基于体外反应体系筛选黄曲霉SUMO化靶蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及基于体外反应体系筛选黄曲霉SUMO化靶蛋白的方法，该体系由SUMO化反应溶液体系组成，其中包含了原核表达的黄曲霉SUMO化酶系中的修饰分子AfSumO，SUMO E1活化酶AfAosA‑AfUbaB，SUMO E2结合酶AfUbcI，SUMO E3连接酶以及待检测的蛋白或药物。利用该体系一方面可以快速鉴定/筛选影响黄曲霉SUMO化修饰过程的药物分子或小分子化合物；同时利用该体系在体外方便快速的检测某种蛋白是否能被黄曲霉的SUMO化体系修饰，进而鉴定/筛选潜在的SUMO化靶标蛋白。

Method for screening target protein of Aspergillus flavus SUMO based on in vitro reaction system

The invention relates to a method for in vitro screening of aflatoxin SUMO reaction system of target protein based on the system by the SUMO of the reaction solution system, which contains the prokaryotic expression of Aspergillus flavus SUMO enzymes in the modified molecular AfSumO, SUMO E1 AfAosA activating enzyme AfUbaB, SUMO E2 synthase AfUbcI, SUMO E3 ligase and proteins or drugs to be tested. By using this system, one can quickly identify / screening drug molecules influence aflatoxin SUMO modification process or small molecular compounds; at the same time using the system of in vitro rapid convenient detection of a protein can be modified SUMO system of Aspergillus flavus, screening potential SUMO target protein and identification.

【技术实现步骤摘要】
基于体外反应体系筛选黄曲霉SUMO化靶蛋白的方法
本专利技术属于微生物学领域和生物
，具体涉及基于体外反应体系筛选黄曲霉SUMO化靶蛋白的方法。
技术介绍
许多可逆的翻译后修饰如磷酸化、糖基化、泛素化、SUMO（smallubiquitin-relatedmodifier）化等，被认为可能是联接遗传背景、环境因子两大因素的重要桥梁之一，介导两者的复杂交互作用，最终影响生物的性状。作为一种非常重要的蛋白翻译后修饰，SUMO化修饰可能会影响靶蛋白的稳定性、细胞定位和蛋白活性。SUMO蛋白首先在酿酒酵母里被发现，SUMO化过程和泛素化过程很类似。首先由E1活化酶Aos1-Uba2活化SUMO，之后由E1转移到E2结合酶Ubc9的Cys残基上，最后Ubc9在E3连接酶的帮助下把SUMO转移到靶蛋白的Lys残基上，完成SUMO化修饰。目前已知SUMO化的E1和E2都是唯一的，但E3酶一般有多个，不同的E3具有不同的底物特异性。目前国内外对SUMO化修饰的研究正开展得如火如荼，但曲霉属的生物只有构巢曲霉和黄曲霉（Aspergillusflavus）有相关报道。我们在黄曲霉中发现AfsumO本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黄曲霉SUMO化酶系的体外反应体系，其特征在于：该体系由SUMO化反应溶液体系组成，其中包含了由修饰分子AfSumO、SUMO E1活化酶AfAosA及AfUbaB、SUMO E2结合酶AfUbcI、SUMO E3连接酶分别经过原核表达后得到的重组蛋白，以及待检测的蛋白或药物。

【技术特征摘要】
1.一种黄曲霉SUMO化酶系的体外反应体系，其特征在于：该体系由SUMO化反应溶液体系组成，其中包含了由修饰分子AfSumO、SUMOE1活化酶AfAosA及AfUbaB、SUMOE2结合酶AfUbcI、SUMOE3连接酶分别经过原核表达后得到的重组蛋白，以及待检测的蛋白或药物。2.根据权利要求1所述的黄曲霉SUMO化酶系的体外反应体系，其特征在于：所述的SUMO化反应溶液体系含有如下成分：pH7.0-7.4、10-100mMHEPES，0-300mMNaCl，5-20mMMgCl2，0-0.5mMdithiothreitol，0-50μg/mLbovineserumalbuminFractionV，1-20mMATP，0.1-50μg/mL重组AfSumO，0.1-50μg/mL重组AfAosA，0.1-50μg/mL重组AfUbaB，0.1-50μg/mL重组AfUbcI以及0.1-50μg/mL重组SUMOE3连接酶。3.根据权利要求1所述的黄曲霉SUMO化酶系的体外反应体系，其特征在于：所述的原核表达的黄曲霉SUMO化酶系中的修饰分子AfSumO，其编码序列选自：（1）核苷酸编码序列SEQIDNo.1，蛋白序列SEQIDNo.2；或（2）在上述（1）限定的序列中通过密码子简并取代，或一个或几个氨基酸取代、缺失或插入，且具有其对应体内功能的由（1）限定序列所衍生的蛋白或多肽。4.根据权利要求1所述的黄曲霉SUMO化酶系的体外反应体系，其特征在于：所述的SUMOE1活化酶AfAosA及AfUbaB，其编码序列选自：（1）核苷酸序列SEQIDNo.3和SEQIDNo.4，分别对应的编码蛋白序列SEQIDNo.5和SEQIDNo.6；或（2）在上述（1）限定的序列中通过密码子简并取代，或一个或几个氨基酸取代、缺失或插入，且具有其对应体内功能的由（1）限定序列所衍生的蛋白或多肽。5.根据权利要求1所述的黄曲霉SUMO化酶系的体外反应体系，其特征在于：所述的SUMOE2结合酶AfUbcI，其编码序列选自：（1）核苷酸序列SEQIDNo.7，其编码的蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂鑫怡，李玲，岳跃威，汪世华，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建,35