自然杀伤细胞及其用途制造技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】自然杀伤细胞及其用途本专利技术申请主张2014年12月31日提交的美国临时专利申请No.62/098,560的权益，该专利申请的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。1.
本文提供了在包含干细胞动员因子的培养基中从造血干细胞或祖细胞群体产生自然杀伤(NK)细胞的方法，例如，在包含干细胞动员因子的培养基从来自胎盘细胞，例如，来自胎盘灌洗液(例如，人胎盘灌洗液)或其他组织，例如，脐带血或周围血液的造血干细胞或祖细胞开始产生NK细胞的三阶段方法。本文还提供了使用本文所述的胎盘灌洗液、NK细胞和/或NK祖细胞(例如)抑制肿瘤细胞增殖或抑制病原体感染，例如，病毒感染的方法。在某些实施方式中，通过本文所述的三阶段方法产生的NK细胞和/或NK祖细胞与一种或多种免疫调节化合物组合使用和/或用一种或多种免疫调节化合物处理。2.专利技术背景自然杀伤(NK)细胞是构成天然免疫系统的主要部分的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞对干扰素或者巨噬细胞源细胞因子响应而被激活。NK细胞的细胞毒活性很大程度上受两种类型的表面受体调控，所述两种受体可以认为是“激活受体”或“抑制受体”，尽管根据配体相互作...
【技术保护点】
产生包含自然杀伤细胞的细胞群体的方法，包括以下步骤：(a)在包含干细胞动员剂和血小板生成素(Tpo)的第一培养基中培养造血干细胞或祖细胞以产生第一细胞群体；(b)在包含干细胞动员剂和白介素‑15(IL‑15)并且缺乏Tpo的第二培养基中培养所述第一细胞群体以产生第二细胞群体；和(c)在包含IL‑2和IL‑15并且缺乏干细胞动员剂和LMWH的第三培养基中培养所述第二细胞群体以产生第三细胞群体；其中，所述第三细胞群体包含CD56+、CD3‑、CD16‑或者CD16+和CD94+或者CD94‑的自然杀伤细胞，并且其中至少80％的自然杀伤细胞是活的。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.31 US 62/098,5601.产生包含自然杀伤细胞的细胞群体的方法，包括以下步骤：(a)在包含干细胞动员剂和血小板生成素(Tpo)的第一培养基中培养造血干细胞或祖细胞以产生第一细胞群体；(b)在包含干细胞动员剂和白介素-15(IL-15)并且缺乏Tpo的第二培养基中培养所述第一细胞群体以产生第二细胞群体；和(c)在包含IL-2和IL-15并且缺乏干细胞动员剂和LMWH的第三培养基中培养所述第二细胞群体以产生第三细胞群体；其中，所述第三细胞群体包含CD56+、CD3-、CD16-或者CD16+和CD94+或者CD94-的自然杀伤细胞，并且其中至少80％的自然杀伤细胞是活的。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述造血干细胞为CD34+造血干细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述造血干细胞为胎盘造血干细胞。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述胎盘造血干细胞得自或可获得自人胎盘灌洗液。5.根据权利要求3所述的方法，其中所述胎盘造血干细胞得自或可获得自从人胎盘灌洗液分离的有核细胞。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述Tpo在所述第一培养基中以1ng/mL至50ng/mL的浓度存在。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述Tpo在所述第一培养基中以20ng/mL至30ng/mL的浓度存在。8.根据权利要求6所述的方法，其中所述Tpo在所述第一培养基中以约25ng/mL的浓度存在。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述IL-15在所述第二培养基中以1ng/mL至50ng/mL的浓度存在。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述IL-15在所述第二培养基中以10ng/mL至30ng/mL的浓度存在。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述IL-15在所述第二培养基中以约20ng/mL的浓度存在。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述IL-2在所述第三培养基中以10U/mL至10,000U/mL的浓度存在，并且所述IL-15在所述第三培养基中以1ng/mL至50ng/mL的浓度存在。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述IL-2在所述第三培养基中以300U/mL至3,000U/mL的浓度存在，并且所述IL-15在所述第三培养基中以10ng/mL至30ng/mL的浓度存在。