The invention discloses an ultra-low temperature preservation method for the pollen of the beak orchid, which comprises powder collection, drying, freezing and thawing. The pollen dry when placed in breathable bag, desiccant isolation of pollen contamination and good permeability and has good drying effect; secondly, the invention reduces the concentration of glass DMSO solution in PVS2, the increase in the basis of the original composition of propylene glycol, PVS2, propylene glycol is a permeable and a kind of low toxic antifreeze. Therefore, the present invention provides an ultra-low temperature preservation method for the pollen of the proboscis orchid, which can effectively guarantee the pollen viability for a long time, is simple and easy, can be removed and thawed at any time according to the need for pollination, and has important practice and popularization significance in the breeding and production of the drill billed cymbidium.
【技术实现步骤摘要】
一种钻喙兰花粉的超低温保存方法
本专利技术属于超低温保存
,具体地,涉及一种钻喙兰花粉的超低温保存方法。
技术介绍
钻喙兰(Rynchostylisretusa)是兰科(Orchidaceae)树兰亚科(Epidendroideae)万代兰族(Vandeae)指甲兰亚族(Aeridinae)钻喙兰属(Rynchostylis)的一种附生型兰花,它花色淡雅且具芳香,小花密集,花序饱满而下垂,形似一条毛茸茸的狐狸尾巴,因此其商品被称为狐狸尾兰。钻喙兰主要分布于南亚、东南亚诸国以及我国的贵州和云南。钻喙兰具有很高的观赏价值,也是育种的好材料,但钻喙兰在育种中的利用率远不如同属下的海南钻喙兰((Rynchostylisgigantea)。目前在英国皇家园艺学会(RHS)上登录的以钻喙兰属植物为亲本之一的30个杂交属、326个杂交种中,只有很少的一部分是由钻喙兰与其近缘属下的种和品种之间杂交获得的。导致这个状况的原因之一就是钻喙兰的花粉不易保存。钻喙兰的花粉寿命很短,在离开植株体后自然条件存放的花粉其活力直线下降,12小时后花粉萌发率降至10%以下,而在杂交育种过程中,常会出现花期不遇的情况,给杂交育种工作带来很大的不便。兰科植物的花粉外包裹着类脂膜,因此花粉粒粘连成花粉块,而不同物种的花粉粒在大小、含水量等方面存在差异,导致不同种类的花粉在保存条件上也会有区别。目前尚没有关于钻喙兰花粉长期保存方法的报道,利用常规的兰科植物花粉保存方式,即将花粉块在无水氯化钙中干燥后置于-20℃冰箱中冷冻保存,我们发现钻喙兰的花粉在这样的保存条件下只能保持一段时间,约1个月以 ...
【技术保护点】
一种钻喙兰花粉的超低温保存方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.采粉和干燥:摘取新鲜花粉块,放入透气袋中密封,并将透气袋置于放有干燥剂的培养皿中,在0~4℃条件下放置1~3h;S2.冻存:将花粉块取出,放入冻存管中,加入预处理液,室温下静置10~45 min;然后将冻存管中的预处理液吸出,加入玻璃化溶液MPVS2,将冻存管投入液氮保存;所述玻璃化溶液MPVS2的成分为:30% (w/v)甘油、15% (w/v)乙二醇、7.5~10% (w/v)丙二醇、5~7.5% (w/v)DMSO,用含有0.4M蔗糖的BK无机盐储备液配制,pH为5.7;S3.解冻:将冻存管取出,解冻后将冻存管中原有的溶液吸出一半,并加入相应体积的冲洗液,静置5~10 min,如此重复2~4次。
【技术特征摘要】
1.一种钻喙兰花粉的超低温保存方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.采粉和干燥:摘取新鲜花粉块,放入透气袋中密封,并将透气袋置于放有干燥剂的培养皿中,在0~4℃条件下放置1~3h;S2.冻存:将花粉块取出,放入冻存管中,加入预处理液,室温下静置10~45min;然后将冻存管中的预处理液吸出,加入玻璃化溶液MPVS2,将冻存管投入液氮保存;所述玻璃化溶液MPVS2的成分为:30%(w/v)甘油、15%(w/v)乙二醇、7.5~10%(w/v)丙二醇、5~7.5%(w/v)DMSO,用含有0.4M蔗糖的BK无机盐储备液配制,pH为5.7;S3.解冻:将冻存管取出,解冻后将冻存管中原有的溶液吸出一半,并加入相应体积的冲洗液,静置5~10min,如此重复2~4次。2.根据权利要求1所述钻喙兰花粉的超低温保存方法,其特征在于,步骤S2所述玻...
【专利技术属性】
技术研发人员:谢佩吾,马锞,李汉文,李早文,伍爱萍,江南,
申请(专利权)人:东莞市农业科学研究中心,
类型:发明
国别省市:广东,44
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