondepletionmicroscopy，STED)和结构光照明显微术(StructuredIlluminationMicroscopy，SIM)；通过对单分子进行精确定位实现超分辨成像的随机光学重建显微术(Stochasticopticalreconstructionmicroscopy，STORM)和光活化定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于荧光漂白的超分辨成像方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采用具有光致漂白特性的荧光染料标记待测样品；2)利用点激发扫描式激光显微镜将激光光束聚焦到经过荧光标记的待测样品上，待测样品经所述激光光束激发发出荧光；3)收集所述待测样品发出的荧光，得到荧光强度信息；以及4)使用一定功率的激发光以及一定的扫描参数对样品进行逐点扫描以在扫描过程中直接漂白样品，使得采集到的有效像素数目相对减小，从而获得较小的荧光斑点，直接获得突破光学衍射极限的超高分辨率成像。

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光漂白的超分辨成像方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采用具有光致漂白特性的荧光染料标记待测样品；2)利用点激发扫描式激光显微镜将激光光束聚焦到经过荧光标记的待测样品上，待测样品经所述激光光束激发发出荧光；3)收集所述待测样品发出的荧光，得到荧光强度信息；以及4)使用一定功率的激发光以及一定的扫描参数对样品进行逐点扫描以在扫描过程中直接漂白样品，使得采集到的有效像素数目相对减小，从而获得较小的荧光斑点，直接获得突破光学衍射极限的超高分辨率成像。2.根据权利要求1所述的超分辨成像方法，其特征在于，所述步骤4)包括使用较高功率的激发光、较小的扫描步长以及较长的单像素停留时间对样品进行逐点扫描。3.根据权利要求2所述的超分辨成像方法，其特征在于，所述较高功率是普通激光功率的10倍及以上。4.根据权利要求2所述的超分辨成像方法，其特征在于，所述扫描步长为10～20nm。5.根据权利要求2所述的超分辨成像方法，其特征在于，所述单像素停留时间为10～20μs。6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊春海，邓素辉，程亚，陈建芳，侯尚国，
申请(专利权)人：中国科学院上海应用物理研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31