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述IL-2在所述第三培养基中以约1,000U/mL的浓度存在，并且所述IL-15在所述第三培养基中以约20ng/mL的浓度存在。15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述第一培养基、第二培养基或者第三培养基的不明确组分中不包含所述Tpo、IL-2和IL-15。16.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中血清中不包含所述Tpo、IL-2和IL-15。17.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述干细胞动员剂是芳香烃受体抑制剂。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述芳香烃受体抑制剂是白藜芦醇。19.根据权利要求17所述的方法，其中所述芳香烃受体抑制剂是下式所示的化合物其中：G1选自N和CR3；G2、G3和G4独立地选自CH和N；条件是G3和G4中至少1个为N；条件是G1和G2不都是N；L选自--NR5a(CH2)0-3--、--NR5aCH(C(O)OCH3)CH2--、--NR5a(CH2)2NR5b--、--NR5a(CH2)2S--、--NR5aCH2CH(CH3)CH2--、--NR5aCH2CH(OH)--和--NR5aCH(CH3)CH2--；其中R5a和R5b独立地选自氢和C1-4烷基；R1选自氢、苯基、苯硫基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、异喹唑基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩、嘧啶基、1H-吡唑基、吡啶基、1H-咪唑基、吡咯烷基、吡嗪基、哒嗪基、1H-吡咯基和噻唑基；其中R1的所述苯基、苯硫基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、异喹唑基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩、嘧啶基、1H-吡唑基、吡啶基、1H-咪唑基、吡咯烷基、吡嗪基、哒嗪基、1H-吡咯基或噻唑基可以被1-3个基团任选地取代，所述基团独立地选自氰基、羟基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、羟基、氨基、--C(O)R8a、--S(O)0-2R8a、--C(O)OR8a和--C(O)NR8aR8b；其中R8a和R8b独立地选自氢和C1-4烷基；条件是R1和R3不都是氢；R2选自--S(O)2NR6aR6b、--NR9aC(O)R9b、--NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、苯硫基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-氧代咪唑烷基、1H-吡唑基、2-氧-2,3-二氢-1H-苯并咪唑基和1H-吲唑基；其中R6a、R6b和R6c独立地选自氢和C1-4烷基；其中R2所述的苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、苯硫基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-氧代咪唑烷基、1H-吡唑基、2-氧-2,3-二氢-1H-苯并咪唑基或1H-吲唑基被1-3个基团任选地取代，所述基团独立地选自羟基、卤素、甲基、甲氧基、氨基、--O(CH2)nNR7aR7b、--S(O)2NR7aR7b、--OS(O)2NR7aR7b和--NR7aS(O)2R7b；其中R7a和R7b独立地选自氢和C1-4烷基；R3选自氢、C1-4烷基和联苯基；和R4选自C1-10烷基、丙-1-烯-2-基、环己基、环丙基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧杂环丁烷-3-基、二苯甲基、四氢-2H-吡喃-3-基、四氢-2H-吡喃-4-基、苯基、四氢呋喃-3-基、苄基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基和1-(1-(2-氧-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基；其中所述烷基、环丙基、环己基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧杂环丁烷-3-基、氧杂环丁烷-2-基、二苯甲基、四氢-2H-吡喃-2-基、四氢-2H-吡喃-3-基、四氢-2H-吡喃-4-基、苯基、四氢呋喃-3-基、四氢呋喃-2-基、苄基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-氧-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可以被1-3个基团任选地取代，所述基团独立地选自羟基、C1-4烷基和卤代-C1-4烷基；或其盐。