一种朝鲜蓟天然抗氧化剂的提取方法，其特征在于，包括下列步骤： 步骤１．称取１００ｇ干粉原料置于１０００ｍｌ ７５％乙醇溶液的索氏提取器中，于沸水浴中提取，至索氏提取器内的溶液近乎无色为止； 步骤２．往提取后的约１０００ｍｌ溶液中加入４００ｍｌ的氯仿液进行萃取，分层后，弃去下层的氯仿相，保留水相； 步骤３．往上次萃取后的水相中加入４００ｍｌ的乙酸乙酯液进行萃取，分层后，弃去上层的乙酸乙酯相，保留水相； 步骤４．往第二次萃取后的水相中加入４００ｍｌ的正丁醇液进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留正丁醇相； 步骤５．将萃取后的正丁醇溶液置于Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０的凝胶柱上，用７０％的甲醇洗脱，自动部份收集器收集，得６０个分离试管，分为３个不同的组分，分别进行硅胶板分离鉴定和抗氧化活性测定； 步骤６．将三种组分的分离液各自合并，浓缩５～１０倍，用０．４５μｍ膜过滤后，进入ＨＰＬＣ ９．４×２５０ｍｍ Ｚｏｒｂａｘ ＯＤＳ制备柱分离； 步骤７．得到成品：朝鲜蓟天然抗氧化剂。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然抗氧化剂提取技术，特别是一种朝鲜蓟提取物作为天然抗氧化剂的新用途及其提取方法。
技术介绍
朝鲜蓟(Cynara scolymus L.)，别名洋蓟，洋百合，法国百合、荷花百合。菊科多年生大型草本，植株高达1.5米，叶大、羽状深裂，夏季在茎顶着生直径为15厘米左右的头状花，总苞片卵形呈覆瓦状排列。花苞可食用。富含蛋白质(3.6％)、糖类(16％)、维生素A、B、C及Ca、P、Fe、Na等元素，营养很丰富。研究表明朝鲜蓟叶含有多种活性成份。如咖啡酰奎宁酸类衍生物(包括绿原酸(chlorogenic acid)、菜蓟素(cynarin)、1，5二咖啡酰奎宁酸、3，5二咖啡酰奎宁酸等)和黄酮类化合物(包括木犀草素(cynaroside)、菜蓟苦素(cynaropicrin)、藤黄菌素(luteolin)等)。中草药药用成分研究表明，上述成分具有1)保护和恢复肝脏机能；2)降低胆固醇和血脂浓度，促进脂肪的消化；3)预防疾病、增强免疫力、延缓衰老等保健作用。然而，朝鲜蓟叶上述成分除具有以上活性外，还具有其它方面的有价值的活性和用途。用DPPH·自由基分析法，即通过检测样品对自由基DPPH·的清除能力来评价该物质的抗氧化能力的方法去检测朝鲜蓟提取物的抗氧化性。其抗氧化能力用抑制率表示，抑制率越大，抗氧化能力越强。对朝鲜蓟提取物分离成分的抗氧化性能进行测定，并与天然抗氧化剂维生素C(Vc)和化学合成抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)的50％时的浓度(IC50)值进行比较，朝鲜蓟提取物各分离成分的抗氧化性能均比两对照Vc和TBHQ高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种朝鲜蓟提取物作为天然抗氧化剂的新用途及其提取方法。为达到上述目的，本专利技术的技术解决方案是提供一种朝鲜蓟天然抗氧化剂的提取方法，其包括下列步骤步骤1.称取100g干粉原料置于1000ml75％乙醇溶液的索氏提取器中，于沸水浴中提取，至索氏提取器内的溶液近乎无色为止；步骤2.往提取后的约1000ml溶液中加入400ml的氯仿液进行萃取，分层后，弃去下层的氯仿相，保留水相；步骤3.往上次萃取后的水相中加入400ml的乙酸乙酯液进行萃取，分层后，弃去上层的乙酸乙酯相，保留水相；步骤4.往第二次萃取后的水相中加入400ml的正丁醇液进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留正丁醇相；步骤5.将萃取后的正丁醇溶液置于Sephadex LH-20的凝胶柱上，用70％的甲醇洗脱，自动部份收集器收集，得60个分离试管，分为3个不同的组分，分别进行硅胶板分离鉴定和抗氧化活性测定；步骤6.将三种组分的分离液各自合并，浓缩5～10倍，用0.45μm膜过滤后，进入HPLC9.4×250mm Zorbax ODS制备柱分离；步骤7.得到成品朝鲜蓟天然抗氧化剂。所述的提取方法，其步骤1中，于沸水浴中提取的时间为9.5～10.5小时之间。所述的提取方法，其步骤5中，所述分为3个不同的组分，是24～35管为第一组分，15～21管为第二组分，37～59管为第三组分。