宿主细胞蛋白质修饰制造技术

提供用于工程化细胞系和表达系统的组合物和方法，所述组合物和方法允许在真核细胞中表达重组蛋白及其容易分离。还提供细胞表达系统，其能够表达基本上不含结合型宿主细胞蛋白的目的蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】宿主细胞蛋白质修饰序列表本申请包含在2016年2月26日创建的名为10143US01_ST25.txt的文件中计算机可读取形式的序列表，所述序列表通过引用的方式并入本文。专利
本专利技术提供在真核细胞中表达和纯化重组蛋白的细胞和方法。特别地，本专利技术包括在真核细胞、尤其中国仓鼠(Cricetulusgriseus)细胞系中利用下调内源蛋白的基因表达以控制这类“棘手”的不利宿主细胞蛋白产生而表达蛋白质的方法和组合物。本专利技术包括促进纯化外源重组目的蛋白的多核苷酸和修饰的细胞。本专利技术的方法有效地靶向中国仓鼠细胞基因组中的宿主细胞蛋白，旨在促进由修饰的细胞表达的重组蛋白的增强和稳定表达。背景细胞表达系统旨在为制造供治疗使用的生物制药产物提供可靠和有效的来源。纯化这类系统中真核或原核细胞产生的任何重组蛋白是一项持续存在的挑战，原因在于例如，需要从药用级成品中消除的宿主细胞蛋白和核酸分子过多。已经在生物加工的多种阶段期间研究了视为杂质副产物的宿主细胞蛋白的某些动力学。进行高级液相色谱/质谱(LC/MS)以检测并监测伴随细胞培养物所产生的肽体(peptibody)的大肠杆菌HCP(S本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组宿主细胞，其中细胞经修饰以相对于未修饰的细胞中磷脂酶表达水平减少磷脂酶表达水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.27 US 62/126,213;2016.02.23 US 62/298,8691.重组宿主细胞，其中细胞经修饰以相对于未修饰的细胞中磷脂酶表达水平减少磷脂酶表达水平。2.根据权利要求1所述的宿主细胞，其中修饰的细胞不表达任何可检测的磷脂酶。3.根据权利要求1或2所述的宿主细胞，其中细胞还包含外源目的蛋白。4.根据权利要求1-3中任一项所述的宿主细胞，其中所述细胞包含改变的磷脂酶基因并且表达的磷脂酶不能够与目的蛋白结合。5.根据权利要求1-4中任一项所述的宿主细胞，其中所述细胞包含改变的磷脂酶基因并且表达的磷脂酶没有可检测的酯酶活性。6.根据权利要求1-5中任一项所述的宿主细胞，其中细胞产生结合蛋白A的级分，已经对所述级分消除磷脂酶蛋白或其变体。7.根据权利要求1-6中任一项所述的宿主细胞，其中细胞产生结合蛋白A的级分，所述级分没有可检测的磷脂酶蛋白或其变体。8.根据权利要求1-7中任一项所述的宿主细胞，其中细胞产生结合蛋白A的级分，所述级分没有可检测的酯酶活性。9.根据权利要求1-8中任一项所述的宿主细胞，其中细胞能够产生纯化之前基本上不含结合型磷脂酶的外源表达的目的蛋白。10.根据权利要求1-9中任一项所述的宿主细胞，其中目的蛋白是多亚基蛋白。11.根据权利要求1-10中任一项所述的宿主细胞，其中目的蛋白选自抗体重链、抗体轻链、抗原结合片段和Fc-融合蛋白。12.根据权利要求1-11中任一项所述的宿主细胞，其中磷脂酶包含选自表1中氨基酸序列的氨基酸序列。13.根据权利要求1-12中任一项所述的宿主细胞，其中磷脂酶包含磷脂酶B样蛋白(PLBD2)或其变体。14.根据权利要求1-13中任一项所述的宿主细胞，其中细胞包含PLBD2蛋白的片段。15.根据权利要求1-14中任一项所述的宿主细胞，其中细胞包含无功能的PLBD2蛋白。16.根据权利要求1-15中任一项所述的宿主细胞，其中细胞包含不能够展示酯酶活...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·巴拉科夫，M·格伦，陈刚，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US