一种用于检测胞内劳森菌的RPA引物及其检测方法技术
A RPA primer for detecting lawsoniaintracellularis and its detection method
The invention discloses a RPA primer for detecting lawsoniaintracellularis, the primer of RPA nucleotide sequence of SEQ ID and SEQ NO.1 ID NO.2 shows, the RPA primer specificity, high sensitivity, accurate detection results. The invention also provides a RPA method for the detection of lawsoniaintracellularis, the method includes primer synthesis and sample DNA extraction, RPA amplification and PCR product analysis and other steps, the detection method has the advantages of simple operation, good stability, effective detection and identification of porcine proliferative enteritis provides a low cost, a rapid and specific method of field detection.
【技术实现步骤摘要】
一种用于检测胞内劳森菌的RPA引物及其检测方法
本专利技术属于分子生物学检测领域，具体涉及一种用于检测胞内劳森菌的RPA引物及其检测方法。
技术介绍
胞内劳森菌(Lawsoniaintracellularis，LI)引起猪的增生性肠炎，该病潜伏期较长，感染动物临床通常不表现明显症状，容易通过引种而将该病引入健康猪群，给疫病的诊断和防控带来很大困难。对复杂的疫病进行快速的现场诊断，能够为疫病的有效防控争取宝贵时间，最大限度地减少损失和疫病扩散的风险。常规的聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction，PCR)技术以其能够检测痕量的病原DNA而一直被作为诊断多种疫病的金标方法。但PCR需要特殊的热循环设备、低温保存的试剂和避免交叉污染的技术操作要求，从而限制了PCR在现场诊断中的应用。重组酶聚合酶扩增(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)技术是由英国公司TwistDxInc开发的一种可以替代传统PCR的新型核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶(Recombinase)...
【技术保护点】
一种用于检测胞内劳森菌的RPA引物，其特征在于，所述RPA引物的核苷酸序列为：上游引物：5’‑AAATCCAAAAGTCGAGTATCTAACTGCGG‑3’(SEQ ID NO.1)；下游引物：5’‑TAAAAACCCAGAGCAAAATCGTGATACCAGGCG‑3’(SEQ ID NO.2)。
【技术特征摘要】
1.一种用于检测胞内劳森菌的RPA引物，其特征在于，所述RPA引物的核苷酸序列为：上游引物：5’-AAATCCAAAAGTCGAGTATCTAACTGCGG-3’(SEQIDNO.1)；下游引物：5’-TAAAAACCCAGAGCAAAATCGTGATACCAGGCG-3’(SEQIDNO.2)。2.根据权利要求1所述的RPA引物，其特征在于，所述上游引物的5’端采用羧基荧光素FAM进行标记，所述下游引物的5’端采用biotin进行标记。3.权利要求1或2所述的RPA引物在制备检测胞内劳森菌试剂中的应用。4.含有权利要求1或2所述的RPA引物的试剂盒。5.权利要求4所述的试剂盒在检测胞内劳森菌中的应用。6.一种用于检测胞内劳森菌的RPA方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)引物合成：合成权利要求1或2所述的RPA引物；(2)DNA模板提取：提取待检测样品中的DNA；(3)RPA扩增反应：以步骤(2)提取的DNA为模板，采用步骤(1)中合成的RPA引物...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵军，王川庆，吴艳阳，李永涛，常洪涛，陈陆，高冬生，王永生，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南,41
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