20.根据权利要求15所述的方法，其中所述芳香烃受体抑制剂是StemRegenin-1(SR-1)(4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-异丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚)。21.根据权利要求17所述的方法，其中所述芳香烃受体抑制剂是化合物CH223191(1-甲基-N-[2-甲基-4-[2-(2-甲基苯基)二氮烯基]苯基-1H-吡唑-5-羧酰胺]。22.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述干细胞动员剂为嘧啶并(4,5-b)吲哚衍生物。23.根据权利要求22的方法，其中所述嘧啶并(4,5-b)吲哚衍生物是下述的一个或多个：或其盐或前药，其中：Z为1)-P(O)(OR<1>)(OR<1>)，2)-C(0)OR<1>，3)-C(0)NHR<1>，4)-C(0)N(R)R<1>，5)-C(0)R<1>，6)-CN，7)-SR，8)-S(0)2NH2，9)-S(0)2NHR<1>，10)-S(0)2N(R)R<1>，11)-S(0)R<1>，12)-S(0)2R<1>，13)-L，14)-苄基，其被1、2或3个R<A>或R<1>取代基任选地取代，15)-L-杂芳基，其被一个或多个连接在L和杂芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，16)-L-杂环基，其被一个或多个连接在L和杂环基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，17)-L-芳基，其被一个或多个连接在L和杂芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，18)-杂芳基，其被一个或多个R<A>或R<1>取代基任选地取代，或19)-芳基，其被一个或多个R<A>或R<1>取代基任选地取代，并且其中，如果其尚不存在的话，则每个取代基任选地连接至L基团，并且其中当(R<1>)和R<1>连接至氮原子时，任选地它们与所述氮原子连接在一起以形成3-7元环，所述3-7元环任选地包含一个或多个选自N、O和S的其他杂原子，其被一个或多个R<1>或者R<A>任选地取代；W为1)-H，2)-卤素，3)-OR<1>，4)-L-OH，5)-L-OR<1>，6)-SR<1>，7)-CN，8)-P(0)(OR<1>)(OR<1>)，9)-NHR<1>，10)-N(R<1>)R<1>，11)-L-NH2，12)-L-NHR<1>，13)-L-N(R<1>)R<1>，14)-L-SR<1>，15)-L-S(0)R<1>，16)-L-S(0)2R<1>，17)-L-P(0)(OR<1>)(OR<1>18)-C(0)OR<1>，19)-C(0)NH2，20)-C(0)NHR<1>，21)-C(0)N(R<1>)R<1>，22)-NHC(0)R<1>，23)-NR1C(0)R<1>，-NHC(0)0R<1>，-NR1C(0)0R<1>，-0C(0)NH2，-0C(0)NHR<1>，-0C(0)N(R)R<1>，-0C(0)R<1>，-C(0)R<1>，-NHC(0)NH2，-NHC(0)NHR<1>，-NHC(0)N(R)R<1>，-NRC(0)NH2，-NRC(0)NHR<1>，-NRC(0)N(R)R<1>，-NHS(0)2R<1>，-NRS(0)2R<1>，-S(0)2NH2，-S(0)2NHR<1>，-S(0)2N(R)R<1>，-S(0)R<1>，-S(0)2R<1>，-0S(0)2R1，-S(0)20R<1>，-苄基，其被1、2或3个R<A>或R<1>取代基任选地取代，-L-杂芳基，其被一个或多个连接在L和杂芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，-L-杂环基，其被一个或多个连接在L和杂环基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，-L-芳基，其被一个或多个连接在L和芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，-L-NR<1>(R<1>)，-L-)2NR<1>，-L-(N(R1)-L)n-N(R1)R1，-L-(N(R<1>)-L)n-杂芳基，其被一个或多个连接在L和杂芳基基团中任一个或两者上R<A>或R<1>任选地取代，-L-(N(R<1>)-L)n-杂环基，其被一个或多个连接在L和杂环基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>任选地取代，-L-(N(R<1>)-L)n-芳基，其被一个或多个连接在L和芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