系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法技术方案

一种系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法，包括以下步骤：设置系统性红斑狼疮组、风湿性关节炎组及正常对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的全血样品，分别分离得到外周血单个核细胞；分别提取各样品中单个核细胞中的总RNA；进行核糖核酸标记及芯片杂交；扫描杂交后的芯片的荧光强度，分析获得的芯片扫描结果，筛选出系统性红斑狼疮组与正常对照组、系统性红斑狼疮组和风湿性关节炎组中差异表达的环状RNA。上述系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法，获得系统性红斑狼疮异常表达的circRNA，可作为系统性红斑狼疮潜在的诊断标志物，同时还可以为系统性红斑狼疮的发病机制的研究提供充足的理论依据。

Treatment of systemic lupus erythematosus with annular RNA

Method for treating systemic lupus erythematosus RNA ring, which comprises the following steps: setting of systemic lupus erythematosus group, rheumatoid arthritis group and normal control group, each group including a number of different human body is out of human whole blood samples, were isolated from peripheral blood mononuclear cells; total RNA was extracted from mononuclear cells in all samples; RNA labeling and hybridization; fluorescence scanning after hybridization of the chip, the chip scanning analysis results, selected cyclic difference of RNA expression in systemic lupus erythematosus group and normal control group, systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis in the group. The method for treating the systemic lupus erythematosus cyclic RNA, abnormal expression of circRNA in systemic lupus erythematosus, systemic lupus erythematosus can be used as potential markers for diagnosis, provide sufficient theoretical basis research and also for the pathogenesis of systemic lupus erythematosus.