所述的提取方法，其步骤7得到的天然抗氧化剂成品分别是，第一组分得到1-咖啡酰奎宁酸(1-CA)、3-咖啡酰奎宁酸(3-CA)；第二组分得到藤黄菌素-7-芸香糖苷(LTR)；第三组分得到1，3-二咖啡酰奎宁酸(1，3-DCA)、3，5-二咖啡酰奎宁酸(3，5-DCA)、1，5-二咖啡酰奎宁酸(1，5-DCA)、3，4-二咖啡酰奎宁酸(3，4-DCA)。所述的提取方法，其步骤7得到天然抗氧化剂成品后，需对朝鲜蓟提取物的抗氧化性进行测定。所述的提取方法，其所述抗氧化性测定，方法是精确吸取2mL2×10-4mol/L的DPPH·溶液与2mL朝鲜蓟分离样品溶液混合均匀后，以溶剂为对照，用分光光度计测定该混合液在波长517nm处的吸光值(ABS)；将所得数据代入下列公式计算其抑制率抑制率＝×100％其中Ai为待测样品液与等体积的DPPH·溶液混合后在波长517nm处的ABS值；Aj为待测样品液与等体积的溶剂混合后在波长517nm处的ABS值；Ac为DPPH·溶液与等体积的溶剂混合后在波长517nm处的ABS值。一种朝鲜蓟天然抗氧化剂，包括1-咖啡酰奎宁酸、3-咖啡酰奎宁酸(绿原酸)、1，3-二咖啡酰奎宁酸、藤黄菌素-7-芸香糖苷、3，5-二咖啡酰奎宁酸、1，5-二咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸。本专利技术朝鲜蓟干粉提液工艺流程，主要得到抗氧化提取物7种，此7种具有抗氧化活性的天然提取物与其它天然和合成抗氧化剂(Vc和TBHQ)比较具有明显优势，分别是Vc的1.2～7倍、TBHQ的2～10倍。附图说明图1本专利技术朝鲜蓟提取物活性成分分离制备图。具体实施例方式实施例1分离提取方法，如附图1所示步骤1.索氏提取称取100g干粉原料置于1000ml75％乙醇溶液的索氏提取器中，于沸水浴中提取10小时左右，至索氏提取器内的溶液近乎无色为止。步骤2.第一次萃取分离往提取后的约1000ml溶液中加入400ml的氯仿液进行萃取，分层后，弃去下层的氯仿相，保留水相。步骤3.第二次萃取分离往上次萃取后的水相中加入400ml的乙酸乙酯液进行萃取，分层后，弃去上层的乙酸乙酯相，保留水相。步骤4.第二次萃取分离往第二次萃取后的水相中加入400ml的正丁醇液进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留正丁醇相。步骤5.Sephadex LH-20柱层析分离将萃取后的正丁醇溶液置于Sephadex LH-20的凝胶柱上，用70％的甲醇洗脱，自动部份收集器收集，得60个分离试管，分别进行硅胶板分离鉴定和抗氧化活性测定，分为3个不同的组分24～35管为第一组分，15～21管为第二组分，37～59为第三组分。步骤6.制备柱分离将三种组分的分离液各自合并，浓缩5～10倍，0.45μm膜过滤后，进入HPLC9.4×250mm Zorbax ODS制备柱分离，得到天然抗氧化剂成品。其中24～35管的第一组分得到1-咖啡酰奎宁酸(1-CA)、3-咖啡酰奎宁酸(3-CA)；15～21管的第二组分得到藤黄菌素-7-芸香糖苷(LTR)；37～59管的第三组分得到1，3-二咖啡酰奎宁酸(1，3-DCA)、3，5-二咖啡酰奎宁酸(3，5-DCA)、1，5-二咖啡酰奎宁酸(1，5-DCA)、3，4-二咖啡酰奎宁酸(3，4-DCA)。步骤7.朝鲜蓟提取物的抗氧化性的测定精确吸取2mL2×10-4mol/L的DPPH·溶液与2mL样品溶液混合均匀后，以溶剂为对照，用分光光度计测定该混合液在波长517nm处的吸光值(ABS)。将所得数据代入下列公式计算其抑制率，从而评价其抗氧化能力。抑制率＝×100％其中Ai为待测样品液与等体积的DPPH·溶液混合后在波长517nm处的ABS值；Aj为待测样品液与等体积的溶剂混合后在波长517nm处的ABS值；Ac为DPPH·溶液与等体积的溶剂混合后在波长517nm处的ABS值。对朝鲜蓟提取物分离成分的抗氧化性能，经测定各分离成分对DPPH·自由基的抑制率为50％时的浓度(IC50)，并与天然抗氧化剂维生素C(Vc)和化学合成抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)的IC50值进行比较。如表1。表1样品IC50(mg/ml)1-CA0.083-CA0.0本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张洪勋，朱显峰，罗国添，
申请(专利权)人：昆明英之源农业科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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