>任选地取代，-0-L-N(R)R<1>，-0-L-杂芳基，其被一个或多个连接在L和杂芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>任选地取代，-0-L-杂环基，其被一个或多个连接在L和杂环基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>任选地取代，-0-L-芳基，其被一个或多个连接在L和芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>任选地取代，-0-L)2-NR<1>，-0-L-(N(R)-L)n-N(R)R<1>，-0-L-(N(R<1>)-L)n-杂芳基，其被一个或多个连接在L和杂芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>任选地取代，-0-L-(N(R<1>)-L)n-杂环基，其被一个或多个连接在L和杂环基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>任选地取代，-0-L-(N(R<1>)-L)n-芳基，其被一个或多个R<A>或R<1>取代基任选地取代，-S-L-杂芳基，其被一个或多个R<A>或R<1>取代基任选地取代，-S-L-杂环基，其被一个或多个R<A>或R<1>取代基任选地取代，-S-L-芳基，其被一个或多个连接在L和芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，-S-L)2NR1，-S-L-(N(R1)-L)"-N(R1)R1，-S-L-(N(R<1>)-L)n-杂芳基，其被一个或多个R<A>取代基任选地取代、-S-L-(N(R<1>)-L)n-杂环基，其被一个或多个R<A>取代基任选地取代、-S-L-(N(R<1>)-L)n-芳基，其被一个或多个R<A>取代基任选地取代，-NR<1>(R<1>)，-(N(R1)-L)n-N(R1)R1，-N(R1)L)2-NR1，76)-(N(R1)-L)"-N(R1)RA，77)-(N(R<1>)-L)n-杂芳基，其被一个或多个R<A>或R<1>取代基任选地取代，78)-(N(R<1>)-L)n-杂环基，其被一个或多个R<A>或R<1>取代基任选地取代，79)-(N(R<1>)-L)n-芳基，其被一个或多个R<A>或R<1>取代基任选地取代，80)-杂芳基-杂芳基，其被一个或多个R<A>取代基任选地取代，或81)-芳基，其被一个或多个R<A>取代基任选地取代，并且其中，如果其尚不存在的话，则每个取代基任选地连接至L基团，并且其中当在相同氮原子上存在两个R<1>取代基时，那么每个R<1>取代基独立地选自此后所述的R<1>值列表，并且其中n是等于0、1、2、3、4或5中任一个的整数，并且其中当(R<1>)和R<1>连接至氮原子时，任选地它们与氮原子连接在一起以形成3-7元环，所述环任选地包含一个或多个选自N、0和S的其他杂原子，所述环被一个或多个R<1>或者R<A>任选地取代；L为1)-Ci-6烷基，2)-C2-6烯基，3)-C2-6炔基，4)-C3-7环烷基，5)-C3-7环烯基，6)杂环基，7)-Ci-6烷基-C3-7环烷基，8)-Ci-6烷基-杂环基，9)芳基，或10)杂芳基，并且其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、芳基和杂芳基基团分别独立地被一个或两个R<A>取代基任选地取代；Ri为1)-H，2)-C1-6烷基，3)-C2-6烯基，4)-C2-6炔基，5)-C3-7环烷基，6)-C3-7环烯基，7)-C1-5全氟化的，8)-杂环基，9)-芳基，10)-杂芳基，11)-苄基，或12)5-[(3aS,4S,6aR)-2-氧代六氢-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基]戊酰基，并且其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、全氟烷基、杂环基、芳基、杂芳基和苯甲基基团分别独立地被1、2或3个R<A>或R<1>取代基任选地取代；R2为：1)-H，2)-C1-6烷基，3)-SR，4)-C(0)R1，5)-S(0)R1，6)-S(0)2R<1>，7)-苄基，其被1、2或3个R<A>或R<1>取代基任选地取代，8)-L-杂芳基，其被一个或多个连接在L和杂芳基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，9)-L-杂环基，其被一个或多个连接在L和杂环基基团中任一个或两者上的R<A>或R<1>取代基任选地取代，10)-L...
【专利技术属性】
技术研发人员：布莱恩·墨菲，瓦内萨·沃斯基纳里安贝尔斯，安德里亚·诺德伯格，基思·威尔逊，康琳，
申请(专利权)人：人类起源公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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