【技术实现步骤摘要】
系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法
本专利技术涉及一种获取作为中间结果的系统性红斑狼疮基因信息，特别是涉及一种系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法。
技术介绍
系统性红斑狼疮(Systemiclupuserythematosus，SLE)是一种典型自身免疫介导的，以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病。血清中出现以抗核抗体为代表的多种自身抗体和多器官受累是其两个主要临床特征。该病临床表现复杂，病程迁延反复，加重与缓解交替，且具有明显的性别倾向，80-90％的患者为女性，其中以20至40岁育龄期妇女多见。SLE患者在全世界范围内不断增长，在我国SLE患病率约为1/1000，患病总人数高达100万以上。尽管免疫抑制剂的使用和新的治疗干预使得SLE患者10年生存率提高了，但仍有一些SLE患者因为活动的疾病和内脏器官的严重受损而发生死亡。最新资料显示患SLE后5年内出现肾功能衰竭或者死亡的占15％。此外，复发和个体化治疗也是疾病控制过程中临床医生所必须面临的一个严峻问题。究其根本原因，我们对SLE的免疫功能紊乱和发病关键环节尚不清楚。目前，SLE诊断的必要条件是抗核抗体，然而不同实验室抗核抗体检查的结果可能有所差异。此外，尽管抗双链DNA(double-strandedDNA，ds-DNA)对诊断狼疮有很强的特异性，但根据不同的检验方法，抗ds-DNA不一定有高度的敏感性并且有时并不能预测疾病的活动性。有些学者就认为自身抗体形成或补体激活等指标实际上并不能对SLE的严重程度及预后进行预测。由此可见，SLE仍没有一种生物标记物被证实和广泛接受。因此，迫切需要寻求一种可靠、特异性强、灵敏度高的生物标志物用于SLE的早期确诊和疾病进程监测以及治疗评价。
技术实现思路
基于此，有必要针对上述问题，提供一种系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法。一种系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法，包括以下步骤：设置系统性红斑狼疮组、风湿性关节炎组及正常对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的全血样品，分别分离得到外周血单个核细胞；分别提取各样品中单个核细胞中的总RNA；进行核糖核酸标记及芯片杂交；扫描杂交后的芯片的荧光强度，分析获得的芯片扫描结果，筛选出系统性红斑狼疮组与正常对照组、系统性红斑狼疮组和风湿性关节炎组中差异表达的环状RNA。在其中一个实施例中，在进行核糖核酸标记步骤之前，还包括：检测各样品中的总RNA的浓度及纯度，以及检测各样品中的总RNA的完整性。在其中一个实施例中，使用紫外吸收测定法检测各样品中总RNA的浓度及总质量。在其中一个实施例中，使用变性琼脂糖凝胶电泳法检测各样品中的总RNA的完整性。在其中一个实施例中，根据Ficoll密度梯度离心法，使用淋巴细胞分离液分离出各样品中的单个核细胞。在其中一个实施例中，利用TRIzol试剂提取各样品单个核细胞中的总RNA。在其中一个实施例中，设置系统性红斑狼疮组与正常对照组、系统性红斑狼疮组和风湿性关节炎组中扫描图像的荧光强度差异倍数大于2倍且符合统计学意义的环状RNA为系统性红斑狼疮组与正常对照组、系统性红斑狼疮组和风湿性关节炎组中差异表达的环状RNA。在其中一个实施例中，还包括运用生物信息学方法预测与差异表达的环状RNA相关的miRNA。在其中一个实施例中，利用TargetScan和miRanda软件预测与差异表达的环状RNA相关的miRNA。在其中一个实施例中，还包括采用RT-PCR验证差异表达的环状RNA。上述系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法，以系统性红斑狼疮患者，风湿性关节炎患者和健康志愿者的外周血为研究对象，应用表达芯片技术，获得系统性红斑狼疮异常表达的circRNA，可作为系统性红斑狼疮潜在的诊断标志物，同时还可以为系统性红斑狼疮的发病机制的研究提供充足的理论依据。然而，本专利技术的研究数据只是初步阶段，该图谱模型只能够作为后续分析诊断的参考依据，如何利用该表达谱还有待于进一步的医学研究，需要更多的样品数以及更深入的研究才有可能作为更进一步的参考依据。此外，引入类风湿关节炎患者作为疾病对照组，可以筛选出与类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)不同的生物标志物，而且所有各组样本进行等量混合后再进行芯片研究，可以减少个体差异带来的误差，减少实验次数，降低研究成本。附图说明图1为本专利技术一实施例中系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法的流程示意图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本说明书中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是用于限制本专利技术。本说明书所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术旨在通过对系统性红斑狼疮患者的环状RNA的表达水平发现其临床病理特征，以及新的可能的诊断生物标志物。如图1所示，本专利技术的一个实施例是，系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法，其包括如下步骤：设置系统性红斑狼疮组、风湿性关节炎组及正常对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的全血样品，分别分离得到外周血单个核细胞；分别提取各所述样品中单个核细胞中的总RNA；进行核糖核酸标记及芯片杂交；扫描杂交后的芯片的荧光强度，分析获得的芯片扫描结果，筛选出系统性红斑狼疮组与正常对照组、系统性红斑狼疮组和风湿性关节炎组中差异表达的环状RNA。又一个实施例是，一种系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法，其包括如下步骤。S110、设置系统性红斑狼疮组、风湿性关节炎组及正常对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的全血样品。例如，本专利技术各实施例采用的红斑狼疮组(SLE组)和风湿关节炎组(RA组)的全血样品收集2014年6月至2014年12月于深圳市福田人民医院香蜜湖分院住院患者，SLE患者和RA患者分别10例，且性别均满足：男性2例，女性8例。RA诊断依据为1987年修订的美国风湿病学会(AmericanRheumatismAssociation，ARA)RA诊断标准；SLE的诊断依据为1997年修订的美国风湿病学会SLE诊断标准，并且根据1992制定的SLE疾病活动指数(systemlupuserythematosusdiseaseactivityindex，SLEDAI)，所有SLE患者满足SLE疾病活动指数≥5。在患者使用大量糖皮质激素(1mg/kg/d)、细胞毒性药物和免疫抑制剂之前完成样品采集。正常对照组(NC组)选择同时期深圳市人民医院体检科的健康体检者，所有受检者均无相关疾病报告，满足男性2例，女性8例。各组基本信息见表1。需要说明的是，样品收集的方案与执行，符合人体实验伦理学标准，并经过获得暨南大学第二临床学院伦理委员会的批准。表1.各组基本情况例如，用EDTA管抗凝收集每组研究对象空腹时外周静脉血5ml。又如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：设置系统性红斑狼疮组、风湿性关节炎组及正常对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的全血样品，分别分离得到外周血单个核细胞；分别提取各样品中单个核细胞中的总RNA；进行核糖核酸标记及芯片杂交；扫描杂交后的芯片的荧光强度，分析获得的芯片扫描结果，筛选出系统性红斑狼疮组与正常对照组、系统性红斑狼疮组和风湿性关节炎组中差异表达的环状RNA。

【技术特征摘要】
1.一种系统性红斑狼疮环状RNA的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：设置系统性红斑狼疮组、风湿性关节炎组及正常对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的全血样品，分别分离得到外周血单个核细胞；分别提取各样品中单个核细胞中的总RNA；进行核糖核酸标记及芯片杂交；扫描杂交后的芯片的荧光强度，分析获得的芯片扫描结果，筛选出系统性红斑狼疮组与正常对照组、系统性红斑狼疮组和风湿性关节炎组中差异表达的环状RNA。2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，在进行核糖核酸标记步骤之前，还包括：检测各样品中的总RNA的浓度及纯度，以及检测各样品中的总RNA的完整性。3.根据权利要求2所述的处理方法，其特征在于，使用紫外吸收测定法检测各样品中总RNA的浓度及总质量。4.根据权利要求2所述的处理方法，其特征在于，使用变性琼脂糖凝胶电泳法检测各样品中的总RNA的完整性。5.根据权利要求1所述的处理方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴勇，喻祥琪，
申请(专利权)人：戴勇，喻祥琪，
类型：发明
国别省市：广东,44